SDF-1/CXCR4对卵巢上皮性癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究SDF-1/CXCR4在卵巢癌细胞生物学活性中的作用。方法:用RT-PCR方法检测卵巢癌细胞株SW626及Anglne中的SDF-1和CXCR4的表达。细胞经外源性SDF-1或者抗CXCR4单克隆抗体干预后,用MTT法检测细胞增殖,PI测细胞凋亡,Annexin-V/PI法检测细胞早期凋亡,Transwell小室检测细胞的迁移侵袭活性。结果:两株卵巢癌细胞株中,SW626细胞既表达SDF-1又表达CXCR4,Anglne细胞则两者均不表达。在SW626细胞中,SDF-1作用于无血清状态下培养的细胞(吸光度A值为0.911±0.01),与对照组(吸光度A值为0.506±0.01)相比,差异有统计学意义(P<0.01),而加入抗CXCR4单克隆抗体作用后(10μg/ml A值为0.725±0.01,20μg/ml A值为0.650±0.02),与SDF-1组相比,差异均有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);抗CXCR4单克隆抗体作用于无血清状态下培养的细胞(10μg/ml A值为0.655±0.11和20μg/ml A值为0.520±0.04),与对照组(A值为0.724±0.03)相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入外源性SDF-1后,SW626细胞在无血清状态下的早期凋亡数为15.6%,相对于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。抗CXCR4单克隆抗体可增加SW626细胞中的PI阳性细胞数(P<0.01)。并且,与对照组相比,SDF-1促进SW626细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.01),而此活性可被抗CXCR4单克隆抗体阻断。结论:SDF-1/CXCR4可能通过促进细胞增殖、迁移、侵袭及抑制其凋亡,使卵巢癌细胞获得进展。     

卵巢癌相关成纤维细胞的培养及其对癌细胞侵袭力的影响

目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭力的影响.方法用组织块贴壁培养法获得原代卵巢CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs);通过倒置相差显微镜观察细胞形态和多种蛋白的免疫组化染色,对卵巢CAFs进行鉴定,观察CAFs对CAOV3侵袭力的影响.结果获得纯化的卵巢CAFs,其波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白染色呈阳性,角蛋白呈阴性;CAFs可显著提高CAOV3的侵袭能力(P<0.01).结论与NFs相比,CAFs在形态结构、蛋白表达等方面均有显著差异,卵巢CAFs可增强CAOV3侵袭作用.     

膀胱侧入分离法在膀胱子宫陷凹封闭的腹腔镜下全子宫切除术中的应用

目的 对膀胱子宫陷凹封闭的患者采取腹腔镜膀胱侧入分离法进行全子宫切除术的临床疗效进行评价分析.方法 对我院2015年1月至2019年1月间腹腔镜下膀胱子宫陷凹封闭的全子宫切除术60例患者,根据下推膀胱的方法分为:侧入组30例,直入组30例,比较两组手术和围手术期并发症情况.结果 侧入组的平均手术时间[(108.50±1...     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。     

卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异

目的:对卵巢癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)及卵巢正常成纤维细胞(Normalfibroblasts,NFs)进行分离、培养、纯化,并分析两者多种基因表达的差异。方法:①用组织块贴壁培养法获得原代卵巢癌CAFs和卵巢NFs,通过胰酶消化法和反复传代法进行细胞的纯化;②观察细胞形态,多种基因的免疫细胞化学染色检测及相应mRNA的半定量分析,对CAFs和NFs进行初步鉴定;③应用RT-PCR的方法对CAFs和NFs中多种基因进行分析比较。结果:①获得了纯化的卵巢CAFs和NFs;②卵巢CAFs的细胞免疫化学染色α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色呈阳性,角蛋白呈阴性,卵巢NFs波形蛋白(Vimentin)阳性,而α-SMA和细胞角蛋白阴性;③卵巢CAFs与NFs中Vimentin与α-SMA的mRNA发现均有表达,但CAFs中表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);④与NFs相比,CAFs中多种mRNA的表达增加,其中包括生长因子,血管生成促进因子,细胞因子等。结论:与NFs相比,CAFs在mRNA、蛋白表达等方面均有统计学差异;卵巢癌中CAFs基因表达的检测表明,其基因表达有显著变化,提示这些成纤维细胞可能为卵巢癌细胞的生长提供了最适合的微环境。推测卵巢-宿主界面微环境在上皮性卵巢癌的发展中可能起重要作用。