三氧化二砷对小鼠肝脏祖细胞生物学特性的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对小鼠肝脏祖细胞(AHPCs)增殖及代谢的影响.方法 应用改良Seglen二步法原位灌注结合机械离心获取AHPCs,体外培养并持续观察超过40 d.应用免疫荧光技术对AHPC及其形成的克隆进行白蛋白、甲胎蛋白(AFP)和细胞角蛋白19 (CK19)染色.取原代培养12d的细胞随机分为3组:对照组(不含As2O3)、低浓度组(含2μmol/L As2O3)和高浓度组(含4 μmol/L As2 O3).干预48 h后,采用免疫荧光法观察细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性细胞所占的比例,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Ki-67基因的表达,Western blot技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中尿素浓度的变化.结果 体外培养的AHPC可持续扩增超过40 d,培养第1天强阳性表达白蛋白,培养第5天细胞克隆开始表达AFP,第35天表达CK19.阴性对照组所含Ki-67阳性细胞的比例较高(25.1±2.8)％,而As2O3(2μmol/L)组[(18.8±1.0)％]和As2O3(4μmol/L)组[(11.8±2.0)％]的Ki-67阳性细胞比例逐渐降低.Ki-67 mRNA的表达量在As2 O3(2μmol/L)组(0.823 ±0.012)明显下降,并以As2O3(4μmol/L)组(0.309 ±0.002)降低最为明显.随着As2O3浓度的增加,PCNA表达逐渐下降,并呈剂量-效应关系.阴性对照组细胞代谢产物尿素浓度较高[(0.586 ±0.056) mmol/L]随着As2O3浓度增加As2O3(2μmol/L)组[(0.506±0.058) mmol/L]与As2O3 (4 μmol/L)组[(0.410±0.045) mmol/L]尿素浓度逐渐下降.结论 成功建立AHPC体外培养模型.As2O3能抑制原代AHPC的增殖,并降低其代谢能力.     

骨髓间充质细胞和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响

目的 比较骨髓间充质细胞移植和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能影响的差异.方法 建立糖尿病小鼠模型并分成3组:对照组(n=14)通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS);单个核细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓单个核细胞;间充质细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓间充质细胞.观察移植后1周(n=6)和移植后6周(n=8),各组小鼠血糖的变化、胰岛数量、胰腺组织形态学特征及相关标记物的表达.结果 移植后1周,间充质细胞组小鼠血糖出现显著下降(16.6±1.6)mmol/L,与对照组(26.3±0.5)mmol/L和单个核细胞移植组(24.4±1.3)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05),并一直维持到移植后第6周,血糖下降到(16.5±1.5)mmol/L,与对照组(27.7±0.1)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05);移植后1周,间充质细胞组小鼠胰岛数目(21.2±1. 1)和胰岛β细胞数目(415.9±25.4)显著增加,与对照组(11.2±1.3)/(65.9±7.1)和单个核细胞组(12.2±1.3)/(64.1±6.5)比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).单个核细胞组和间充质细胞组小鼠胰岛中均发现BrdU(+)Insulin(+)细胞和BrdU(+)Insulin(-)细胞.结论 骨髓间充质细胞移植改善糖尿病小鼠胰岛功能的效果优于骨髓单个核细胞移植.移植后胰岛的再生既来源于胰岛β细胞的增殖,也可能来源于胰岛干细胞的分化.

