HBV感染胎盘滋养细胞的体外研究

目的：对早孕绒毛的滋养细胞进行原代培养,利用HBV感染血清对滋养细胞进行体外感染,探讨细胞在体外培养条件下对HBV的感染率及HBV在细胞中的复制状态．方法：利用胰蛋白酶和胶原酶联合消化培养法原代培养早孕胎盘中的滋养细胞,并进行免疫组化鉴定,获得纯度较高的滋养细胞后进行体外的HBV感染,通过细胞免疫化学染色、ELISA及PCR法分别检测细胞上清中的HBsAg,细胞中的HBVDNA及cccDNA．结果：原代培养的滋养细胞,细胞生长良好,特异性角蛋白一7阳性,纯度高．原代滋养细胞在与HBV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变,感染后24h和48h在滋养层细胞细胞浆中可见HBsAg的阳性表达,被感染细胞呈散在分布．感染后48h起可检测到弱阳性的HBsAg及HBVDNA,感染后细胞内未检测出cccDNA．结论：利用联合酶消化法建立了胎盘中滋养细胞的体外培养系统．HBV能够在体外感染原代培养的滋养细胞,对被感染细胞的生长无明显影响．HBV可能不在滋养细胞中复制．     

急性肝衰竭大鼠血及胃肠黏膜组织中NT，CGRP含量的变化

目的：探讨神经降压素（NT）、降钙素基因相关肽（CGRP）在急性肝衰竭（ALF）大鼠时的含量变化及其与肝性胃肠功能障碍的相关性研究.方法：用硫代乙酰胺（TAA）复制出ALF大鼠模型.观察其一般情况、肝脏生化指标、放射免疫分析法（RIA）测定其血浆及胃肠黏膜组织中NT和CGRP含量并与正常对照组相比.结果：①模型组大鼠血浆中及空肠黏膜组织中NT,CGRP含量及胃窦黏膜中NT含量明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义,（P〈0.01,P〈0.05）,胃窦黏膜中CGRP含量无明显变化;②直线相关性分析显示：模型组大鼠血浆NT,CGRP含量与丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平之间呈显著正相关（r分别为0.56,0.62,0.68,0.70,均P〈0.05）;③模型组大鼠分别于造模后（12,24,36,48h）随ALF病情的进展NT,CGRP含量呈进行性升高,其含量于造模后48,12h相比有显著性升高（P〈0.01）.结论：测定血浆NT,CGRP含量可作为判断肝功能损伤的指标之一;对于判断ALF的病情、肝性脑病、肝性胃肠功能障碍及预后有一定的指导意义。     

胸腺素α1对慢性重型乙型肝炎患者血清中sFas及sTNFR1的影响

目的:观察慢性重型乙型肝炎患者血清中可溶性Fas(sFas)及可溶性TNFR1(sTNFR1)在胸腺素α1(Tα1)治疗过程中的动态变化.方法:慢性重型乙型肝炎患者30例分为Tα1治疗组(16例)和对照组(14例),采用ELISA法检测治疗前及治疗过程中和随访时患者血清中的sFas及sTNFR1水平.结果:治疗组治疗2 wk时,sTNFR1水平与治疗前及对照组比较,均下降有显著性差异(P<0.05);而对照组无显著下降.治疗组在用药前sFas水平较对照组高,且有显著性差异(P<0.05);治疗组在治疗1 wk时sFas水平下降,较对照组低,且有显著性差异(P>0.05);并且治疗组在治疗1 wk时sFas水平较用药前显著下降(P>0.05).结论:Tα1可能通过抑制TNFR1/TNFα系统和Fas/FasL系统阻断肝细胞的凋亡,从而降低慢性重型乙型肝炎的病死率.     

乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中环氧化酶-2和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达

目的 研究HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者肝组织的环氧化酶-2(COX-2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR γ)的表达情况及其与临床指标的相关性.方法 选取ACLF患者35例,HBV相关慢性肝功能衰竭(CLF)患者35例,慢性乙型肝炎(CHB)患者27例及正常对照(NC)者15例,检测患者生物化学指标及HBV DNA水平;免疫组织化学法行肝组织COX-2和PPAR γ染色,检测并分析各组患者肝组织中COX-2和PPAR γ的表达水平及其与临床资料的相关性.多组间比较用Kruskal-Wallis检验,两组间比较用Mann Whitney非参数U检验,双变量的相关分析用Spearman相关分析.结果 ACLF组与CLF组、CHB组和NC组相比,AST、总胆红素、胆固醇、凝血酶原时间、国际标准化比率、纤维蛋白原、终末期肝病模型(MELD)评分差异有统计学意义(P值均<0.01).COX-2染色在肝细胞质呈阳性着色,PPAR γ染色以核阳性为主,亦可见细胞质阳性着色.ACLF、CLF、CHB和NC组肝组织COX-2表达水平评分分别为(4.77±0.95)分、(4.30±1.18)分、(4.65±0.70)分和(2.31±1.12)分,ACLF、CLF和CHB组表达水平高于NC组,差异有统计学意义(z值分别为-5.18、-4.50和-5.32,P值均<0.01);ACLF组高于CLF组,差异有统计学意义(z=-1.98,P<0.05).PPAR γ表达水平评分在ACLF、CLF、CHB和NC组分别为(6.23±1.78)分、(5.34±1.68)分、(5.90±1.06)分和(3.57±1.91)分,ACLF组高于其他各组,与CLF组及NC组相比,差异有统计学意义(z值分别为-2.62和-4.28,P值均<0.01).ACLF组的COX-2表达水平与MELD评分呈正相关(r=0.337,P<0.05),PPAR γ表达水平与HBV DNA水平的对数值呈正相关(r=0.348,P<0.05).结论 COX-2能反映肝脏炎症程度及肝脏损害程度,PPAR γ在慢性HBV感染时上调,并且炎症越明显,上调的幅度越大,可能是肝脏炎症时的保护机制.

