肾上腺StAR/P450scc介导乙醇孕期暴露所致的IUGR发生机制

目的孕期乙醇暴露可导致严重的生殖毒性。甾体合成急性调节蛋白(StAR)和P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)是甾体激素合成的限速酶,甾体激素在胎儿生长发育过程中起着重要作用。本实验观察了孕中晚期乙醇连续暴露对胎鼠生长发育的影响,并探讨其导致IUGR的可能机制。方法雌鼠于6PM按雌雄比2∶1合笼,次晨观察雌鼠阴栓,查到阴栓之日为受孕第0天。于孕第11天开始,给予乙醇6.4g/(kg.d)灌胃。孕第17天处死孕鼠,观察孕鼠体重增长率、IUGR发生率以及胎鼠的体重、身长、尾长和胎盘重,检测孕鼠血清皮质酮水平,孕鼠肾上腺StAR/P450scc、胎盘11β-羟类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)和胎鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA水平。结果和正常对照组相比,乙醇暴露组孕鼠体重增长率在第17天时明显减慢(P<0.01),胎儿体重、身长、尾长及胎盘重量均有明显降低(P<0.01),胎鼠IUGR发生率明显增高(88.2%,P<0.01)。孕鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA水平显著升高(P<0.01),但孕鼠血清皮质酮水平无明显改变,同时胎盘11β-HSD2、胎鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论孕中晚期乙醇暴露可致小鼠IUGR发生,其机制可能与乙醇影响母体和胎儿肾上腺甾体激素合成功能,降低胎盘甾体激素灭活功能,进而影响胎儿生长发育有关。     

咖啡因暴露对小鼠胚胎发育的影响

目的:评价孕前和孕期咖啡因对雌性小鼠受孕、着床及胚胎发育的影响。方法:孕前和孕期灌胃给予不同剂量咖啡因(60,120和240 mg/kg.d),以等容积蒸馏水作正常对照。记录各组母鼠体重增长率、小鼠受孕率、着床数和胎盘重量,进行活胎的一般情况检查(体重、身长、尾长)及外观、内脏、骨骼畸形检查。结果:与正常对照组比较,咖啡因组母鼠体重增长率明显降低(P<0.01,P<0.05),咖啡因组小鼠的受孕率明显降低,受孕延迟,吸收胎和死胎数发生率亦增加,呈剂量依赖性,但各组着床数无明显差异。咖啡因小、中、大剂量组胎鼠平均体重、身长、尾长、胎盘重均明显低于正常对照组(P<0.01,P<0.05),胎鼠宫内发育迟缓(FGR)发生率分别为6.8%、23.3%、98.3%;各组胎鼠外观、内脏、骨骼畸形检查未见异常。结论:孕前和孕期咖啡因暴露可致小鼠受孕延迟,胎鼠吸收胎、死胎、FGR发生率升高。     

妊娠状态下大鼠肝脏外源物代谢功能的改变

目的:观察妊娠状态下大鼠肝脏外源物代谢相关酶活性的变化,探讨其可能带来的临床意义。方法:雌性大鼠分为未受孕和受孕(妊娠21d)两组。测定两组大鼠肝脏外源物代谢相关酶(包括Ⅰ相酶、Ⅱ相酶和抗氧化酶)活性。结果:受孕组大鼠肝微粒体Ⅰ相酶——细胞色素P450(CYP450)1A1、1A2、1B1、2B1、2E1和3A活性分别下降至未孕组的62.3%(P<0.01)、43.8%(P<0.01)、75%(P<0.05)、80%、64.6%(P<0.05)和87.8%,而Ⅱ相酶葡萄糖醛酸转移酶(UGT)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性分别增加至未孕组的1.23倍(P<0.05)和1.17倍(P<0.05)。受孕组大鼠肝细胞质超氧化物歧化酶(SOD)活性增加至未孕组的1.31倍(P<0.01),而谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(Cat)活性下降至未孕组的81.2%(P<0.01)和47.5%(P<0.01)。谷胱甘肽还原酶(GSH-Re)活性没有显著差异。结论:妊娠状态下,大鼠肝脏外源物代谢酶活性均发生变化。这些酶活性改变可能是母体对妊娠时期机体生理学变化的一种适应性保护作用,该变化将影响妊娠母体的药物代谢能力及临床疗效。     

