舌鳞癌Tca8113细胞株干细胞相关差异表达基因的筛选及分析

目的应用抑制消减杂交（SSH）技术筛选舌鳞癌干细胞相关差异表达基因。方法以舌鳞癌Tca8113细胞株中的醛脱氢酶（ALDH）高表达（ALDHbr）细胞与低表达（ALDHlow）细胞互为实验组和对照组,进行正反向消减杂交后建立差异表达基因文库,随机挑选差异基因克隆进行测序及生物信息学分析。结果经Blast比对分析,得到62条差异表达基因;功能聚类发现多数与细胞周期调节、细胞分化等生物行为相关;信号通路分析显示有11条基因参与的12条信号通路发生显著改变。结论应用SSH技术成功筛选出了与舌鳞癌干细胞相关的一些基因,进一步研究这些基因对探索舌鳞癌干细胞特异性表面标志物具有重要意义。     

PTP4A1在舌鳞癌组织及TCA8113细胞中的表达及意义

目的：检测PTP4A1基因在舌鳞癌组织及舌鳞癌细胞系TCA8113中的表达,并探讨其表达水平与舌鳞癌临床病理参数的关系。方法：应用免疫组化SP法检测30例舌鳞癌和15例正常舌组织石蜡包埋组织中PTP4A1的表达;对15例新鲜舌鳞癌组织进行real-time PCR,检测PTP4A1在舌鳞癌组织、癌旁组织、正常舌组织的表达,此外对TCA8113细胞中PTP4A1的表达水平也进行了检测。结果：免疫组化结果显示,PTP4A1表达于舌鳞癌组织的细胞质和细胞核,在舌鳞癌组织中呈阳性和强阳性表达,而在正常舌组织中呈阴性和弱阳性表达;PTP4A1在舌鳞癌的阳性表达率为83%,显著高于其在正常舌组织中的表达率33.3%;PTP4A1在舌鳞癌组织和正常舌组织的表达差异有统计学意义（P=0.001<0.05）;而且PTP4A1的表达水平与肿瘤的淋巴转移相关（P=0.014<0.05）,而与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、肿瘤的分期分级无明显相关。Real-time PCR实验结果显示舌鳞癌组织及舌鳞癌细胞系TCA8113细胞中的PTP4A1的mRNA表达水平高于其在癌旁和正常舌组织的表达,癌旁组织的表达高于正常舌组织的表达（P=0.000<0.05）。结论：PTP4A1基因mRNA水平和蛋白水平表达在舌鳞癌组织中表达均较癌旁和正常舌组织高,可能在舌鳞癌的发生发展过程中起着一定作用。     

舌鳞癌干细胞相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析

目的对构建的舌鳞癌干细胞相关差异表达cDNA文库进行初步鉴定及分析。方法将差异表达cDNA文库中的cDNA片段转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,正反向文库各随机挑取120个白色克隆进行PCR鉴定并测序。将测序所得序列提交GenBank进行Blast同源性分析。利用PubMed数据库检索已报道的与干细胞相关的差异基因并进行生物信息学分析。结果 PCR鉴定显示挑取的克隆均为阳性克隆,测序获得224个EST片段。经同源性分析得到62个已知基因,其中9个已有相关文献报道与干细胞生物特性相关,可归类于细胞分化调节、低氧应答、细胞凋亡调节等。结论对前期构建的干细胞相关差异表达cDNA文库进行克隆分析得到一些干细胞相关基因。     

siRNA沉默PTP4A1表达对人舌鳞癌细胞系TCA8113体内外生物学行为的影响

目的 探讨特异性沉默人舌鳞癌细胞系TCA8113中PTP4A1基因的表达,并研究沉默该基因表达后对TCA8113细胞体内外生物学行为的影响.方法 采用siRNA的慢病毒载体siRNA-PTP4A1作为阳性干扰组(KD),空病毒载体作为阴性对照组(NC),未作任何处理的TCA8113细胞作为空白对照组(CON).Real-time PCR和Westem blot检测PTP4A1基因的干扰效果,MTT法检测3组细胞的增殖能力,流式细胞技术分析3组细胞凋亡和细胞周期情况,平板克隆形成实验检测体外克隆形成能力,Western blot分别检测3组细胞抑制凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达情况,3组细胞分别裸鼠成瘤后观察移植瘤的生长情况.结果 siRNA-PTPA1转染TCA8113细胞成功,Real-time PCR和Western blot 检测PTP4A1基因的抑制率达到55％和60％以上(P ＜0.05);MTT结果显示KD组细胞增殖能力小于NC、CON组;细胞凋亡率也明显增加,KD组早期凋亡为(17.48 ±0.70)％,而NC、CON组的早期细胞凋亡率为(7.34±0.70)％和(4.86±0.25)％ (P ＜0.01);KD组细胞周期阻滞在G1/G0和S期(P＜0.05);Western blot结果显示Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01),Bax蛋白表达增高(P＜0.01);KD组体外克隆形成数小于NC、CON组(P＜0.01);KD组裸鼠移植瘤的生长速度缓慢,质量和体积均小于NC、CON组(P＜0.0l).结论 siRNA PTP4A1在体内外均能有效抑制舌鳞癌TCA8113细胞的恶性生物学行为,PTP4A1基因可能与舌鳞癌的发生、发展相关.     

机用ProTaper镍钛锉在磨牙根管治疗中的临床研究

目的 评价ProTaper镍钛锉在磨牙根管治疗中的效果.方法 选取患牙髓病、根尖周病患者97例,共108颗患牙,随机分两组;1组用ISO不锈钢K锉逐步后退手扩法预备根管(手扩组),1组用机用ProTaper镍钛锉冠向深入法预备根管(机扩组);均采用氢氧化钙碘仿糊剂导入根管封药,7～10 d后复诊;复诊无症状、无叩痛时采用AH糊剂加牙胶尖侧压充填根管;机扩组用0.04或0.06锥度牙胶尖充填,手扩组用0.02锥度牙胶尖充填.观察比较两组的根管预备时间、根管预备形态、器械折断情况和根管充填效果,并行根管预备术后疼痛评估.结果 机扩组的根管预备时间和根管充填时间均短于手扩组,差异均有统计学意义(P＜0.001);机扩组根管预备形态优于手扩组,器械分离率低于手扩组,差异均有统计学意义(P＜0.001);机扩组根充恰填率高于手扩组,差异有统计学意义(P＜0.001);机扩组根管预备后疼痛发生率低于手扩组,差异有统计学意义(P=0.020).结论 ProTaper机扩在根管治疗效率和效果方面均优于不锈钢K锉手扩.     

基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库

目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞;用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%;分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D(260)/D(280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200～700 bp,无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。     

舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签的生物信息学分析

目的:对利用抑制消减杂交技术获得的舌鳞癌干细胞相关表达序列标签(Expressed squence tag,EST)进行电子克隆及序列分析.方法:利用互联网上的公共数据库及生物信息学分析软件对获得的舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索克隆差异表达基因的研究方法和策略.结果:通过电子延伸得到...