新疆汉族与维吾尔族HBV耐药变异类型与基因型研究

目的探讨新疆地区慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)耐药变异类型与基因型的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)对245例HBV DNA阳性标本进行HBV基因分型。采用基因芯片技术对HBV拉米夫定及阿德福韦酯相关耐药基因突变位点(包括180、204、181、236位点)进行检测。结果 245例慢性乙型肝炎患者检出HBV基因型B型40例、C型137例、C/D混合型48例、其它型别20例,在不同性别及年龄间的分布差异无统计学意义(χ2=1.791,P=0.617;χ2=14.214,P=0.115),而在不同民族间的分布差异有统计学意义(χ2=83.076,P=0.000)。HBV在180、204、181、236位点的突变检出率分别为33.8%、76.8%、66.9%、45.0%,差异有统计学意义(P0.05);HBV常见变异类型的基因型构成差异无统计学意义(χ2=14.969,P=0.454),但C型HBV在各变异类型中所占的比例均最高。结论 HBV基因型在不同民族间的分布不同;HBV常见耐药位点的突变情况不同;HBV基因型在常见变异类型中的分布相同。     

新疆结核病人外周血circular RNA差异表达分析

目的:了解新疆结核病患者全血环状RNA (circRNA)差异表达谱，并预测其靶基因，探索circRNA与结核病发生发展的关系。方法：选取新疆肺结核患者43例与健康对照者40例，利用表达谱芯片对病例组和对照组各3例全血circRNA进行检测，筛选差异表达的circRNA，同时选择43例肺炎患者全血进行qRT-PCR验证，再用circRNA靶基因预测数据库进行差异circRNA靶microRNA的预测。结果：芯片结果显示新疆结核病患者全血中存在差异表达的circRNA 835个，其中249个表达上调，586个表达下调，筛选出4个有显著差异的circRNA进行qRT-PCR验证，结果表明hsa_circ_0008276、hsa_circ_0003452、hsa_circ_0001846(P＜0.05)和hsa_circ_0090508表达均下调(P＜0.05)。circRNA 靶基因预测结果提示，has-miR-1294、has-miR-604、has-miR-616、has-miR-663b、has-miR-486-3p可能是hsa_circ_0090508的潜在靶基因。结论：hsa_circ_0090508在结核病患者的表达下调显著，并且相较于其他三个circRNA特异性更高，其可能通过靶基因影响结核病的调控机制。     

新疆地区维、汉民族乙型肝炎病毒耐药基因型分布与变异研究

目的 探讨新疆地区维吾尔族与汉族乙型肝炎病毒耐药基因型分布及耐药变异情况.方法 采用基因芯片对来自维族、汉族人群乙型肝炎病毒核酸阳性的927份标本进行与乙型肝炎病毒耐药相关的rtL180M、rtM204I/V、rtA181T/V和rtN236T的耐药突变和基因型分析.结果 维吾尔族与汉族的乙型肝炎病毒耐药突变率分别为53.26％和59.28％,差异无统计学意义;在4个耐药变异位点中,rtL180M、rtM204I/V、rtN236T 3个位点的突变在两个民族之间差异无统计学意义;rtA181T/V在两个民族中的突变率分别为13.04％和31.74％,差异有统计学意义(x2=13.8204,P＜0.05).结论 维吾尔族与汉族的乙型肝炎病毒耐药突变不存在差异,4个突变位点的6种突变中,只有rtA181T/V在两个民族之间有差异,且维吾尔族低于汉族,rtL180M、rtM204I/V和rtN236仍是维吾尔族乙型肝炎病毒耐药的常见变异.     

