同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性及其机制的初步探讨

为了观察同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性,并初步探讨其分子机制。以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤CNE2、KG1a和U251细胞的活性。应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测4种细胞MHCI类链相关分子(MICA/B)和人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1~3)基因和分子的表达情况。效靶比20∶1时用AMO-1、BMO-1、M295、M310和M551单抗分别阻断肿瘤细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化。结果:NK细胞对K562、CNE2和KG1a细胞均有杀伤活性,对U251细胞无杀伤活性。在mRNA水平4种细胞均表达MICA/B和ULBP1~3基因。K562细胞表达MICA/B和ULBP1~3全部分子;KG1a和U251细胞均不表达5种分子;CNE2细胞表达MICA/B和ULBP2,不表达ULBP1和ULBP3。CNE2、KG1a和U251细胞均高表达HLAI分子,而K562细胞不表达。用单抗分别阻断靶细胞表面相应的NKG2D配体分子,NK细胞对KG1a和U251细胞的杀伤活性无变化。NK细胞对K562和CNE2细胞的杀伤活性可部分被封闭。同种异体NK细胞在体外对不同肿瘤细胞的杀伤活性不同,其杀伤机制也不完全相同。     

吉西他滨对CD34+CD38-髓系白血病干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 目的：探讨与阿糖胞苷(Ara-C)结构相似的新型脱氧胞苷相似物和核苷还原酶抑制剂--吉西他滨(gemeitabine,GEM)对CD34+CD38-KG1a髓系白血病干细胞(LSCs)增殖抑制和诱导凋亡的影响。方法：流式细胞术检测急性髓系白血病KG1a细胞表面CD34和CD38的表达; 24 h和持续用药软琼脂克隆形成实验观察不同浓度GEM对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同浓度GEM对KG1a细胞周期的影响,Annexin V/PI双染法检测不同浓度GEM对KG1a细胞凋亡的影响。结果：急性髓系白血病KG1a细胞中CD34+ CD38-占(98.02±0.72)%。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L的GEM分别作用KG1a细胞24 h、48 h和72 h后, 0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞高于盐水对照组 (P<0.05),而0.05 mg/L 和0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,软琼脂培养第14 d和21d后, 0.1 mg/L和0.5 mg/L组形成的克隆数,低于盐水对照组 (P<0.05), 0.05 mg/L GEM组14 d、21 d的克隆数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L GEM和Ara-C持续作用组,软琼脂培养14 d和21d均未见集落生长,与对照组相比差异显著(P<0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞后其凋亡率与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05）,而0.5 mg/L GEM作用24 h后KG1a细胞凋亡率显著高于盐水对照组（P<0.05）。结论：GEM能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和克隆形成,并将CD34+CD38-KG1a细胞阻滞在G0/G1期和诱导其凋亡。     

环介导等温扩增技术用于HCV基因分型的初步研究

目的建立适用于临床的常见HCV基因型的快速、敏感、有效的核酸逆转录环介导等温扩增技术(RTLAMP)。方法根据不同HCV亚型的标准序列设计HCV-1b、2a、3b和6a型特异性引物,建立及优化针对各HCV亚型的RT-LAMP试验方法;收集55例已确认为HCV RNA阳性的临床标本做检测及分型。结果本组HCV-RNA阳性标本,运用LAMP法的检出率为94.55%(52/55),其中HCV-1b型占40.38%(21/52)、2a型占9.62%(5/52)、3b型占23.08%(12/52)、6a型占26.92%(14/52)。结论建立了针对不同HCV基因型的LAMP检测方法,该法快速、敏感,适合于在临床应用。     

液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染病原体的研究

目的探讨液相芯片技术快速检测呼吸道病原体的可行性,为重大传染病原体核酸快速应急检测平台的建立提供实验依据。方法采用xTAG~?Respiratory Viral Panel Fast v2试剂盒对74例咽拭子临床标本进行检测,结果与实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行比较。结果 74例咽拭子临床标本经液相芯片技术与RT-PCR检测,阳性率分别为77.0%和68.9%,差异有统计学意义(P0.05);其中呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠道病毒、甲型H1N1流感病毒、腺病毒及人博卡病毒检出率差异均有统计学意义(P0.05)。结论液相芯片技术可以较准确地鉴定呼吸道病原体和检测混合感染的临床标本,具有快速、高通量等优势,可应用于呼吸道病原体的快速应急检测。     

NK细胞抑制CD34^＋早期急性髓系白血病细胞克隆形成

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆抑制效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞杀伤后的克隆形成,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3-CD16 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的克隆抑制率低于K562,差异有显著性(P＜0.05).结论同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆形成具有一定的抑制作用.     