食蟹猴妊娠早期血清生殖激素的变化

目的:通过研究食蟹猴妊娠早期生殖激素的变化,为进行食蟹猴胚胎-胎仔发育毒性试验提供数据支持。方法:食蟹猴在怀孕第0天(gestation day 0,GD0)和怀孕第20天(GD20)采血分离血清检测孕酮水平。怀孕的雌猴于GD27～GD100每周采血1次,采用化学发光法检测血清中雌二醇、孕酮和催乳素的水平。结果:怀孕雌猴GD20的孕酮水平显著高于GD0。GD0～GD27孕酮水平缓慢上升,GD27达到高峰后下降,在GD48至最低,随后至GD100呈逐渐上升趋势。GD0～GD27雌二醇水平也缓慢上升,之后降低,在GD34达到最低水平,随后呈上升趋势,至GD100达到最高。催乳素水平从CD0开始缓慢上升,GD69达最高,后趋于平稳。结论:食蟹猴妊娠早期主要生殖激素随妊娠发展呈现动态变化,孕酮水平可作为早孕诊断的辅助参考。     

咖啡因暴露对小鼠胚胎发育的影响

目的：评价孕前和孕期咖啡因对雌性小鼠受孕、着床及胚胎发育的影响。方法：孕前和孕期灌胃给予不同剂量咖啡因（60,120和240 mg/kg.d）,以等容积蒸馏水作正常对照。记录各组母鼠体重增长率、小鼠受孕率、着床数和胎盘重量,进行活胎的一般情况检查（体重、身长、尾长）及外观、内脏、骨骼畸形检查。结果：与正常对照组比较,咖啡因组母鼠体重增长率明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,咖啡因组小鼠的受孕率明显降低,受孕延迟,吸收胎和死胎数发生率亦增加,呈剂量依赖性,但各组着床数无明显差异。咖啡因小、中、大剂量组胎鼠平均体重、身长、尾长、胎盘重均明显低于正常对照组（P〈0.01,P〈0.05）,胎鼠宫内发育迟缓（FGR）发生率分别为6.8%、23.3%、98.3%;各组胎鼠外观、内脏、骨骼畸形检查未见异常。结论：孕前和孕期咖啡因暴露可致小鼠受孕延迟,胎鼠吸收胎、死胎、FGR发生率升高。     

咖啡因暴露对小鼠胚胎发育的影响及机制

目的观察孕前和孕期咖啡因对雌性小鼠受孕及胚胎发育的影响,探讨咖啡因的生殖毒性及其机制。方法灌胃给予雌鼠不同剂量咖啡因(60、120和240mg/(kg.d)),连续7d后雌雄合笼,检雌鼠阴栓日为孕第0天,继续给药至孕第18天,处死孕鼠,剖腹取胎。记录各组孕鼠体重增长率和受孕率,胎鼠活胎体重、身长、尾长,胎盘重量及病理改变。测定胎盘组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(Cat)活力,胎鼠肾上腺急性调节蛋白(StAR)和胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达。结果与正常对照组比较,咖啡因暴露组雌鼠受孕率明显降低,受孕延迟,呈剂量依赖性,孕鼠体重增长率明显降低,胎鼠平均体重、身长、尾长以及胎盘重均明显低于正常对照组(P<0.01,P<0.05),吸收胎和死胎数亦增加,胎鼠宫内发育迟缓(IUGR)发生率分别为6.8%、23.3%和98.3%。光镜下见咖啡因组胎盘滋养层细胞减少,血管壁增厚。咖啡因大剂量组胎盘MDA含量升高(P<0.05),SOD活力降低(P<0.05),Cat酶活力呈降低趋势。咖啡因组胎鼠肾上腺StAR表达均比正常对照组低。结论孕前和孕期咖啡因暴露可致小鼠受孕延迟,胎鼠IUGR发生率升高。胎盘抗氧化功能改变和胎鼠甾体激素合成功能减弱可能是咖啡因致小鼠胚胎发育毒性的重要机制。     

