RNAi抑制HIF-1α基因逆转卵巢癌多药耐药的实验研究

目的 探讨靶向缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)载体表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性.方法 构建靶向HIF-1α短发夹状siRNA 基因表达载体,脂质体介导转染人卵巢癌COC1/DDP细胞.Western blot法检测HIF-1α蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;实时定量PCR(real time PCR)检测HIF-1α和多耐药基因1(mdr-1)mRNA的表达;MTT法检测COC1/DDP细胞对化疗药物顺铂的抗性.结果 转染HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体的COC1/DDP细胞,低氧条件下HIF-1α蛋白及mRNA表达水平下降,同时mdr-1基因的mRNA及其编码的P-gp蛋白水平也明显下降,对顺铂的药物敏感性增加.结论 HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体可有效地抑制卵巢癌COC1/DDP细胞HIF-1α和mdr-1基因的表达,逆转卵巢癌细胞的多药耐药.     

抑制STAT3基因表达对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人宫颈癌HeLa细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)基因的表达,观察其对HeLa细胞定植和侵袭能力的影响.方法 针对STAT3基因设计并合成编码小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸,克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,从而构建针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒,用脂质体法将其转染人人宫颈癌HeLa细胞.利用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平;通过软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力.结果 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒成功转染人宫颈癌HeLa细胞;转染成功的HeLa细胞的STAT3基因mRNA及蛋白表达均下降;HeLa细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数均明显减少.结论 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒通过下调STAT3基因表达,抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力.     

沉默STAT3基因对人卵巢癌化疗敏感性的影响

背景与目的:信号转导因子与转录激活因子3(STAT3)是近期研究较多的-种基因,在多种实体瘤如乳腺癌、胃癌和卵巢癌等中均有异常表达和活性增强.本研究旨在探讨STAT3短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体对卵巢癌细胞SKOV3化疗敏感性的作用.方法:构建STAT3基因shRNA真核表达质粒,并转染卵巢癌SKOV3细胞.试验分为SKOV3、SKOV3NX和SKOV3siRNA3组,以RT-PCR及免疫蛋白印迹法分别检测各组STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平.细胞经20 μmol/L顺铂(DDP)作用后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率.结果:MTT法检测肿瘤细胞的生长抑制率,SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞抑制率分别为0.46±0.13、0.44±0.11和0.71±0.12.与SKOV3组、SKOV3NS组相比,SKOV3siRNA组细胞抑制率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞抑制率差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞凋亡率分别为185:4、17±3和35±4.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3mRNA检测结果分别为0.50±0.08、0.48±0.07和0.31±0.09.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3 mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组细胞比较,STAT3mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白检测结果分别为0.54±0.09、0.56±0.08和0.32±0.09.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:针对STAT3基因的shRNA真核表达载体能有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞STAT3基因表达,增强其对化疗药物DDP的敏感性.     

腹腔镜下广泛子宫全切术联合盆腔淋巴结清扫术对宫颈癌的治疗价值

目的 探讨腹腔镜下广泛子宫全切术联合盆腔淋巴结清扫术对宫颈癌的细胞凋亡率及胃肠道功能恢复情况的影响。方法 本研究为回顾性研究。按照纳入标准,搜集2017年1月—2022年1月妇科收治的100例宫颈癌患者的病例资料。依据手术方法的不同分为对照组与研究组,每组50例。研究组采用腹腔镜下广泛子宫全切术联合盆腔淋巴结清扫术、对照组采用开腹广泛子宫全切术与盆腔淋巴结清扫术。分析两组患者的手术时间、术中出血量、住院时间、胃肠功能恢复时间、并发症发生率、盆腔引流管拔除时间以及手术前后的宫颈癌细胞凋亡率,术后B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、肿瘤转移相关蛋白1(MTA1)、肿瘤转移抑制基因(NM23)的表达水平。组间符合正态分布的计量资料以■±s表示,采用t检验;计数资料以例数(%)表示,采用χ²检验。结果 研究组的手术时间(161.1±15.5)min,较对照组的(119.5±14.3)min延长,差异有统计学意义(t=-13.9、P<0.01);研究组的术中出血量、住院时间、胃肠功能恢复时间、并发症发生率以及盆腔引流管拔除时...     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响

目的：探讨应用RNAi技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法：构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivinmRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝（Myr）检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：SKOV3-siRNA组细胞survivinmRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低（P〈0．05）。结论：下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响(英文)

目的:探讨应用RNA i技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivin mRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SKOV3-siRNA组细胞survivin mRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低(P<0.05)。结论:下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。