大鼠髓核细胞体外衰老模型的建立

目的：评价生长因子受体结合蛋白2(growthfactorreceptorboundprotein2,Grb2)表达水平与结直肠癌进展及预后的关系。方法：对Grb2的蛋白表达及细胞定位进行免疫组化检测。用t检验、chisquare检验等分析Grb2的表达与年龄、性别、肿瘤部位、分化等级、淋巴结转移个数、TNM分期、辅助化疗、血清癌胚抗原（CEA）和血清CA199之间的关系。用KaplanMeier法分析Grb2的表达水平对患者生存率的影响;用Cox回归分析结直肠癌预后的影响因素。结果：Grb2主要表达于结直肠癌上皮细胞的胞质。结直肠癌组织中胞质Grb2的表达显著高于腺瘤和癌旁组织（P<0.05),而结肠癌组织、腺瘤、癌旁组织中胞核Grb2中的表达水平差异无统计学意义。癌上皮细胞胞质中Grb2高表达与年龄、性别、肿瘤部位、分化等级、TNM分期、辅助化疗、血清CEA、血清CA199之间均无相关性,Grb2表达与淋巴结转移个数有相关性（P=0.001）。Cox单因素分析发现,胞质Grb2高表达能预测患者的不良预后;进一步纳入TNM等指标,Cox多因素分析发现,Grb2是结直肠癌预后的独立影响因素［无瘤生存风险比（HR）=2.664,P=0.015;总体生存风险比（HR）=2.574,P=0.019］。结论：Grb2高表达与结直肠癌进展密切相关,是结直肠癌预后的独立危险因素。     

大鼠椎间盘髓核细胞体外凋亡模型的建立

【摘要】 目的 建立大鼠椎间盘髓核细胞体外凋亡模型。方法 为了充分模拟退变椎间盘内营养缺乏的微环境，本实验分别采用含1%，3%，5%，8%，10%胎牛血清的DMEM培养基培养椎间盘髓核细胞，筛选最佳促凋亡浓度，分别检测髓核细胞凋亡率、凋亡相关蛋白Bax、bcl-2、caspase-3酶的表达、细胞增殖曲线及免疫荧光分析。 结果 流式细胞仪测得髓核细胞凋亡率随着FBS浓度降低而升高，3% FBS为最有效诱导凋亡浓度；Western blot 示Bax、caspase-3酶表达在3% FBS组明显高于10% FBS组，同时bcl-2表达下降；CCK-8检测结果显示含3% FBS的培养基内，随着凋亡率的增长，髓核细胞增殖的速率越来越慢；免疫荧光分析3% FBS组FAS表达量明显比10% FBS组增高。结论 3% FBS能诱导髓核细胞发生凋亡，最终会导致细胞功能丧失，caspase家族参与并执行了这一过程。     

破骨细胞外泌体miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4促进肺腺癌细胞增殖及侵袭

目的 探讨破骨细胞来源外泌体(osteoclast-derived exosomes)中miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4, PDCD4)对肺腺癌侵袭增殖的影响。方法 利用RAW264.7细胞诱导分化破骨细胞并提取外泌体,透射电镜及粒度仪对其进行鉴定。将外泌体与A549细胞共培养,通过CCK8法检测细胞活性,观察miR-183-5p对A549细胞增殖的作用;检测A549细胞周期分布,观察miR-183-5p对细胞周期的作用;利用Transwell侵袭实验,观察miR-183-5p对A549细胞侵袭能力的作用。Western blotting检测PDCD4、周期蛋白D1(Cyclin D1, CCND1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase, CDK4)相对表达,观察miR-183-5p靶蛋白表达情况及其对A549细胞侵袭、增殖的影响。结果 外泌体呈边缘透亮清晰的椭圆形囊泡状结构,粒径分布范围30-200nm左右,荧光探针发现外泌体能够较快的被肺腺癌细胞A549摄取,并且共培养后A549细胞中miR-183-5p表达水平明显增高(p<0.01)。miR-183-5p高表达可以明显促进A549细胞的侵袭、细胞增殖和周期(p<0.05)。A549细胞中miR-183-5p过表达后,PDCD4表达降低,同时CCND1、CDK4也高表达(p<0.05)。结论 破骨细胞来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-183-5p的表达,miR-183-5p通过靶向抑制PDCD4表达可促进肺腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。     

大鼠髓核细胞体外衰老模型的建立

目的:建立大鼠椎间盘髓核细胞体外衰老模型。方法:提取大鼠椎间盘髓核细胞,在完全培养基中培养,作为对照组;在对照组基础上加入终浓度为100μmol/L三丁基过氧化氢(t-BHP)培养2 h,构建髓核细胞体外衰老模型(衰老模型组)。采用Western印迹法检测两组髓核细胞的衰老相关指标微囊蛋白-1(caveolin-1)、β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的表达量,同时采用CCK-8细胞增殖实验检测两组的细胞活性。结果:与对照组比较,t-BHP作用2 h后,衰老模型组caveolin-1、SA-β-gal表达量明显升高,且髓核细胞增殖速率减慢,细胞活性明显降低。结论:采用t-BHP诱导的方法能成功构建髓核细胞体外衰老模型,caveolin-1在此过程中诱发了髓核细胞的衰老。