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目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。 相似文献
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摘要: 目的探讨体外诱导培养的γδ T细胞对多发性骨髓瘤(MM)细胞的杀伤作用。 方法 采用健康志愿者外周血分离获得外周血单个核细胞(PBMNC),并在1 μmol/L唑来膦酸(Zol)和200 IU/mL重组人白细胞介素-2(IL-2)条件下扩增获得γδ T细胞。采用流式细胞术检测γδ T细胞表型,然后与RPMI 8226细胞共培养。采用CCK-8检测γδ T细胞对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用,乳酸脱氢酶(LDH)法检测γδ T细胞对RPMI 8226细胞的杀伤作用,流式细胞术检测RPMI 8226细胞的凋亡率改变,并分别用抗人γδ TCR mAb、抗人NKG2D mAb、抗人CD3 mAb和同型对照IgG mAb封闭γδ T细胞后,作用于RPMI 8226细胞,LDH法检测不同抗体封闭后对RPMI 8226细胞杀伤作用的影响。 结果 体外条件下可成功高效扩增获得γδ T细胞,可抑制RPMI 8226细胞株的增殖并呈一定的量效关系; 不同效靶比(1:1,5:1和10:1)的γδ T细胞作用于RPMI 8226细胞的杀伤率分别为(12.23±1.75)%,(31.11±6.12)%和(43.56±3.29)%; 效靶比为1:1和10:1时,γδ T细胞诱导RPMI 8226细胞凋亡率分别为(38.21±1.98)%和(68.18±2.16)%,明显高于RPMI 8226单独培养组(13.32±1.55)%,差别有统计学意义(P<0.05); 抗人γδ TCR mAb、抗人NKG2D mAb、抗人CD3 mAb和同型对照IgG mAb封闭γδ T细胞后按10:1的效靶比与RPMI 8226混合培养,各组杀伤率分别为(21.54±1.52)%,(29.25±1.51)%,(32.68±0.78)%和(43.0±2.91)%。 结论 体外利用Zol+IL-2刺激培养可高效扩增γδ T细胞,并具有杀伤RPMI 8226细胞的作用,为MM的细胞免疫治疗提供实验依据。 相似文献
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目的 探讨缺氧条件下二甲双胍对多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226新生血管生成的影响。方法 选取常氧和缺氧条件下RPMI 8226细胞的基因表达综合数据库(GEO)数据集GSE110113进行差异表达基因(DEGs)和相关信号通路富集分析。采用100μmol/L氯化钴(CoCl2)构建化学缺氧模型;采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的二甲双胍作用于缺氧条件下MM细胞株RPMI 8226后的细胞增殖活力;采用Western-blot检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达情况;采用ELISA检测培养基上清液VEGF蛋白的表达含量;采用体外新生血管生成实验检测新生血管生成。结果 基因本体论(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号富集分析显示,DEGs富集在“缺氧反应”和“HIF-1信号通路”;RPMI 8226细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达随CoCl2作用时间增加而增加;二甲双胍以剂量依赖性方式降低缺氧诱导RPMI 8226细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及培养上清液中VEGF蛋... 相似文献
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