抗肌萎缩蛋白病一家系的临床、分子病理及遗传学特点

目的 分析并确定1个抗肌萎缩蛋白病(dystrophinopathy)家系的临床、分子病理及遗传学特征.方法 收集先证者及其家系成员的临床资料,对先证者行肌肉活体组织检查,采用抗层黏连蛋白α2(1aminin α2,又称merosin)、抗emerin蛋白、抗肌萎缩蛋白(dystrophin)中央棒状区(Dys1)、C′末端(Dys2)、N′末端(Dys3)单克隆抗体行免疫组织化学染色;提取外周血基因组DNA,采用多重连接探针扩增(MLPA)进行抗肌萎缩蛋白Duchenne型肌营养不良(DMD)基因检测.结果 该家系中包括先证者在内共有3例患者临床诊断为肌营养不良,均无腓肠肌肥大,但病情重、进展较快,同时先证者肌肉活体组织检查行免疫组织化学染色提示dystrephin蛋白部分缺失,merosin、emerin染色呈阳性表达.MLPA检测显示先证者DMD基因第45～54外显子缺失,其母在第45～54外显子区域为杂合性缺失.结论 该家系中的先证者DMD基因为第45～54外显子缺失,突变基因来自母亲,其母为表型正常的携带者.dystrophin蛋白表达异常是造成抗肌萎缩蛋白病表型的病理基础,其临床后果不仅取决于dystrophin蛋白表达缺失的程度,还取决于DMD基因缺失区域的功能.     

巴特综合征临床表现与基因突变相关性分析

巴特综合征是一种常染色体隐性遗传病,以低钾代谢性碱中毒为特征。目前临床上分为四种类型,分别涉及肾小管上不同的盐离子通道蛋白。SLC12A1编码 Na-K-2Cl 通道蛋白,ROMK 编码 K~ 通道蛋白,CLCNK 编码 Cl~-通道蛋白,BSND 编码 Cl~-通道蛋白β亚基。这些基因的突变导致其编码的多肽链异常,形成异常的肾小管盐离子通道蛋白,引起水电解质吸收紊乱,致使出现不同临床类型的巴特综合征。     

运用多重连接探针检测DMD

目的杜氏肌营养不良是是由于抗肌萎缩蛋白的缺失、重复及点突变所致的一种X-连锁隐性遗传性神经肌肉病。目前运用多重PCR检测此基因热点区可以检测大部分病人的缺失突变,然而多重PCR不能检测非热点区及重复突变,且不能定量分析拷贝数。运用多重连接探针扩增（multiplex ligation—dependent probe amplification,MLPA）检测DMD可为临床诊断及产前诊断提供依据。方法本实验采用的多重连接探针扩增（MLPA）能快速、准确、半定量地分析患者及携带者缺失与重复突变的拷贝数,且检测范围涉及整个基因。结果15例DMD患者9例是由于缺失突变所致,6例未检测到缺失突变及重复突变。其中7例缺失突变病人经“一步到位法”多重PCR验证,2例缺失突变病人经多重PCR未检测到的缺失突变。结论MLPA是一种快速、准确、简便检测缺失及重复突变的方法。利用MLPA能检测所有DMD患者及携带者的缺失和重复突变。     

质粒纯化利用离子交换柱的再生方法

目的 为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法 用0．5mol／L HCl和0．5mol／L NaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。     

巴特综合征临床表现与基因突变相关性分析

巴特综合征是一种常染色体隐性遗传病，以低钾代谢性碱中毒为特征。目前临床上分为四种类型，分别涉及肾小管上不同的盐离子通道蛋白。SLCl2AI编码Na-K-2Cl通道蛋白，ROMK编码K^ 通道蛋白，CLCNK编码Cl^-通道蛋白，BSND编码Cl^-通道蛋白β亚基。这些基因的突变导致其编码的多肽链异常，形成异常的肾小管盐离子通道蛋白，引起水电解质吸收紊乱，致使出现不同临床类型的巴特综合征。     

DYT1和DYT5的临床和遗传特征

Dystoniaisasyndromewhichischaracterizedbysustained musclecontractions,repetitivetwistingmovementsandabnormal postures[1].Thesesymptomsresultfromconcurrentcontractionsofagonistandantagonistmuscles;thecontractionsfollowadi rectionalpatternbutthespeedandintensitymayvary[2].Themainfeatureofthissyndromeisdiurnalfluctuation,thatis,the symptomsbecomemoreseriousintheeveningafterexerciseandarerelievedinthemorningaftersleep,or“sensorytricks”such astouchingthechintoimprovecervicaldystoniaortouchingthel…     

