促卵泡刺激素干预改善绵羊卵巢组织玻璃化冻存后异种移植的效果研究

背景:卵巢皮质片移植是无血管吻合移植,因此,提高卵巢组织对冻存-解冻和移植后缺血的耐受力是提高冻存后移植物卵泡存活和延长功能寿命的关键环节.目的:观察促卵泡刺激素在玻璃化冻存过程中对绵羊卵巢组织形态和功能的保存效果,为成人卵巢组织的冻存提供技术方法.方法:BALB/c品系雌性裸鼠随机分为3组.均行羊卵巢皮质片裸鼠异位移植:①新鲜移植对照组,取材后即移植.②玻璃化冻存移植组,采用玻璃化冻存解冻后移植,所用液体均未添加促卵泡刺激素.③添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组,采用冷冻液、解冻液和培养液均添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存后移植.移植后检测受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡数和发育状况,于移植后4周取移植卵巢进行组织学观察、并行血清雌二醇水平分析.结果与结论:含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比动情周期恢复率、每高倍视野卵泡计数差异均无显著性意义(P>0.05),卵泡计数高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05).移植后4周,含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组组织学观察见卵泡发育,未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组仅偶见原始卵泡.含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比血清雌二醇水平差异无显著性意义(P>0.05),显著高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P< 0.05).结果提示,在玻璃化液中加入促卵泡刺激素可提高冻存绵羊卵巢组织移植后卵泡存活率.     

FSH对胎儿卵巢组织玻璃化冻存及冻融后短时培养的影响

目的通过对FSH干预下的胎儿卵巢玻璃化冷冻及解冻后短暂培养,观察FSH对卵泡储备的影响。方法将20周流产胎儿卵巢皮质切割成体积为5mm×4mm×2mm和10mm×4mm×2mm的皮质片,在玻璃化液、解冻液和培养液中添加10μg FSH.mL-1,通过两步渗透平衡法,将卵巢皮质进行玻璃化冻存。解冻后培养4.5h,通过卵泡形态学观察、不同发育期卵泡构成比和卵泡直径观察评价玻璃化冻存和解冻后的FSH干预下的培养效果。结果①不同发育阶段卵泡构成比及卵泡直径在冻融组之间及冻融组与新鲜组之间相比差异无统计学意义;②冻融组和冻融-培养组之间相比较,培养组卵泡直径增大,差别有统计学意义(P<0.05)。结论冻融过程的FSH添加不影响人胎儿卵巢大皮质片的玻璃化冻存及早期卵泡的构成比,但是体外添加FSH培养4.5h可使一定量的原始卵泡发育至早期初级卵泡阶段。