Abstract：

Objective To study the expressions of cyclooxygenase-2 (COX-2) and Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR γ) in liver of patients with hepatitis B virus (HBV) related acute-on-chronic liver failure (ACLF) and their correlation with clinical parameters. Methods 35 patients with ACLF, 35 patients with HBV related chronic liver failure (CLF), 27 patients with chronic hepatitis B (CHB) and 15 normal control were enrolled to study the expressions of COX-2 and PPAR γ in the liver tissues by immunohistochemical staining, and to analyze the correlation of the COX-2 and PPAR γ levels in liver tissues with clinical parameters. Results COX-2 was distinctly expressed in the cytoplasm of the hepatocytes, but PPAR γ was mostly expressed in the nuclei of the hepatocytes and also could be seen in the cytoplasm. The expressions of COX-2 in the liver of ACLF, CLF and CHB groups increased significantly as compared with NC group (z = -5.18, -4.50, -5.32, P < 0.01). The levels of COX-2 in ACLF livers also increased evidently as compared with CLF groups (z = -1.98, P < 0.05). The expression levels of PPAR γ in ACLF liver tissues were much higher than the other three groups, and statistical significances existed between ACLF group and the other two groups (CLF, NC groups) (z = -2.62, -4.28, P < 0.01). In ACLF group, the expression of COX-2 correlated with MELD score (r = 0.337, P < 0.05) and the expression of PPAR γ correlated with HBV DNA load (r = 0.348, P < 0.05). Clinical data showed that the levels of AST, TBil, CHOL, PT, INR, FIB and MELD score in ACLF group were significantly different from that in CLF, CHB and NC groups. Conclusions COX-2 expressed in liver may be a marker to reflect the degree of inflammation and injury of liver tissue. The PPAR γ expression of liver could be increased during chronic HBV infection and may be a protective mechanism against liver injury..     

胸腺素α1治疗慢性重型乙型肝炎患者疗效观察

目的　观察胸腺素α1对慢性重型乙型肝炎患者的存活率及肝功能的影响。方法　 3 0例慢性重型乙型肝炎患者分为Tα1治疗组 ( 16例 )和对照组 ( 14例 ) ,观察患者治疗前、治疗中及随访时每周的肝功能及凝血酶原活动度。结果　治疗组存活率为5 6.2 5 % ( 9/16) ,对照组存活率为 2 1.43 % ( 3 /14 ) ,二者有显著性差异 ( χ2 =4.117,P <0 .0 5 )。治疗组治疗前和治疗结束随访第 2周时ALT下降有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;PTA升高亦有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;而AST、ALB、A/G、TCHO差异无显著性 (P >0 .0 5 )。动态检测TBil,在治疗第 1周时治疗组较对照组下降有显著性差异 (P =0 .0 4)。结论　Tαl能显著提高慢性重型乙型肝炎患者存活率 ,并能显著改善患者的肝功能     

奥美拉唑在肝硬化食道静脉曲张破裂出血治疗中疗效观察

食道静脉曲张破裂出血(EVB)是肝硬化常见的死亡原因,在治疗EVB中,除了应用降低门脉压力的传统药物以外,奥美拉唑的应用也在临床上得以重视。通过对临床联合应用奥美拉唑治疗患者的疗效观察,认为联合使用奥美拉唑可以缩短平均止血时间,提高止血效率,值得临床推广。     

胎盘Hofbauer细胞的体外培养和鉴定

目的 通过对早孕胎盘绒毛膜Hofbauer细胞的分离,纯化和培养,寻找一种稳定、简便的,可获得较高纯度Hofbauer细胞的培养方法,以满足后续实验要求.方法 通过胰酶/胶原酶联合消化法对妊娠6～10周绒毛组织进行消化,获得单细胞悬液,根据不同细胞贴壁时间的差异,对Hofbauer细胞进行纯化,并通过免疫组织化学法对Hofbauer细胞进行鉴定.结果 获得了较高纯度的胎盘Hofbauer细胞,免疫组化法鉴定CD68阳性,细胞生长状态良好.结论 利用胰酶/胶原酶联合消化法及差异贴壁法可以获得满意的人胎盘Hofbauer细胞.