Study on the Penetrability of PEP-1-P27mt for Cell Membranes in Vitro

Double-stranded oligomeric nucleotide encoding PEP-1 peptides was synthesized, pro- karyotic expression pET15b-pep-1-p27mt recombinant constructed, E. coli BL21 (DE3)pLysS trans- formed and induced with IPTG to highly express fusion protein PEP-1-P27mt. Fusion protein with an N-terminal His-tag could be purified by Ni2 -resin affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Cultured EC9706 cells treated with PEP-1-P27mt revealed that PEP-1-P27mt was transduced into cells after 15 min and reached maximal intracellular concentra- tions in 2 h. PEP-1-P27mt of 1 μmol/L final concentration could most strongly suppress the growth. It was suggested that PEP-1 can carry P27mt across membrane, which provides a new biological pro- tocol for using cyclin dependent kinase inhibitors p27mt in suppressing the growth of tumor cells.     

右侧颈丛神经阻滞诱发同侧一过性听力障碍1例

患者,男性,14岁,41 kg,162 cm,因右侧锁骨骨折术后1年,愈合良好,拟行内固定钢板取出术入院,选择右侧颈丛神经阻滞.各项术前常规检查未见明显异常.ASA Ⅰ级,无慢性疾病及耳疾病史,无应用耳毒性药物史,无长期配戴耳机史.麻醉前30 min肌肉注射阿托品0.4 mg和苯巴比妥80 mg.局麻药采用0.25%左旋布比卡因与1%利多卡因的混合液,不加肾上腺素.消毒,铺中后用22 G穿刺针于右侧乳突至锁骨中点连线的中点垂直皮肤进针,抵达横突后注射局麻药3 ml,然后退针至肌膜下向乳突、锁骨和颈前方向各注射局麻药3 ml局部浸润,每次注药前均回抽无血或脑脊液.     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。     

新型冠状病毒感染低风险人群的血液筛查策略初探

目的 分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)2种不同血液筛查策略在低风险感染人群中的应用价值,为血液检测策略制定提供参考.方法 采取2种血液SARS-CoV-2抗体筛查策略:1)所有标本先检测总抗体,总抗阳性标本再检测IgG和IgM;2)所有标本仅检测IgG和IgM.对880份献血者标本进行抗体筛查,同时平行检测SA...     

两种检测策略在细胞库病原体污染的检出分析

目的 比较临床检测策略(CDS)与血筛检测策略(BSS)在综合细胞库供体病原体检测中的差异,进行研究分析.方法 对深圳综合细胞库2016年2月至2017年7月共计7981例细胞供者的血浆标本进行病原体检测,病原体类型包括乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)与梅毒螺旋体(TP)...     

IFN-γ对人脐带间充质干细胞细胞因子分泌和免疫调节蛋白表达的体外细胞学研究

目的从细胞学方面探讨治疗新冠肺炎患者临床使用的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)在体外连续制备过程中其细胞因子和免疫调节蛋白的基础分泌水平,以及探究IFN-γ刺激hUC-MSCs后对细胞因子和免疫调节蛋白的影响。方法首先,利用ELISA等方法检测在连续传代扩增hUC-MSCs中多种细胞因子(IL-6、IL-1β、TGF-β、HGF和PGE-2)和免疫调节蛋白(PD-L1和IDO1)的基础表达水平和稳定性;其次,探究hUC-MSCs受到炎症因子IFN-γ刺激后因子分泌和蛋白表达的变化情况。结果 hUC-MSCs在连续传代中其9种MSC相关表面标志物没有明显改变;P0代hUC-MSCs分泌高水平的HGF和TGF-β,但会随着传代增加而分泌水平显著下降;而IL-6和PGE-2则会随着传代增加而分泌上升;IL-1β总体基础表达水平不高;同时,WB和流式结果显示,免疫抑制相关的蛋白IDO1和PD-L1在正常情况下几乎不表达。而当hUC-MSCs受到炎症因子IFN-γ刺激后,细胞因子分泌普遍没有明显上调,其中HGF和PGE-2刺激后还出现了显著下降的趋势;但是免疫抑制相关蛋白IDO1和PD-L...     

