miR-186海绵载体的构建及其在EA.hy926细胞株中的表达

目的：构建微小RNA-186（miR-186）基因的海绵载体,建立稳定敲减miR-186的EA.hy926细胞株。方法：化学合成miR-186海绵体序列,并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine 2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞,包装慢病毒,测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组,FV040-miR-186-sponge作为实验组,分别感染EA.hy926细胞,筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR （qPCR）法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中EA.hy926细胞miR-186的相对表达水平。结果：测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的EA.hy926细胞中观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×10⁸ TU·mL^-1,FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×10⁸ TU·mL^-1;成功建立了稳定表达miR-186-sponge的EA.hy926细胞株,感染效率达95%;qPCR检测,与空白对照组和FV040-control组比较,FV040-miR-186-sponge组EA.hy926细胞中miR-186相对表达水平降低（P<0.01）。结论：成功构建了miR-186基因的海绵载体,建立了稳定下调miR-186表达的EA.hy926-miR-186-sponge细胞株。     

miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的：构建miR-186过表达慢病毒载体并包装慢病毒,探讨miR-186在人胚胎肾细胞（HEK）293T细胞系中的感染效率和表达水平。方法：以Hsa-miR-186前体序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增pre-miR-186基因序列,并将其克隆到携带EGFP/Puromycin的慢病毒载体FV040中,经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切及测序鉴定后获得重组慢病毒载体。利用Lipofectamine 2000将重组慢病毒质粒FV040 Vector和FV040 miR-186分别与辅助质粒通过共转染至HEK293T细胞中,48 h后收集慢病毒,以FV040 Vector慢病毒作为对照组,FV040 miR-186作为实验组,分别感染HEK293T细胞。感染48 h后,观察HEK293T细胞中绿色荧光的分布情况,并采用实时荧光定量PCR法检测miR-186的表达水平。结果：测序分析,miR-186过表达慢病毒与GenBank上公布的miR-186序列完全一致。与对照组（0.8387±0.1456）比较,实验组HEK 293T细胞中miR-186表达水平（12.6400±0.7884）明显升高（t=14.72,P<0.01）,约为对照组的15.07倍。结论：成功构建miR-186过表达慢病毒载体并包装出慢病毒,miR-186慢病毒成功感染HEK293T细胞,miR-186表达水平在HEK293T细胞中明显升高。     

软枣猕猴桃根化学成分及抗癌药理作用研究进展

软枣猕猴桃根的主要化合物包括三萜类、黄酮类、生物碱类等,具有广泛的抗癌活性,对胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌和乳腺癌等癌细胞均表现出较好的药理作用。本文对软枣猕猴桃根的主要化学成分及抗癌药理作用进行综述,为其开发利用提供参考。     

老年H型高血压伴急性脑梗死患者TyG、LP-PLA2水平检测及临床意义

目的 探讨老年H型高血压伴急性脑梗死(acute cerebral infarction, ACI)患者三酰甘油葡萄糖指数(triglyceride glucose, TyG)、血脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)水平检测及临床意义。方法 回顾性分析老年H型高血压伴ACI患者(研究组)97例、老年H型高血压患者(对照组)148例。比较2组临床资料及TyG、LP-PLA2水平。依据脑梗死面积将老年H型高血压伴ACI患者分为轻度梗死组(31例)、中度梗死组(42例)及重度梗死组(24例)3个亚组,比较不同梗死程度老年H型高血压伴ACI患者TyG、LP-PLA2水平。Pearson相关性分析TyG、LP-PLA2水平与脑梗死体积的关系。Logistic多因素回归分析确定老年H型高血压患者发生ACI的影响因素。结果 研究组高血压2/3级占比、收缩压、舒张压、低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)、TyG、LP-PLA2水平高于对照组(P<0.05)。中度梗死组和重度梗死组患...