黏附分子αvβ3和αvβ5介导肿瘤细胞与肿瘤内皮细胞的黏附

目的 体外分析黏附分子αvβ3和αvβ5及其配体Del-1、L1在肿瘤细胞-内皮细胞黏附中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞分析比较正常肝窦内皮细胞(LSEC)和肝癌的血管内皮细胞T3A上细胞间黏附分子1(ICAM-1)、αvβ3和αvβ5的表达以及缺氧对其表达的调控.分别用RT-PCR和Western blot方法分析6种肿瘤细胞Del-1和L1的表达及缺氧对其表达的调控.使用连续光谱荧光测定仪定量肿瘤细胞在LSEC和T3A上的黏附,并分析抗不同黏附分子的抗体和siRNA对肿瘤细胞一内皮细胞黏附的阻断作用.结果 T3A细胞αvβ3和αvβ5的基础表达高于LSEC,而ICAM-1的基础表达低于LSEC.缺氧上调两种内皮细胞αvβ3和αvβ5的表达,而ICAM-1表达仅在LSEC中升高.在不同肿瘤细胞中,Del-1和L1的基础表达存在明显差异,并且在缺氧条件下受到明显不同的调节.Del-1和L1高表达的肿瘤细胞在T3A细胞的黏附明显高于LSEC,并且在缺氧条件下黏附明显增加,这种黏附可以被抗αvβ3、αvβ5的抗体或沉默β3和β5的小干扰RNA(siRNA)阻断.结论 细胞黏附分子αvβ3、αvβ5及其配体在肿瘤细胞-肿瘤内皮细胞的黏附过程中起重要介导作用.     

热休克蛋白gp96-肽复合物诱导的抗肿瘤免疫

目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白 (HSP)gp96 肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制。方法: 从肿瘤细胞中制备HSPgp96 肽复合物, 观察其免疫诱导作用。用不同剂量及不同来源的gp96 肽复合物免疫 6组小鼠后, 用H22癌细胞攻击, 观察各组小鼠的肿瘤发生率、瘤重及瘤组织的形态学变化并与对照组相比较。观察gp96 肽复合物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮 (NO)和杀瘤活性的影响。结果: 获得的纯化HSPgp96 肽复合物的Mr为 96 000。gp96 肽复合物的免疫效果与其剂量有关, 以 18μg/只的效果最明显。交叉免疫实验证明, 免疫小鼠能抵抗同种肿瘤细胞的攻击, 而对异种肿瘤细胞的则无免疫保护作用。gp96 肽复合物可刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO同时杀瘤活性增高。结论: 从肿瘤细胞中分离纯化的HSPgp96 肽复合物免疫小鼠后, 可获得特异性的抗肿瘤作用; 其对肿瘤细胞的杀伤作用与gp96 肽复合物能增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO增多有关。     

热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化

目的：建立从比肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96-肽复合物的方法。方法：①制备H22肝癌细胞蛋白：将H22盘肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96-肽复合物的纯化：上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后，依次用ConA-Sepharose亲和层析、Sephadex G25更换缓冲液及DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化。③gp96-肽复合物的鉴定和浓度测定：所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定，Lowry法测定蛋白浓度。结果：分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带，分子量为96kD；Western blot结果证实为HSP gp96。每20ml压积H22细胞最终获得1mg的HSP gp6。结论：使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP gp96肽复合物。     

96KD糖蛋白诱导肿瘤免疫的实验研究

目的　从 H2 2肝癌细胞中纯化 96 KD糖蛋白 ,并观察其诱导肿瘤免疫作用。方法　 ( 1)分离 96 KD糖蛋白 :H2 2肝癌细胞破膜、可溶性蛋白分级硫酸铵盐析、Co A- Sepharose亲和层析、DEAE- Sephacel离子交换层析分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 ( 2 )诱导肿瘤免疫 :用不同剂量 96 KD糖蛋白分别皮下免疫 5组小鼠 ,每周 1次 ,连续两周 ,末次免疫后的第 7天用 2× 10 5H2 2细胞攻击 ,观察各组肿瘤发生率及瘤重并与对照组比较。结果　不同剂量免疫组皆显示保护作用 ,用 18μg/只 96 KD糖蛋白免疫组效果最明显。结论　使用从 H2 2肝癌细胞中分离的 96 KD糖蛋白免疫小鼠后 ,对同类癌细胞攻击显示有效的免疫保护作用。     

光学蛋白质芯片技术检测细胞培养上清液中Tie-2的研究

目的探讨经与乳腺癌细胞系MCF-7共培养内皮细胞中血管新生相关受体Tie-2的基因表达变化，并以光学蛋白质芯片技术证实该共培养上清液中可溶性Tie-2蛋白质分子的实际产物。方法采用光镜、电镜和免疫组化实验验证内皮细胞，以免疫磁珠CD133分离内皮细胞，自建的Z-MCF-7-EC培养基进行正常内皮细胞与乳腺癌细胞系MCF-7共培养，RT-PCR对内皮细胞中Tie-2进行基因表达分析，以光学蛋白质芯片检测共培养上清液中可溶性Tie-2。结果与乳腺癌细胞系MCF-7共培养后的内皮细胞的Tie-2基因表达值为Tie-2／132m值（0．55±0．21），明显高于同期培养的正常对照内皮细胞Tie-2／β2m值（0．23±0．12），P〈0．05，共培养上清液中可溶性Tie-2含量（灰度值）为（88．55±6．77），明显高于正常对照内皮细胞上清液Tie-2含量（灰度值）为（75．17±9．51），P〈0．01。结论证实肿瘤对血管内皮细胞的作用不仅通过自身分；必的Ang-2发挥促血管新生作用，还同时通过对内皮细胞的作用使其Ang-2受体Tie-2蛋白表达增加发挥促血管新生作用；无需被检物预处理和无需标记的光学蛋白质芯片技术，可用于细胞培养上清液中蛋白质标记物的直接检测。     

细胞粘附分子在肿瘤转移中的作用

转移是恶性肿瘤最重要的生物学特征之一,肿瘤的转移是一个复杂的病理生理过程,不仅涉及肿瘤细胞之间、肿瘤细胞与宿主细胞之间的相互作用,而且还涉及许多生物活性分子之间复杂的相互调控机制.在这个过程中细胞粘附分子（cellular adhesion molecule,CAM）发挥了重要的作用CAM不仅介导肿瘤细胞与肿瘤细胞、肿瘤细胞与血管内皮细胞、肿瘤细胞与淋巴细胞以及肿瘤细胞与细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的粘附,而且还介导肿瘤细胞跨内皮细胞的迁移.根据CAM的结构和功能,可将其分为钙粘素、整合素、免疫球蛋白超家族、选择素和CD44分子五大主要类别.本就这五类细胞粘附分子在肿瘤转移中的作用进行简要综述.