Abstract：

Objective To compare the different effects of bone marrow mononuclear cells vs mesenchymal cells transplantation on islets function of diabetic mice. Methods Mouse diabetic models were created by multiply peritoneal injection of low-dose streptozotocin (STZ) and divided into three groups:control group ( n = 14) , bone marrow mononuclear cells group ( n = 14) , and bone marrow mesenchymal cells group (n = 14). Blood glucose was measured weekly after transplantation by glucometer. Histochem istry and immunofluorescence were performed to characterize pancreatic histology, morphology and markers expressed in receipt pancreas. Results Compared with control group and bone marrow mesenchymal cells group, blood glucose levels in bone marrow mesenchymal cells group were significantly reduced at first week after transplantation[( 16. 6 ± 1.6 ) vs ( 26. 3 ± 0. 5 ) / ( 24. 4 ± 1.3 ) mmol/L, P ＜ 0. 05]and sustained to reduce at 6th week after transplantation[( 16. 5 ± 1.5 ) vs ( 27.7 ± 0. 1 ) mmol/L in control group,P＜0. 05]. One week after transplantation, the islets number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group ( 21.2 ± 1. 1vs 11.2 ± 1.3, P ＜ 0. 05 ) and bone marrow mononuclear cells group ( 21.2 ± 1. 1vs 12. 2 ± 1.3 ,P ＜0. 05 ). One weeks after transplantation, the beta cell number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group (415.9 ± 25.4 vs 65.9 ±7. 1,P＜0.05) and bone marrow mononuclear cells group (415.9 ±25.4 vs 64. 1 ±6.5,P＜0.05). In bone marrow mononuclear cells and bone marrow mesenchymal cells groups, there were several BrdU ( + )Insulin( - ) cells and BrdU( + )Insulin( - ) cells in the islets. Conclusion The effect of bone marrow mesenchymal cells transplantation to improve diabetic islet function is more satisfactory than bone marrow mononuclear cells transplantation. Bone marrow mesenchymal cells transplantation can initiate pancreatic islets β cells regeneration by both proliferation of β cells and differentiation of pancreatic stem cells.     

活血通脉汤临床应用

笔者自拟活血通脉汤由当归、丹参、赤芍、川芎、鸡血藤、制乳没、川牛膝药物组成。多年来应用此方加减治疗血栓闭塞性脉管炎,腰椎骨质增生,子宫内膜移位症,属于气血凝滞者颇获良效,兹举例报告如下。 1 血栓闭塞性脉管炎 张×,男,30岁,未婚,农民。1年前右足趾甲床创伤,渐至甲床溃疡渗液,曾去某市医院确诊血栓闭塞性脉管炎。给抗生素、中药等治疗效果不佳,邀余诊治。患者抱足呻吟,右足趾轻度紫绀,甲床渗液,触痛拒按,舌质暗,脉沉涩。证属瘀血阻络。     

头面部带状疱疹并发病毒性脑膜脑炎2例

临床资料　例 1,患者 ,男 ,4 3岁 ,左侧头皮及额部簇集性水疱伴疼痛 5天 ,加重伴发热头痛头晕恶心 2天 ,于 1999年 6月2 0日来诊。体检 :体温 38.5℃ ,急性病容 ,内科检查无异常。皮肤科情况 :左侧头面三叉神经第一支 (眼支 )分布区布簇集性绿豆大水疱 ,基底红晕 ,左眼上、下眼     

数值方法关于一类自治延迟系统的非线性稳定性

讨论了数值方法关于一类非线性自治系统的稳定性 ,证明了 Runge-Kutta方法对于 ODEs是代数稳定的条件下带线性插值的 Runge-Kutta方法且对于系统是整体稳定和渐近稳定的     

小鼠肝星状细胞分离纯化和体外培养模型的建立

目的 建立小鼠肝星状细胞(m-HSCs)分离纯化的高效稳定方案,并通过原代和传代培养观察其生物学特性.方法 依次应用预灌注液、0.1% Pronase E、0.075% Collagenase NB4G对在体肝脏原位灌注消化.肝脏离体后,在0.02%DNaseI液中磁力搅拌消化10 min,低速离心(25g,5 min)去除残余肝实质细胞,进一步用Optiprep密度梯度液获得纯化的m-HSCs.采用锥虫蓝染色法评估细胞产量及活力;采用自发荧光及油红O染色鉴定细胞纯度;采用光镜、电镜以及Desmin/α-SMA免疫荧光双染色观察细胞形态和生物学特征.结果 分离得到的原代m-HSCs数量为(1.4±0.3)×106/g肝脏,细胞活率＞95%;原代培养24 b后,细胞纯度＞90%,传1代后细胞纯度接近100%.静止期和不同活化阶段的m-HSCs在亚显微结构以及α-SMA表达强度等方面存在差异.结论 建立的m-HSCs分离和纯化方法及体外细胞培养模型具有稳定性和高纯度性及高活率性.