MP-DNA与IgM在儿童肺炎支原体感染病程中动态检测的临床价值

目的探讨MP-DNA与IgM在儿童肺炎支原体感染病程中动态检测的临床价值。方法选择50例经临床及病理诊断为MP感染的患儿,采用FQ-PCR与胶体金DIGFA方法分别检测MP-DNA、MP-IgM,分析比较MP阳性率、首次检测不同年龄组MP检测阳性率、动态检测MP感染的情况。结果①FQ-PCR方法MP阳性检测率(94.00%)显著高于DIGFA方法(P<0.01);②首次检测时,不同年龄组的MP阳性检测率差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);③出院后1个月及出院3个月MP阳性检测率差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 MP-DNA在儿童MP感染病程中动态检测中具有较高的临床价值,FQ-PCR法可作为儿童MP感染检测的一种有效的方法。     

新疆结核病患者外周血环状RNA差异表达分析

目的了解新疆结核病患者全血环状RNA(circRNA)差异表达谱,并预测其靶基因,探索circRNA与结核病发生发展的关系。方法用表达谱芯片对肺结核患者和健康人对照各3例全血circRNA进行检测,筛选差异表达的circRNA;选择新疆43例肺结核患者、40例健康人对照者及43例肺炎患者全血进行qRT-PCR验证,用circRNA靶基因预测数据库进行差异circRNA靶microRNA的预测。结果芯片结果显示新疆结核病患者全血中存在差异表达的circRNA有835个,其中249个表达上调,586个表达下调。筛选出4个有显著差异的circRNA进行qRT-PCR验证,结果表明hsa_circ_0008276、hsa_circ_0003452、hsa_circ_0001846(P0.05)和hsa_circ_0090508表达均下调(P0.05),hsa_circ_0090508相较于其他3个circRNA特异性更高。circRNA靶基因预测结果提示,has-miR-1294、has-miR-604、has-miR-616、has-miR-663b、has-miR-486-3p可能是hsa_circ_0090508的潜在靶基因。结论 hsa_circ_0090508在结核病患者中的表达显著下调,其可能通过靶基因影响结核病的调控机制。     

羊水细胞ABO血型序列特异性引物-PCR法基因定型研究

目的探讨羊水细胞采用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR—sequence specific primers,PCR—SSP）法进行胎儿ABO血型基因定型检测的可靠性。方法28例孕妇羊水细胞采用PCR—SSP法进行胎儿ABO血型基因定型检测,对应胎儿出生后进行ABO血型血清学定型。结果28份羊水细胞中27份ABO基因定型结果与胎儿出生后血清学定型结果相符。结论PCR—SSP方法检测羊水细胞AB0基因型能较准确判定胎儿AB0血型,可用于产前胎儿ABO血型检测。     

新疆地区肺结核病人甲、乙、丙3型病毒性肝炎

目的探究新疆地区肺结核病人甲、乙、丙3型病毒性肝炎分布特征,为临床治疗及预防提供依据。方法选择新疆地区肺结核病人为研究对象,收集每位患者的血标本,并进行肝炎病毒的检测,记录每位患者的检查结果并进行系统分析,探究新疆地区肺结核病人甲、乙、丙3型病毒性肝炎分布特征,为临床治疗及预防提供依据。结果 1620名患者中有80名甲肝抗体IgM型阳性（4.9%）,有100名乙肝表面抗原阳性（6.2%）,880名HBV阳性（54.3%）,63名抗HCV-IgG阳性（3.9%）。其中,南疆北疆两个地区抗HAV-IgM检出率没有明显差异,无统计学意义（P〉0.05）。北疆HBsAg以及HBV检出率明显高于南疆,差异有统计学意义（P〈0.05）。北疆抗HCV-IgG的检出率明显高于南疆,差异有统计学意义（P〈0.05）。各年龄组抗HAV-IgM阳性检出率没有明显差异,无统计学意义（P〉0.05）。各年龄组HBsAg差异无统计学意义（P〉0.05）。在HBV检出率中,65~组最高,25~组最低,差异有统计学意义（P〈0.05）。抗HCV-IgG阳性检出率最高的是25岁~组,检出率最低的是45岁~组,不同年龄组间差异有统计学意义（P〈0.05）。男性抗HAV-IgM的检出率明显高于女性,差异有统计学意义（P〈0.05）。男女HBsAg以及HBV检出率之间没有明显差异,无统计学意义（P〉0.05）。男性抗HCV-IgG的检出率明显高于女性,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肺结核病人中甲丙型肝炎的检出率高于一般人,甲肝、乙肝的患病率与民族相关,男性三种肝炎的检出率高于女性,北疆地区的检出率高于南疆。≥65岁组的肺结核病人比〈65岁组更容易罹患甲肝和乙肝。此外,维吾尔族和汉族乙肝检出率高于正常人。     

