鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响

目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。     

经胚胎性自然腔道软式内镜手术治疗重症急性胰腺炎12例

目的观察经胚胎性自然腔道软式内镜手术(ENOTES)治疗重症急性胰腺炎(SAP)的近期效果。方法 12例SAP患者,在常规内科综合治疗的基础上,入院后24 h内实施ENOTES,术中清除腹腔渗液、放置腹腔灌洗管和引流管。术后给予持续腹腔灌洗和腹膜透析1周。观察治疗前及治疗后第7天的实验室指标变化及临床疗效。结果患者治疗前及治疗后第7天肠鸣音分别为(1.67±0.88)、(4.29±0.78)次/min,腹膜刺激征评分分别为(3.97±0.99)、(0.41±0.28)分,APACHEⅡ评分分别为(10.89±3.54)、(2.34±1.78)分,IAP分别为(18.37±11.02)、(6.32±1.50)cm H2O;WBC分别为(19.73±1.30)×109/L、(4.28±0.28)×109/L,CRP分别为(173.42±71.35)、(21.49±15.26)mg/L,淀粉酶(1 337.42±876.78)、(5.71±4.02)U/L,总蛋白(47.21±10.56)、(2.38±1.70)g/L,有核细胞计数(4 289.79±2 556.76)、(54.01±46.53)个/μL;治疗前后比较,P均<0.05。本组12例患者均无并发症,痊愈出院,平均住院时间(17.30±5.01)d。结论 ENOTES能有效清除SAP患者急性反应期腹腔内炎性渗液及细胞炎症因子,近期效果较好。     

大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达

目的 探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制.方法 56只大鼠分为0 h对照组与1、2、4、6、24和48 h脂多糖+D-氨基半乳糖胺处理组.在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清,肝组织苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察ELISA法检测血清细胞因子表达;反转录(RT)-PCR法检测TNF-α、IL-β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和p53基因表达;收集24 h肝组织用底物显色法检测Caspase-3、8、9,12活性.组间比较用方差分析.结果 经药物处理后,肝组织出现碎片状坏死、大量炎性细胞浸润等表现,从6 h开始,24 h和48 h显著加重.血清TNF-α浓度在1 h处理组为(727.8±261.3)ng/L,显著高于对照组及其他处理组(F=49.82,P<0.01),2 h处理组为(156.4±52.2)ng/L,显著低于1 h组,但高于对照组(F:30.23,P<0.01);血清IL-β浓度逐渐上升,24 h处理组最高,为(360.5±121.6)ng/L(F=18.61,P<0.01).24 h处理组肝组织Caspase-3、8、9、12活性明显高于对照组(F=84.96,P<0.01).iNOS基因在对照组无表达,药物作用后6 h达最高,24 h和48 h则显著下降(F=34.07,P<0.01);p53基因在24 h和48 h处理组表达明显增高(F=37.43,P<0.01);TNF-α和IL-1β基因表达均较对照组升高(F=2.94,P<0.05),其峰值均出现在1 h处理组.结论 小剂量脂多糖可诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝损伤;Caspase-3、8、9、12活性明显增强是其特征性改变之一;肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高水平表达有密切关系.     

