钙激活中性蛋白酶介导雌激素增强MCF-7乳腺癌细胞的存活力

目的 探讨雌激素(E2)对MCF-7乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶1(CANP-1)基因表达和CANP蛋白酶活性的影响、以及CANP活性在E2增强细胞存活力中的作用.方法 以MCF-7乳腺癌细胞为研究模型、采用RT-PCR法检测mRNA表达、蛋白印迹法观察CANP特异性底物FAK蛋白剪切、血清饥饿诱导细胞死亡、锥虫蓝染色及细胞计数法检测细胞存活力.结果 E2(10 nmoL/L)可明显刺激乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调,CANP抑制剂则可显著抑制E2诱导CANP-1基因上调;在无血清培养条件下,E2激活CANP活性及增加细胞存活力(14.3±4.9％,P＜0.05),而CANP抑制剂可显著抑制E2诱导CANP激活以及细胞存活力增强(19.2±3.9％,P＜0.05).结论 E2刺激MCF-7乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调并增强CANP活性,后者可能参与介导血清饥饿时E2增强MCF-7细胞的存活力.     

野生猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞的抑制作用及机制

目的 研究野生中华猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用,并探讨其作用机理.方法 以MTT比色法和集落形成法观察细胞生长增殖情况,用Western-blotting检测caspase-3活性片段的表达.结果 细胞生长曲线、集落形成实验显示野生猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞的生长、增殖均有较好抑制作用,且有一定的浓度依赖性;随着药物浓度的增加,caspase-3活性片段蛋白的表达水平增加.结论 野生猕猴桃根水煎液在体外对人胃癌细胞有抑制作用,该抑制作用可能与介导caspase-3蛋白的表达有关.     

都匀毛尖对小鼠肝脏CYP3A酶活性及其mRNA水平的影响

目的:研究绿茶对细胞色素P450 3A(CYP3A)酶活性及其mRNA水平的影响,推测绿茶对药物代谢的作用.方法:绿茶选用都匀毛尖,120只昆明种雄性小鼠随机分为4组,对照组正常饮食饮水,低、中、高剂量绿茶组分别予0.25 g/(kg·d)、0.5 g/(kg·d)、1.0g/(kg·d)都匀毛尖茶汤灌胃,分别在1周、2周、3周时处死小鼠,测定小鼠肝脏微粒体CYP3A的活性,并用RT-PCR技术检测小鼠肝脏中CYP3A11 mRNA水平.结果:都匀毛尖能抑制CYP3A酶活性,呈时间-剂量依赖性;都匀毛尖可抑制CYP3A11 mRNA表达,且呈时间-剂量依赖性.结论:都匀毛尖对CYP3A的酶活性及mRNA水平均呈时间-剂量依赖性抑制作用,提示都匀毛尖可能通过影响CYP3A酶活性对药物的代谢发挥作用.     

PBL教学法在医学生物化学实验中的应用

目的:探讨以问题为基础的学习法(PBL)在生物化学实验教学中的效果.方法:选取200名2年级临床医学专业本科学生为研究对象,其中100名学生为PBL组,另100名学生为传统教学组;对PBL组学生发放问卷调查了解学生对PBL教学的认同度,学期结束时分析比较两组学生的考试成绩.结果:PBL组90％以上的学生能接受PBL教学法,认为PBL教学法能提高学习兴趣及综合分析能力,培养独立思考和解决问题的能力,提高参与意识;PBL教学组期末理论考试成绩优秀的学生(80分以上)多于传统教学组.结论:PBL教学法优于传统讲授法,可在生物化学实验教学中推广.     

圆形纸层析法鉴定转氨基作用的实验改进

传统实验中常用的苯酚是一种有毒物质,有强烈的刺激气味,对皮肤有较强的腐蚀性,而且价格较贵.2007年6月通过不断的比较与反复试验,将实验中原有的苯酚和水改进为无水乙醇:水:尿素的配方,目的在于降低实验试剂对人体的危害,简化实验步骤,降低实验成本.     

雌激素通过钙蛋白酶上调P21/CCNE2 mRNA表达并促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力

目的探讨17β-雌二醇(E2)对乳腺癌细胞mRNA表达,观察E2侵袭的分子信号机制。方法以乳腺癌细胞MCF-7为观察模型,用RT-PCR检测目的基因周期抑制蛋白P21和周期蛋白E2(CCNE2)mRNA的表达;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;蛋白印迹法检测蛋白表达;采用化学抑制剂或基因沉默法抑制胞内钙蛋白酶(CANP)活性。结果 E2(10 nmol/L)可刺激P21和CCNE2 mRNA表达显著增加(P0.01);CANP抑制剂calpeptin(10μmol/L)或MEK抑制剂PD98059(10μmol/L)对E2诱导的P21和CCNE2 mRNA上调均有显著抑制作用(P0.01);E2刺激细胞侵袭能力明显增强(P0.01),而基因沉默CANP2明显抑制E2对CANP的激活及E2诱导的细胞侵袭效应(P0.01)。结论 E2可通过激活胞内CANP诱导乳腺癌细胞P21和CCNE2 mRNA表达上调并促进细胞侵袭,提示CANP可能为抑制乳腺癌转移的一个潜在药物靶点。     

慢病毒介导的重组人α1-抗胰蛋白酶在小鼠体内的表达

目的:构建重组人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)因子的慢病毒表达载体,并通过体外细胞水平和小鼠体内分析其表达情况.方法:通过RT-PCR的方法扩增出hAAT基因的编码序列,并构建重组慢病毒质粒;经体外包装后,感染鼠成纤维细胞及注射小鼠.荧光显微镜下观察GFP的表达情况,同时对收获的细胞及感染小鼠的肝脏或血浆进行Western blot、ELISA检测.结果:获得重组hAAT因子的慢病毒表达质粒pLVX-ser;包装后得到8×106TU/mL滴度的慢病毒颗粒.通过荧光显微镜下观察,显示重组hAAT因子在成纤维细胞中正常表达;对小鼠尾静脉注射病毒之后,进行hAAT因子检测,Western blot结果说明hAAT因子在小鼠体内成功表达;通过ELISA检测发现hAAT在小鼠体内的表达平均达190g/L左右,而且在慢病毒的介导下hAAT在小鼠中的表达可持续3mo以上.结论:重组慢病毒载体可高效、持续表达hAAT因子,为通过基因工程生产重组hAAT因子以及为α1-AT缺乏症的基因治疗奠定基础.