医教协同理念下实验诊断学教学模式改革探索

目的 探索医教协同理念下实验诊断学教学的新模式。方法按照随机数字表法抽取新乡医学院2014级与2015级（教学模式改革前）学生各240名作为对照组，2016级与2017级（教学模式改革后）学生各240名作为试验组，进行问卷调查。问卷内容包括授课内容、教学方法、促进师生交流、教学满意度、学习兴趣、临床思维能力、综合分析能力、沟通与合作能力评价。结果试验组学生对实验诊断学教学的授课内容、教学方法、促进师生交流的满意度及教学满意度评分均高于对照组学生（P<0.001）；对实验诊断学教学能提高学习兴趣、临床思维能力、综合分析能力及沟通与合作能力的评分也高于对照组学生（P<0.001）。结论医教协同理念下通过在教学过程中应用CBL、PBL、Seminar教学法及微课进行教学模式改革，能够提高学生学习兴趣，促进师生交流，提高学生的临床思维能力、综合分析能力以及沟通与合作能力。     

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。     

肾脏缺血预处理对麻醉家兔心脏保护的神经机制(英文)

目的　探讨肾神经在肾脏缺血预处理 (RIP)心肌保护中的作用。方法　在麻醉家兔心肌缺血 /再灌注 (MIR)模型上 ,观察MIR和RIP对家兔血流动力学、心肌耗氧量、心外膜电图和心肌梗死范围的影响。结果　在MIR过程中 ,血流动力学指标和心肌耗氧量均明显持续性降低 ;心外膜电图ST段在缺血期明显升高 ,再灌注过程中恢复到基础对照值。单纯MIR时的心肌梗塞范围占缺血心肌的 (55.80± 1.2 5) % ,RIP后心肌梗塞范围为 (3 6.51± 2 .8) % ,较单纯MIR显著减少 (P <0 .0 1)。肾神经切断后对MIR所致的心肌梗死范围无明显影响 ,但可取消RIP对心肌的保护效应。结论　RIP具有心肌保护作用 ,肾短暂缺血 -再灌注所诱发的肾神经传入活动可能参与此心肌保护效应     

TJU103体外诱导造血干细胞移植的免疫耐受

目的:前期研究表明,吲哚亚甲基异烟腙(简称TJU103)可以明显降低异基因造血干细胞移植小鼠移植物抗宿主病的发生率和程度,明显延长小鼠移植后的生存期.实验拟观察TJU103诱导造血干细胞移植免疫耐受和对移植物抗白血病的影响,探索一条既能降低移植物抗宿主病又能保留移植物抗白血病的移植途径.方法:实验于2007-07/10在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成.①实验材料:人急性髓系白血病细胞株KG1a由中国医学科学院血液学研究所宋增璇教授惠赠.10份自愿捐献的健康人外周血白细胞由广州市中心血站提供,等分为供者与受者.②实验方法:采用梯度密度沉淀法常规分离人外周血单个核细胞.以供者外周血单个核细胞作为反应细胞,受者正常外周血单个核细胞作为刺激细胞,体外建立异基因造血干细胞移植中供、受者间的单向混合淋巴细胞反应体系,应用TJU103阻断CD4 T细胞激活的抗原信号通路,设单独刺激细胞和反应细胞对照以及1640完全培养基空白对照.③实验评估:于培养第1、3、5天应用MTT检测TJU103对供者淋巴细胞的增殖活性的影响,于第5天用乳酸脱氢酶释放法分别检测10∶1, 20∶1,40∶1效靶比时供者淋巴细胞对受者单个核细胞和急性髓系白血病细胞KG1a的细胞毒活性影响,同时采用流式细胞仪检测CD4 CD25 T细胞的百分比.结果:第3天和第5天实验组A值低于对照组 (P < 0.05).单向混合淋巴细胞5 d后实验组各效靶比供者T细胞杀伤受者外周血单个核细胞的活性明显低于对照孔 (P < 0.05);二者对KG1a细胞的杀伤活性差异不显著 (P > 0.05).TJU103对供者CD4 CD25 T细胞无影响.结论:TJU103降低T淋巴细胞增殖反应的同时并不影响其抗白血病效应,有望用于临床异基因造血干细胞移植中移植物抗宿主病和移植物抗白血病的免疫调节.     

Th1与Th2细胞因子及血管内皮生长因子联合检测对肺癌患者发生发展及临床诊断价值分析

目的通过检测肺癌患者和健康者的Th1、Th2细胞因子及血管内皮生长因子的表达水平,组间进行对比,统计分析之间的差异性和相关性,探究细胞因子和肿瘤生长因子联合检查肺癌的应用价值。方法选择2017年6月至2018年6月之间,在我院收治的肺癌患者血浆标本共114例作为观察组,将相同时间在我院健康体检者共92例作为对照组,检测体检组和对照组患者血浆中的Th1、Th2型细胞因子、VEGF的表达水平,同时探究细胞因子和常见肿瘤标志物的相关性,探究其在肺癌发生发展以及临床诊断中的价值。结果Th1型中,观察组血浆中的IFN-γ、IFN-α浓度均显著高于对照组(P0.05),而观察组标本中IL-2表达水平显著低于对照组组间(P0.05);Th2型中,观察组患者血浆中的IL-6、IL-8以及IL-10浓度均高于对照组,肺癌患者血浆中的VEGF浓度显著低于健康人,组间差别具有统计学意义(P0.05);女性肺癌患者的VEGF浓度显著低于男性患者(t=18.001P=0.000),临床Ⅲ/Ⅳ期患者血浆中的IL-8表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期表达水平(t=9.546,P=0.001),其余细胞因子在病情不同程度的分期上差别不大(P0.05);肺癌患者中,IL-6、IFN-γ、IL-8的浓度越高,NSE、糖类抗原CA125以及肿瘤特异生长因子水平也越高,均呈正相关,IL-10的表达和糖类抗原CA125呈正相关;血管内皮生长因子和肿瘤细胞因子为正相关。结论通过检查健康者细胞因子以及患者细胞因子和常见肿瘤标志物,同时分析了两者之间的相关性,可以有效的了解机体内免疫系统的情况,并且有可能为肺癌的免疫治疗提供新的治疗方案。