新冠疫情防控不同时期深圳地区无偿献血人群新冠病毒抗体检测结果

目的 分析新冠疫情防控不同时期深圳地区无偿献血人群新冠病毒抗体检测结果,评估不同时期献血人群的抗体水平及感染情况,为后续的血液检测策略提供参考。方法 4 768份血浆标本来自于深圳地区不同时期(2022年9月30日—10月3日、11月3—6日、12月27—31日、2023年1月6—18日)的献血者,并且对新冠疫情流行期的献血者(2023年1月17—18日)进行征询是否处于新冠病毒感染康复期。采用核酸检测方法对4 768份献血者血浆标本进行8混样检测,同时对这些标本1 000倍稀释后采用酶联免疫法进行新冠病毒总抗体检测。分析疫情防控的不同时期血液筛查标本、新冠病毒感染者康复期标本的抗体反应性率,从性别、年龄、血型分析其抗体水平差异性。结果 4 768份献血者血浆标本核酸检测均为无反应性,抗体检测检出反应性标本2 342份,反应性率49.1%。4个时间段的反应性率分别为21.3%、15.8%、65.9%、93.9%。结论 新冠疫情防控不同时期深圳地区献血人群新冠病毒抗体反应性率差异较大;不同性别、血型人群抗体反应性率无差别,年轻人群抗体反应性率较高;经输血传播新冠病毒的风险极小。     

国产HCV RNA分型试剂盒检测结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA分型试剂盒检测深圳市抗-HCV阳性献血者结果。方法收集2014-2015年158份深圳市抗-HCV阳性献血者血液样本,应用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法进行HCV RNA定量检测,病毒载量1.0×103 IU/mL的样本经HCV RNA分型试剂盒检测HCV基因型,分析不同基因型所占比例,病毒基因型与载量之间的相关性。结果 158份抗-HCV阳性献血者PCR-荧光探针法检出HCV RNA阳性样本54例,病毒载量1.0×103 IU/mL的45例,全部得到分型结果,HCV 1b型、2型、3型、6型分别占57.78%(26/45)、6.67%(3/45)、8.89%(4/45)、26.67%(12/45)。单因素方差分析结果显示,1b型与2型病毒载量差异有统计学意义(F=2.861,P0.05);不同性别间HCV RNA定量检测结果及抗-HCV S/CO值结果差异有统计学意义(P0.05);不同年龄段各基因型分布比例经Fisher精确检验,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HCV 1b型、6型仍为深圳市无偿献血人群感染HCV的主要基因型,而HCV 2型和3型比例有所减少。     

深圳市无偿献血者抗-HCV阳性结果分析

目的了解深圳市无偿献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)的感染情况,探讨HCV酶联免疫吸附试验(ELISA)检测与HCV RNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)结果的相关性,为献血者的招募提供依据,降低输血风险。方法对从2014年1月至2015年10月的深圳市无偿献血标本进行抗-HCV ELISA、ALT及HCV RNA检测,对相关数据进行分析,并对抗-HCV阳性数据从不同年龄、性别、不同职业、不同献血次数等方面进行统计分析。结果 249 585份标本中共检测出抗-HCV阳性480例,阳性检出率为0.19%,其中ALT异常2例,HCV RNA阳性104例。女性抗-HCV阳性构成比低于男性。不同职业献血者的抗-HCV阳性率不同,医务人员、学生、军人等检出率相对较低。重复献血者感染率明显低于初次献血者,差异有统计学意义(P0.01)。结论深圳市无偿献血人群HCV感染率较低,随着核酸检测的开展,ALT检测在无偿献血筛查中的作用值得进一步讨论。建议对工人及其他职业人群加强健康宣传教育,针对低危人群建立相对固定的无偿献血队伍,保障临床用血安全。