人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。     

特异性转移因子对人AFP促进小鼠H22腹水肝癌细胞RNA合成的拮抗效应

用亲和层析法从3～5月龄引产胎儿肌肉组织中提纯AFP.用纯化AFP免疫小鼠,取其脾脏按匀浆透析法制备AFP特异转移因子(SP-TF),取正常未免疫鼠脾脏制备非特异转移因子(N—TF),从预接种小鼠腹水中分离Hz2腹水肝癌细胞(H22细胞),体外用[3H]—UR参入方法,从转录水平观察SP—TF对AFP促进小鼠H22细胞生长的拮抗效应。结果表明:SP—TF对AFP促进H22细胞RNA合成具有非常显著的拮抗效应。此效应具有抗原特异性和供体依赖性。     

人胎肝cDNA文库的构建

从水囊引产的５＋月孕龄胎儿肝脏中提取ＲＮＡ，分离含ｐｏｌｙ（Ａ）尾的信使ＲＮＡ［ｏｐｌｙ（Ａ）＾＋ｍＲＮＡ］，合成双链ｃＤＮＡ，定向插入λｇｔ１１表达载体，转染Ｙ１０９０受体菌，构建了人胎肝ｃＤＮＡ库。该库有１．３５×１０＾６个噬菌体，重组率为８７．５％，可用核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。     

重组人α8干扰素在大肠杆菌中的克隆与高表达

利用基因重组技术构建了人干扰素α８（ＩＦＮ－α８）高表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＸＬｌ－Ｂｌｕｅ／ｐＢｍ，经酶切鉴定、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及生物活性测定等分析，表明能特异性地表达具有生物活性的ＩＦＮ－α８，表达量达到总菌体蛋白的２３％，经复性后比活为４．８×１０７ＩＵ／ｍｇ，具有良好的应用前景。     

人源性抗胃癌单克隆抗体重、轻链可变区cDNA的合成

鼠源性单克隆抗体(单抗)的临床应用有限制人源性单抗的制备还存在许多困难,近年来许多学者采用基因工程技术来生产单抗,制备基因工程抗体分子的关键是得到抗体可变区基因,我们从分泌     

自由基清除剂对特异性转移因子抑制小鼠S_(180)细胞RNA合成作用的影响

文献报道[彭朝晖,等。第一军医大学学报1984;6(1):17～21:朱斌,等。中国免疫学杂志 1987;3(4):214～217;徐杨,等。中国免疫学杂志 1988;4(1):14～16]特异性转移因子(SPTF)能减少肿瘤细胞核酸和蛋白质的合成,从而抑     

Cloning and high-level expression of human interferon alpha-8 in E.coli

Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａ－８ｉｎＥ．ｃｏｌｉＺｈａｎｇＰｉｎｇｗｕ（张平武）；ＷａｎｇＹｉｌｕｎ（王易伦）；ＬｕＤｅｒｕ（陆德如）；ＬｉＹｕｙａｎｇ（李育阳）（Ｉｎｓｔｉ...     

人胃癌组织cDNA文库的建立

随着DNA重组技术的发展,某些与细胞癌变有关的基因的分离与克隆越来越受到人们的重视。我们建立了人胃癌组织的cDNA文库,希望能从该文库中分离出与胃癌变有关的基因。     

甲胎蛋白对肝癌细胞生长的影响 Ⅰ.人AFP对小鼠H_(22)腹水型肝癌细胞RNA合成的促进作用

用亲和层析法从3-5月龄引产胎儿肌肉组织中提纯AFP。体外用~3H-UR参入的方法,从转录水平观察AFP对小鼠H_(22)腹水型肝癌细胞生长的影响。结果表明,人AFP能显著地直接促进该肿瘤细胞RNA的合成;人血白蛋白和去除AFP后胎儿肌肉匀浆液等对照均无显著作用;AFP抗血清能显著地清除AFP的这种促进作用。用小鼠S_(180)乳腺肉瘤细胞作为对照表明,AFP促肿瘤生长无严格的组织特异性。