经自然腔道软式内镜治疗重症急性胰腺炎的价值探讨

目的 探讨经自然腔道软式内镜对重症急性胰腺炎(SAP)早期腹腔病变的治疗价值.方法 SAP患者随机分成内镜组(69例)和对照组(65例).内镜组患者在常规治疗基础上,入院8h内实施经自然腔道腹腔内镜治疗,对照组患者采用常规治疗.结果 内镜组患者入院第2天出现肠蠕动,第8天肠蠕动恢复正常;对照组患者入院第8天出现肠蠕动(P＜0.01),第14天肠蠕动恢复正常(P＜0.01).内镜组人院第2、4、8、10、14天腹腔内压力显著低于对照组(P＜0.01),入院第4、8、10、14天外周血TNF-α、IL-6、IL-8浓度显著低于对照组(P＜0.01),入院第2～14天APACHEⅡ评分显著优于对照组(P＜0.05).内镜组治愈65例(94.20％),好转2例(2.90％),死亡2例(2.90％),平均住院(15.98±7.88)d;对照组治愈32例(49.23％),好转22例(33.85％),死亡11例(16.92％),平均住院(56.85±20.54)d.两组治愈率、好转率及死亡率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 经自然腔道软式内镜治疗和腹腔置管灌洗透析能清除SAP患者早期腹腔内炎性渗液,解除腹腔内高压,置管引流和腹膜透析微创、有效,值得推广.     

高脂血症性重症急性胰腺炎规范化治疗方案的探讨

目的探讨高脂血症性重症急性胰腺炎(HL-SAP)的规范化治疗方案。方法选择2010年5月至2012年5月东莞东华医院收治的100例HL-SAP患者作为研究对象,依照患者入院顺序的奇偶数分成两组,其中常规治疗组50例实施常规治疗,规范治疗组50例实施规范化治疗。比较两组患者治疗后的效果。结果规范治疗组手术治疗的人数、病死率以及复发率均显著少于常规治疗组(P<0.05)。结论对HL-SAP患者实施规范化治疗,有助于减少手术治疗的人数,降低病死率以及复发率,值得临床推广应用。     

经自然腔道内镜手术腹腔内镜探查对腹膜恶性肿瘤的诊断价值

目的探讨经自然腔道内镜手术（NOTES）腹腔内镜探查对腹膜恶性肿瘤的诊断价值。方法回顾性分析腹膜恶性肿瘤患者NOTES腹腔内镜探查的内镜表现、肿瘤病理学诊断及肿瘤来源。结果53例腹膜恶性肿瘤患者中,腹膜结节型32．2％,腹膜溃疡型22．6％,腹腔肿块型22．6％,腹膜浸润型13．2％,网膜包裹型9．4％。腹膜恶性肿瘤肿瘤病理学诊断结果：淋巴瘤17．0％,间质瘤15．1％,腹膜粘液细胞癌11．32％,腹膜间皮瘤11．32％,腹膜转移癌45．3％。24例腹腔转移癌的组织来源：卵巢癌腹腔转移29．2％,胃癌腹腔转移16．6％,结肠癌腹腔转移12．5％,原发性肝癌腹腔转移12．5％,胰腺癌腹腔转移8．3％,十二指肠乳头癌腹腔转移4．2％、胆管细胞癌腹腔转移4．2％,原发病灶不明者12．5％。结论NOTES腹腔内镜探查对腹膜病变检查直观性强,获取病理标本靶向性好,是诊断腹膜恶性肿瘤的安全有前方法。     

不同强度恒磁场协同顺铂促进U2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制

[目的]探讨不同强度恒磁场促进顺铂诱导的U2骨肉瘤细胞(U2-OS)细胞凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因表达变化的情况.[方法]分别使用1 mT、10 mT、100 mT恒磁场和加入3.0 μg/ml顺铂的细胞培养液共同培养U2-OS细胞24 h.采用四甲基氮唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测恒磁场和顺铂联合对U2骨肉瘤细胞体外增殖、凋亡及相关基因表达.[结果]不同强度恒磁场能促进顺铂对人U2-OS细胞的抑制作用,10 Gs场强下其抑制率、凋亡率最高;凋亡率达37.66%,而p53 mRNA表达最强,bcl-2、c-myc mRNA表达最弱.[结论]不同强度恒磁场协同顺铂通过诱导细胞内p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化是其抗肿瘤的机制之一,10 Gs场强下协同顺铂的抗肿瘤作用最强.     