多重连接依赖的探针扩增方法对原发性智力低下患儿进行亚端粒重排分析

目的 了解原发性智力低下伴单发或多发畸形患儿中染色体亚端粒重排的发生率,寻找智力低下的致病原因.方法 180例符合本组入选标准的原发性智力低下患儿,抽取外周血,乙二胺四乙酸钠(EDTA)抗凝.提取基因组DNA并进行纯化.用多重连接依赖的探针扩增(MLPA)方法的试剂盒P036B/C和P070进行检测,对使用2个试剂盒均存在相同异常的样本,再选用针对异常区域特异性的试剂盒P096、P064和P023鉴定或判断发生异常片段的大小.MLPA主要实验步骤包括:DNA变性、分子杂交、连接反应和特异PCR扩增,扩增的PCR产物用ABI 3100测序仪进行基因型分析,最终所得数据用GeneMarker软件进行分析.结果 在180例原发性智力低下患儿中发现13例存在染色体亚端粒重排(7%):其中12例为致病性,均为新生突变;1例2号染色体长臂末端缺失(2qdel)来源于表型正常的父亲.结论 亚端粒重排是原发性智力低下伴单发或多发畸形的致病原因.     

MS-MLPA方法在Prader-Willi综合征及Angelman综合征基因诊断中的应用

目的 检测甲基化特异性的多莆连接依赖的探针扩增(MS-MLPA)方法的敏感性和可靠性,以寻求一种简单、重复性好、精确度高的用于Prader-Willi综合征(PWS)和Angeiman综合征(As)的基因诊断方法.方法 DNA提取试剂盒提取基因组DNA,然后,用DNA纯化试剂盒进行纯化.用MS-MLPA试剂盒Me028对临床诊断的2例PWS和4例AS患儿进行基因检测分析.扩增的PCR产物用测序仪ABI 310进行基因型分析,最终所得数据用GeneMarker软件进行分析.MS-MLPA的检测结果用甲基化特异性聚合酶链反应进行验证.结果 4例AS中3例源于母源染色体15q11～q13缺失,1例源于父源染色体15q11～q13单亲二倍体或印记中心缺陷;2例PWS中1例源于父源染色体15q11-q13缺失,1例尚不能明确原因.结论 MS-MLPA是一种简单、高效、准确、可靠的基因检测方法.     

肯尼迪病三核苷酸序列数目与发病年龄的关系

目的 探讨肯尼迪病患者三核苷酸(CAG)重复序列数目与发病年龄的关系.方法 对30例基因确诊的肯尼迪病患者进行雄激素受体基因第一外显子测序,计算其CAG重复序列数目,并分析其与患者发病年龄间的关系.对所有患者进行Appel量表评分以评价其运动功能缺损程度,并分析Appel量表评分与CAG重复序列数目及病程的关系.结果 CAG重复序列数目与发病年龄呈负相关(r=-0.671,P<0.01);Appel量表评分与病程呈正相关(r=0.855,P<0.01)但与CAG重复序列数目无明显相关性(r=0.100,P=0.601).结论 与其他CAG重复序列疾病一样,肯尼迪病患者的CAG重复序列数目决定了其发病年龄,但与病情轻重无关.     

SLC22A1 rs628031基因多态性与二甲双胍不良反应的关系

目的本研究旨在观察SLC22A1 rs628031基因多态性与二甲双胍不良反应之间的关系。方法前瞻性研究93例接受单用二甲双胍口服降糖治疗的初诊2型糖尿病患者。从患者外周血白细胞中提取DNA,应用单碱基延伸法进行基因分型,并分析基因多态性与不同剂量二甲双胍不良反应的关系。结果 rs628031基因多态性与二甲双胍不良反应的发生,差异无统计学意义(P=0.062)。在药物剂量亚组分析中,rs628031 GA/AA基因型的患者接受单用高剂量二甲双胍口服降糖治疗后,发生不良反应的比率明显增高(85.7%vs.14.3%,P=0.015),但是,在低剂量组中,组间比较差异无统计学意义(P=0.605)。结论本研究结果提示SLC22A1 rs628031基因多态性与高剂量二甲双胍的不良反应发生有关。