Abstract：

Objective To establish a high-performance and stable model for isolation and purification of mouse hepatic stellate cells, and investigate their biological phenotypes by primary culture and subculture. Methods The liver was digested by in situ perfusion of pre-perfusion solution, 0.1% pronase E and 0.075% collagenase NB4G in turn. The liver was continued to digest using 0.02% DNase Ⅰ liquid with magnetic stirring for 10 min in vitro. After low-speed centrifugation used to remove residual hepatocytes, cells were treated with Optiprep density gradient solution to obtain the purified m-HSCs. Trypan blue staining method was used to calculate cell production and viability. The cell purity was identified by mHSCs autofluorescence and oil red O staining. Light microscopy, electronic transmission microscopy and double immunofluorescence staining of Desmin and α-SMA were done to observe morphological characteristics and biological phenotypes of m-HSCs. Results The yeild rate of m-HSCs was (1.4±0.3)×106/g of liver tissue, the cell viability was more than 95%, the cell purity was more than 90% after 24 h of primary cluture and close to 100% after the first cell passage. The activated m-HSCs had different characteristics of submicroscopic structures and expression level of α-SMA. Conclusion This study established a stable model for isolation, purification and culture of m-HSCs, which obtained the high purity and high-living rate of m-HSCs.     

5种性病混合感染1例

本文报告 1例罕见的集二期梅毒、尖锐湿疣、淋病、非淋菌性尿道炎 (宫颈炎 )、阴道念珠菌病 5种性病于一身的混合感染病例。临床资料　患者 ,女 ,16岁 ,学生 ,因外阴部皮疹 1月就诊。患者于 1999年 4月离家出走后被诱骗做三陪小姐 ,不洁性交后不久即出现白带增多、色黄 ,并伴有外阴刺痒 ,在当地医院诊为“淋病” ,经对症治疗后 ,症状一度缓解。 1月前阴道口周围出现数个菜花状疣物 ,无明显自觉症状 ,未引起重视。半月前外阴及肛周又相作者单位 :1阳谷县人民医院皮肤科 ,2 52 30 02山东医科大学附属医院 ,2 50 0 1 23安丘市人民医院皮肤科 ,2…     

小肠瘘的诊断和治疗

肠外瘘（enteroeutaneousfistula）一直是外科治疗中的难题,通常为手术后的并发症（75％-85％）,也可由创伤、放射性肠炎、肿瘤、Crohn病等导致。跟以往相比目前肠外瘘的发病率并未降低,自愈率不到25％,死亡率为5％-20％。小肠瘘（small bowel fistula）是最常见的肠外瘘,占肠外瘘总数的75％以上,跟其他肠外瘘相比,小肠瘘的死亡率更高。小肠瘘的死亡原因主要是腹腔内感染和严重的伤口感染。现结合近几年的研究进展对小肠瘘的诊断和治疗进行简述。     

激光联合三黄洗剂外洗治疗尖锐湿疣34例

尖锐湿疣（CA）是由人乳头瘤病毒（HPV）6型和11型感染引起的性传播疾病，近年其发病率日益增多，近15年中其患病人数已增长10倍^[1]，病例数位次于淋病。据报道，外阴CA患者其HPV亚临床感染率相当高。据报道，外阴CA患者其HPV亚临床感染率相当高^[2]，且传播快，易复发，目前尚无确切的单一疗法，我院自1999年1月开展阴部HPV感染及其治疗的研究。结果报告如下。     

神经干细胞的研究及其应用

神经干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的一类细胞,在适当条件下可以分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞,开拓了中枢神经系统疾病治疗的新视野,在生命科学研究领域中倍受重视,本文就神经干细胞的概念、生物学特性、来源和分布、增殖分化的影响因素及临床应用等方面进行综述。