细胞免疫功能对乙型肝炎病毒复制及抗病毒治疗的意义

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)复制、转归及变异与细胞免疫功能的关系.方法 检测37例慢性乙型肝炎(乙肝)患者(慢性乙肝组)、20例HBV携带者(无症状携带组)、36例乙肝肝硬化患者(乙肝肝硬化组)及24例健康体检者(正常对照组)的外周血T细胞亚群,分析HBV不同感染状况者T细胞亚群的差异;用实时荧光定量PCR法检测HBV感染者HBV-DNA水平和拉米夫定相关变异(YMDD).结果 (1)与正常对照组比较,无症状携带组和慢性乙肝组的CD+3、CD+4 T细胞的百分比和计数均显著降低(P＜0.05),无症状携带者的CD+8 T细胞计数亦显著低于正常对照组(P＜0.05),而两组的CD+8 T细胞百分比及CD+4/CD+8比值与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);乙肝肝硬化组CD+4 T细胞百分比与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但CD+4/CD+8比值显著高于正常对照组,CD+3、CD+4、CD+8 T细胞计数均显著低于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)HVB感染者HBV-DNA水平与外周血CD+3、CD+4、CD+8 T细胞及CD+4/CD+8比值无相关性(P＞0.05).(3)抗病毒治疗6个月后HBV-DNA水平小于检测低限组的外周血CD+3、CD+4、CD+8 T细胞计数显著高于治疗12个月后转归及无转归组,而CD+4/CD+8比值显著低于治疗12个月后无转归组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)拉米夫定相关变异型和野生型HBV感染者外周血CD+3、CD+4、CD+8 T细胞及CD+4/CD+8比值间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性HBV感染者体内存在T细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,可能是HBV感染后慢性化的重要原因;T细胞亚群检测可作为抗病毒治疗效果和疾病转归的预测指标;T细胞亚群计数较百分比更能反映患者的细胞免疫状况.     

基因芯片技术在结核耐药基因检测中的应用

目的:应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对利福平(RifampicinRFP)和异烟肼(isoniazide INH)的3个耐药相关基因rpoB、katG、inhA基因,并评价其临床应用价值。方法:采用基因芯片技术对我院2010年10月～2011年4月门诊或住院患者的体液标本经培养、分离和鉴定得到的34株结核分枝杆菌样本进行耐药相关基因检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:34株样本中,利福平rpoB基因有7株突变,总突变率为20.6%,其中6株为531(C-T)位点突变,1株526(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为88.2%。异烟肼基因突变有10株,总突变率为29.4%,其中7株为KatG 315(G-C)位点突变,1株为katG 315(G-A)位点突变,2株为inhA-15(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为85.3%。利福平的7株耐药株中,基因芯片检测5株为突变型,突变率为71.4%.,在利福平的27株敏感株中,基因芯片检测2株为突变型,突变率为7.4%。在异烟肼的9株耐药株中,基因芯片检测7株为突变型,突变率为77.8%,在异烟肼的25株敏感株中,基因芯片检测3株为突变型,突变率为12%。耐药基因检测灵敏度和特异度分别为利福平71.4%和92.6%,异烟肼77.8%和88%。结论:用基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。