尼古丁能非AhR依赖性的改变宫内发育迟缓大鼠胎肾上腺的甾体合成功能

目的：孕期尼古丁暴露是导致胎儿宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，IUGR）的重要原因。IUGR与胎儿内分泌功能的紊乱密切相关。胎盘的11β-羟基类固醇脱氢酶-2（11β-hydroxysteroid dehydrogenase-type2，11β-HSD-2）是胎儿和母体之间的糖皮质激素屏障，可防止母体过多糖皮质激素所导致的胎儿生长受限。肾上腺是与生长发育密切相关的重要内分泌器官，研究发现，胎肾上腺已具备基本的甾体激素合成功能，     

非人灵长类模型在生殖发育毒性评价中的应用

随着生物技术药物研发的增加,使用非人灵长类动物进行发育和生殖毒性研究已越来越普遍。食蟹猴是发育和生殖毒性研究最理想的非人灵长类动物模型,这一种属在生殖和内分泌方面与人类十分类似。本文介绍了非人灵长类在发育毒性(胚胎-胎仔发育,围产期发育)和生殖毒性(雌性和雄性)研究中的应用,为灵长类发育和生殖毒性实验设计的优化提供参考。     

体外评价口服降糖药对HepG2细胞线粒体功能的影响

目的:评价DPP- Ⅳ抑制剂类口服降糖药A化合物的线粒体毒性,从而探讨A化合物的可能毒性机制?方法:HepG2细胞培养基中分别加入曲格列酮50~300 μmol/L,培养24 h,或加入A化合物溶液100~300 μmol/L,培养24 h,CCK8细胞计数法测定细胞存活率?HepG2细胞培养基中分别加入曲格列酮100?200和225 μmol/L培养24 h,或加入A化合物溶液100?150和200 μmol/L培养24 h,化学发光法检测胞内ATP合成水平,荧光探针法检测胞内钙离子浓度?活性氧?线粒体膜电位(?驻Ψm)变化,透射电镜观察线粒体超微结构?结果:与溶媒对照组相比,曲格列酮50~300 μmol/L可以抑制细胞存活率,IC50为178 μmol/L;A化合物 100~300 μmol/L对细胞存活率有抑制作用,IC50为159 μmol/L?与溶媒对照组相比,曲格列酮≥200 μmol/L时导致线粒体ATP显著下降(P<0.01)??驻Ψm显著性下降(P < 0.01),≥100 μmol/L时可致活性氧水平和钙离子浓度显著升高(P < 0.05或P < 0.01)?A化合物≥100 μmol/L时ATP合成水平显著降低?钙离子浓度显著升高(P < 0.01),≥150 μmol/L时活性氧水平明显升高(P < 0.01),≥200 μmol/L时?驻Ψm显著性下降(P < 0.05),并可导致线粒体结构发生病变?结论:DPP- Ⅳ抑制剂类口服降糖药A化合物可以通过干扰线粒体代谢功能和结构而诱导线粒体损伤?     

醋氨酚所致精密肝切片损伤模型的建立及CYP2E1的调节作用

目的：利用精密肝切片（PCLS）技术,建立醋氨酚所致肝切片损伤的体外模型,并探讨CYP2E1活性变化对肝损伤的调节作用,为研究和筛选肝保护药物提供实验依据。方法：利用振荡切片机制备PCLS,建立培养系统。将终浓度为500μmol/L的醋氨酚分别与切片共孵育0、2、4、6h,测定培养基和切片中的谷胱甘肽S-转移酶（GST）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。在体给予不同剂量（0.25、0.5、1.0g/kg）的CYP2E1诱导剂乙醇,每天一次,连续3d。末次给药8h后处死动物,取其肝脏制备PCLS,再与500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。正常PCLS与不同浓度的二乙基二硫代氨基甲酸酯盐（DDTC,CYP2E1抑制剂）（5、10、20μmol/L）、500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。结果：与常规培养组比较,醋氨酚孵育4、6h组的GST和LDH漏出率显著升高（P〈0.01）。与醋氨酚模型对照组比较,乙醇中、大剂量组LDH漏出率和小、大剂量组ALT漏出率皆升高（P〈0.01,P〈0.05）;DDTC各浓度组ALT漏出率则降低（P〈0.05）。结论：PCLS与500μmol/L醋氨酚共孵育4h即能成功地建立体外肝切片损伤的模型。抑制CYP2E1活性可能对醋氨酚所致的肝损伤有保护作用,而上调CYP2E1活性则可能加重醋氨酚所致的肝损伤。