消化内镜在炎症性肠病诊治中的临床应用

目的探讨消化内镜在炎症性肠病诊治中的临床应用价值。方法选自2012年1月至2013年1月到我院进行治疗的炎症性肠病患者60例，对这60例患者的临床资料进行研究，总结消化镜的临床诊断价值。结果克罗恩病患者有20例，平均镜检3．2次，在3周左右确诊，诊断正确例数为16例，诊断的正确率为80％。溃疡性结肠炎患者有40例，平均镜检3．8次，在7周左右确诊，诊断正确例数为38例，诊断的正确率为95％。结论消化内镜在炎症性肠病诊治中具有较高的正确率，具有很好的临床诊断价值，值得临床推广使用。     

内镜下氩离子凝固术治疗胃癌前病变临床研究

目的探讨内镜下氩离子凝固术治疗胃黏膜癌前病变的价值及安全性。方法应用奥林巴斯260电子胃镜结合病理对108例胃黏膜癌前病变患者进行氩离子凝固术治疗,所有病例治疗6月后进行临床随访、内镜及病理组织学复查。结果 108例患者其中胃黏膜肠上皮化生43例（39.8%）及上皮内瘤变65例（60.2%）,104例患者临床症状减轻,复查胃镜示原病灶消失,复查病理组织学示胃黏膜肠上皮化生或上皮内瘤变消失,尚存慢性活动性炎症（92.6%）或萎缩性炎症（5.6%）,治疗有效率98.1%,所有病例治疗中未发生出血、穿孔等并发症。结论内镜下氩离子凝固术治疗胃黏膜癌前病变安全、有效、快捷、经济,值得在基层医院推广。     

经胚胎性自然腔道内镜手术治疗重症急性胰腺炎合并腹腔间隔室综合征

目的 探讨急诊经胚胎性自然腔道内镜手术(ENOTES)及软式内镜治疗重症急性胰腺炎合并腹腔间隔室综合征(ACS)的价值.方法 SAP合并ACS患者随机分成ENOTES组和外科手术组.在常规治疗基础上,ENOTES组患者入院4h内实施经ENOTES及软式内镜治疗,外科手术组患者入院4h内实施开腹手术治疗.比较两种治疗方法的腹腔压力变化、APACHEⅡ评分、治愈率、并发症.结果 ENOTES组与外科手术组患者手术前腹腔内压力差异无统计学意义(22.57±7.48) cmH 2O(1 cmH 2O=0.098 kPa) vs.(24.000±5.62) cmH 2 O,(P＞0.05).ENOTES组患者术后第1、3、5、7天腹腔内压力是(12.09±5.23) cmH 2O、(9.41 ±3.12) cmH 2O、(7.878±2.24) cmH2O、(7.15±1.34) cmH2O;外科手术组患者术后第1、3、5、7天腹腔内压力是(12.55 ±2.88) cmH2O、(8.82±4.14) cmH 2O、(7.45±2.38) cmH 2O、(7.54±3.18)cmH 2O,两组患者手术后腹腔内压力差异无统计学意义(P＞0.05).ENOTES组与外科手术组手术前APACHEⅡ评分差异无统计学意义(14.82±4.00) vs.(17.00±6.78),(P＞0.05).ENOTES组患者术后第1、3、5、7天APACHEⅡ评分是(10.05 ±2.43)、(8.74±2.48)、(7.18±2.72)、(6.35±2.78).外科手术组患者术后第1、3、5、7天APACHEⅡ评分是(13.38 ±3.12)、(12.92±4.03)、(10.08±3.30)、(9.54±3.18).两组患者手术后APACHEⅡ评分差异具有统计学意义(P＜0.05).ENOTES组治愈率96.8％,外科手术组治愈率78.5％,两组患者治愈率差异具有统计学意义(P＜0.05).ENOTES组并发症12.5％,外科手术组并发症50.0％.两组患者并发症差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 急诊ENOTES及软式内镜治疗重症急性胰腺炎合并ACS安全、有效、微创、术后并发症少,值得推广.