FBXW7α对结直肠癌细胞中热休克转录因子1表达和定位的影响

目的 探讨FBXW7对结直肠癌细胞中热休克转录因子1（HSF1）表达和定位的影响。方法 Western blot法检测敲除FBXW7及WT的结直肠癌细胞系HCT116和DLD1中HSF1及pHSF1^Ser326蛋白的表达;免疫荧光和Western blot检测在热休克及恢复期细胞中pHSF1^Ser326的核蛋白表达和定位。结果 过表达FBXW7α的DLD1细胞中HSF1蛋白表达显著降低（P<0.01）;敲除FBXW7的HCT116和DLD1细胞中HSF1和pHSF1^Ser326总蛋白表达显著升高（均P<0.05）。与WT组比较,敲除FBXW7的细胞中HSF1和pHSF1^Ser326主要累积在细胞核,而胞质表达较弱;温热刺激后,WT细胞中HSF1及pHSF1^Ser326表达恢复至未刺激水平,而敲除FBXW7的细胞中HSF1及pHSF1^Ser326在核中有较强表达（均P<0.01）。结论 敲除FBXW7的结直肠癌细胞热刺激后,细胞核HSF1水平恢复受阻,可能与缺失FBXW7不能降解胞核HSF1有关。     

泛素连接酶Cul7调控人滋养层细胞 Notch1蛋白稳定性

目的 探讨泛素连接酶Cullin 7(Cul7)在人胎盘绒毛外滋养层细胞HTR8/SVneo中对Notch1蛋白稳定性的影响,初步阐明Cul7对Notch1蛋白表达的调控作用。方法 Western blot法检测Cul7基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中Notch1蛋白表达的变化。慢病毒稳定转染构建Cul7低表达HTR8/SVneo细胞系,通过real-time PCR检测Notch1 mRNA的表达。Western blot法检测干扰或过表达Cul7后Notch1蛋白的表达。应用蛋白免疫共沉淀(Co-IP)确定Cul7与Notch1蛋白结合情况。结果 与野生型MEF细胞比较,Cul7基因敲除MEF细胞Notch1蛋白表达增加。在HTR8/SVneo细胞也观察到干扰Cul7后Notch1蛋白表达显著升高,但对Notch1 mRNA的表达无显著影响。用放线菌酮(CHX)处理细胞后,与对照组比较干扰Cul7使Notch1蛋白降解的半衰期延长。将Flag-Notch1重组质粒和HA-Cul7真核表达质粒导入HTR8/SVneo细胞后,Co-IP结果显示外源性Cul7与Notch1无结合。结论 Cul7调控Notch1降解速度,但对Notch1转录表达无显著影响。Cul7可能通过间接方式调控Notch1蛋白稳定性。