T_7噬菌体RNA聚合酶启动子控制人表皮生长因子在E．coli中的诱导性表达

Ｔ＿７噬菌体ＲＮＡ聚合酶启动子控制人表皮生长因子在Ｅ．ｃｏｌｉ中的诱导性表达王允玲，张宏权，周廷冲，王会信，柳川（军事医学科学院基础医学研究所）Ｔ＿７噬菌体ＲＮＡ聚合酶启动子是一个非常强的可诱导性启动子。通过用ＩＰＴＧ诱导整合于Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９...     

Migfilin基因的克隆和真核表达载体的构建

目的 克隆Migfilin全长cDNA,构建Flag-migfilin真核表达载体并进行序列测定,为研究migfilin与疾病的关系奠定基础.方法 根据人全长migfilin cDNA序列,设计PCR引物,以人前列腺癌cDNA文库为模板,利用PCR技术克隆migfilin全长cDNA.将扩增出的目的基因克隆至pCR 2.1载体,经Xba I/Hind Ⅲ双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA序列测定.将测序正确的目的基因克隆至Flag载体并鉴定.结果 成功克隆了migfi-lin全长cDNA,序列测定表明与已知migfilin基因序列一致.在此基础上,构建了flag-migfilin真核表达载体并进行了鉴定.结论 Flag-migfilin真核表达载体构建成功,为深入探讨migfilin在大肠癌中的作用奠定了基础.     

大鼠β乳酪蛋白启动子调控的人尿激酶原乳腺定位表达载体的构建

大鼠β乳酪蛋白启动子调控的人尿激酶原乳腺定位表达载体的构建岳军明，张宏权，王允玲，周廷冲，王会信，俞炜源，殷震（军事医学科学院基础医学研究所）尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ），亦称单链尿激酶，是一种新型的溶血栓制剂，对血栓有特异的亲和性，临床应用引起全身系统...     

人表皮生长因子基因的克隆和表达

人表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)也称尿抑胃素(Urogastrone),主要在十二指肠Brunner氏腺产生。EGF具有多种生物学作用,可刺激或抑制细胞的增殖,促进细胞的分化。EGF最近还被认为是一种脑肠肽,有神经传导和神经递质的功能。EGF在体外可以刺激多种间质及内皮细胞的生长,是无血清培养基的重要成分。日本和澳大利亚的科学家     

人酸性成纤维细胞生长因子全长cDNA的序列分析及高效表达载体的构建

人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)是一种主要作用于中胚层和神经外胚层来源细胞的细胞生长调节因子。aFGF参与血管形成、组织损伤的再生和修复、胚胎发育和分化、营养神经元、参与细胞的恶性增殖等生理和病理过程。近年来对aFGF的研究侧重于其在动物整体水平上的作用及与其它细胞生长调节因子相互作用的网络机制。为此,我们拟通过基因转染技术和转基因动物技术,建立aFGF在细胞     

粘附结构蛋白migfilin基因N末端的克隆和抗体制备

目的 克隆migfilin-N末端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物并进行多克隆抗体制备,为研究migfilin与大肠癌的关系奠定基础.方法 根据人migfilin全长cDNA系列,设计PCR引物,以人大肠癌cDNA文库为模板克隆migfilin-N末端基凶,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DNA序列测定.GST-migfilin-N融合蛋白在硫代半乳糖苷诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-migfilin-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.并用纯化的抗migfilin多克隆抗体在不同的细胞株中用Western blotting检测migfilin的表达.结果 成功克隆了migfilin-N端基因片段,表达并纯化了GST-migfilin-N融合蛋白,制备了migfilin特异性抗体.Western blotting检测migfilin在不同细胞株中的表达,结果显示migfilin在肺癌及大肠癌细胞株中高表达.结论 migfilin特异性抗体制备成功,为深入探讨migfilin在大肠癌中的作用奠定了基础.