Fas配体在髓系白血病细胞中的表达及功能研究

为了解Fas配体 (FasL)在髓系白血病细胞中的表达水平及其诱导Fas+敏感细胞发生凋亡的功能 ,用流式细胞术检测 38例髓系白血病患者 (外周血白细胞 >10 0× 10 9/L)的白血病细胞在新鲜分离及IL 2和IFN γ刺激后表面膜FasL的表达水平 ,将白血病细胞 ( 1× 10 6/ml)与Jurkat细胞 ( 1× 10 5/ml)混合培养 2 4小时后 ,用DNA电泳和流式细胞术双标法检测Jurkat细胞发生凋亡的情况。结果表明 :白血病细胞表面FasL表达量 ( 3.5 9± 1.0 5 ) %高于正常人 ( 0 .36± 0 .16 ) % ,P <0 .0 0 1,经IL 2和IFN γ刺激后其表达量明显增加 ( 7.78± 3.4 0 ) % ,P <0 .0 1;白血病细胞刺激前后诱导Jurkat细胞发生的凋亡率分别为 ( 8.2 8± 1.6 1) % ,( 10 .73± 2 .16 ) % ,差异具有显著性意义。结论 :FasL在髓系白血病细胞表面高表达且对Fas+的敏感细胞具有杀伤功能 ,推测Fas/FasL途径可能在白血病的“免疫逃逸”中发挥作用     

反转录病毒载体介导可溶性Fas的体外表达

将含全长FascDNA的质粒利用PCR技术进行特定片段删除 ,获得sFascDNA。通过DNA重组技术 ,将sFascDNA插入到反转录病毒载体 pLXIN ,构建了重组表达载体pLXIN sFas。经酶切鉴定及测序 ,表明成功地构建了重组表达载体 pLXIN sFas。该载体经PA317细胞包装后 ,感染靶细胞COS 7,分别采用ELISA及凋亡抑制实验检测其蛋白表达量为 (2 .2± 0 .7) μg/ml,且具有良好的生物学活性 ,能明显抑制抗 Fas(CH 11)介导的T淋巴瘤细胞株Jurkat的凋亡。这一结果为探讨Fas和FasL途径在白血病发生中的作用奠定了基础     

Fas系统与肿瘤免疫逃逸

肿瘤通过多种机制逃避免疫系统的监视,Fas与FasL也参与了这一过程.本文将主要阐述Fas与FasL在肿瘤发生中的可能机制.     

Fas抗原与可溶性Fas在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：研究Ｆａｓ和可溶性Ｆａｓ在急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中的表达,探讨Ｆａｓ在白血病细胞凋亡障碍中的作用。方法：分别用免疫组化ＳＡＢＣ法和双抗夹心ＥＬＩＳＡ法,检测３６例ＡＬＬ患者和１０例正常对照组骨髓Ｆａｓ抗原表达以及血浆可溶性Ｆａｓ（ｓＦａｓ）的水平。用半定量逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测１２例ＡＬＬ患者和７例正常对照骨髓细胞Ｆａｓ ｍＲＮＡ的表达。     

Fas及其配体与免疫赦免

近年来,发现厂除ＴＮＦ（Ｔｒｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ）外目前唯一的介导细胞凋亡的蛋白分子－Ｆａｓ（ｆａｃｔｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｕｉｃｉｄｅ）和ＦａｓＬ（Ｆａｓｌｉｇａｎｄ）,并发现这对膜蛋白分子在免疫调控、免疫病理中有重要作用。值得注意得是近来发现眼、睾丸等免疫赦免区及某些恶性肿瘤细胞高表达ＦａｓＬ,提示Ｆａｓ－ＦａｓＬ参与维持免疫赦免,并且动物实验使异基因胰岛细胞移植物局部表达ＦａｓＬ,成功地诱导了局部免疫赦免,这表明Ｆａｓ系统与免疫赦免有密切关系。这一观点将为临床的器官移…     

Fas系统与肿瘤免疫逃逸

肿瘤通过多种机制逃避免疫系统的监视,Fas与FasL也参与了这一过程。本将主要阐述Fas与FasL在肿瘤发生中的可能机制。     

国产免疫磁珠分离细胞的方法学研究及初步应用

探讨以国产免疫磁珠进行细胞分离的方法,并评价直接包被法的特异性和敏感性及其在脐血和骨髓Ｃ＾＋３４细胞分离的应用,方法直接包被法、ＳＰＡ法、生物素－亲和素法。结果直接包被法、ＳＰＡ法和生物素－亲合素法均可有效地分离细胞,但以直接包被法最具优势,并证明其有较高特异性和敏感性。     

Separation of CD34 positive cells and determinationof surface homing antigen

Immunomagnetic beads were magnetic particlescoated with-monoclonal antibody. They could specifi--.cafly combine with target substances and enable thelatter to respond to magnetism. When they were putinto a magnetic field, the magnetic beads binding thetarget substances were retarded thereby being separated from other elements. Matters of interest couldbe purified and enriched by this technique. Themethod has been used to separate different kinds of 'bone marrow (BM) and blood cells, tumor cel…     

人外周血淋巴细胞Fas的表达及细胞凋亡的诱导

目的 研究Ｆａｓ系统对外周血淋巴细胞的影响。方法 将分离、纯化后的淋巴细胞进行单向淋合淋巴细胞培养,用流式细胞术动态检测新鲜分离和激活后的Ｔ淋巴细胞表面Ｆａｓ表达水平,并用ＤＮＡ电泳和原位末端标记技术分别从定性和定量的角度观察Ｆａｓ系统激活与否对混合培养后淋巴细胞凋亡率的影响。结果 Ｔ淋巴细胞在被激活后Ｆａｓ表达水平升高,加抗Ｆａｓ单克隆抗体组的细胞凋亡率高于末加抗体的对照组（Ｐ〈０．０５）。结论     

表达mFasL的新型双顺反子逆转录病毒基因转移体系的建立

为建立表达小鼠 Fas配体 (m Fas L)的内部核糖体进入位点 (IRES)串联的双顺反子新型逆转录病毒基因转移体系 ,用基因重组技术将 m Fas L c DNA基因构建到 IRES双顺反子逆转录病毒载体 (PL XIN)中 ,脂质体法将此重组质粒 PL FIN和空载体 PL XIN分别转染包装细胞 (PA317) ,经 G418筛选出抗性包装细胞克隆 ,基因组 DNA PCR测定基因整合情况。并将抗性 PA317克隆培养上清感染小鼠成纤维细胞系 (NIH3T3) ,筛选出高滴度的 PA317细胞系 ;用流式细胞术测定筛选的 NIH3T3细胞目的基因表达状况 ;以抗性 NIH3T3和 Fas+Yac- 1细胞共培养法检测目的基因的生物学活性。筛选出 12个 PL FIN转染的 PA317细胞克隆中 ,最高产毒效价为 8.5× 10 5CFU(colony- form ing- unit) ;经此上清感染、筛选出的 NIH3T3细胞 ,高表达 m Fas L (阳性率高于对照组 5 2 .5 4% ) ;且能显著诱导 Fas+Yac- 1细胞凋亡 (凋亡率高于对照组 49% )。说明成功建立了表达 m Fas L 的双顺反子逆转录病毒基因转移体系