IGF-1促进大鼠上皮根鞘HERS细胞成牙骨质分化的研究

目的:研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞增殖和分化的影响。方法:取出生后8 d的SD大鼠,分离纯化HERS上皮细胞,分为对照组和IGF-1干预组;CCK8检测细胞生长曲线;免疫荧光染色检测上皮细胞标记物细胞角蛋白14(CK14)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和间充质细胞标记物波形蛋白(Vimentin)的表达;实时定量RTPCR检测上皮细胞标记物E-cadherin,间充质细胞标记物Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1),成牙骨质分化相关基因骨涎蛋白(Bsp)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(Alp)等基因表达水平;茜素红染色检测细胞矿化情况。结果:HERS细胞能够同时表达上皮及间充质细胞标记物;IGF-1干预后,免疫荧光染色及实时定量RT-PCR结果显示HERS细胞上皮细胞标记物表达显著下降,间充质细胞标记物表达显著上调,并且明显促进细胞增殖(P<0.05)。矿化诱导环境下,IGF-1干预组7、14 d均显示成牙骨质分化相关基因表达显著上调,促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:IGF-1诱导促进HERS细胞增殖、上皮-间充质转化和成牙骨质细胞向分化。     

新型培养基促进牙乳头细胞成骨分化及其在牙周骨组织再生中的应用

  目的  探讨新型化学成分明确培养基（chemically defined medium, CDM）对牙乳头细胞（dental papilla cells, DPCs）成骨分化潜能及体内牙周骨再生的影响。  方法  分离大鼠 DPCs，按培养基不同分为传统培养基（conventional medium, CM）组和CDM组，分别在CM和新型CDM中培养，评估两组DPCs细胞表面标记、增殖、迁移、成骨分化潜能；制备SD大鼠牙周骨缺损模型，CM和CDM两组DPCs分别复合胶原凝胶植入缺损区域内，评估两组DPCs在牙周骨缺损中的骨再生修复能力。  结果  在CM和CDM组中，DPCs细胞均显示相似的细胞表面标记；与CM相比，CDM可促进DPCs增殖、克隆形成及细胞迁移（P<0.05）；定量PCR显示CDM组DPCs成骨相关基因Runx2、Alp和Opn上调（P<0.05）；碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色显示CDM组DPCs细胞 ALP活性高于CM组（P<0.05）；细胞经成骨诱导后，茜素红染色显示CDM组DPCs细胞成骨分化能力高于CM组（P<0.05）。在大鼠体内牙周骨缺损模型中，移植CDM组DPCs细胞8周后，HE染色显示缺损区域皮质骨连续的新生骨，而CM组新生骨较少，骨皮质仍未愈合，microCT扫描定量分析显示CDM组骨体积分数（BV/TV）高于CM组（P<0.05）。  结论  CDM培养基可促进DPCs增殖和成骨分化能力，为未来细胞治疗中干细胞培养基的选择提供了新的方案。