狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证

目的在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证。方法查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列。将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平。结果筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P0.05)和(83.22±4.37)%(P0.0001),差异有显著性。结论成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础。     

30只普通绵耳狨猴血液学和血清生化指标的测定及分析

目的检测30只普通绵耳狨猴的血液学、血清生化指标,对雌雄性别组间进行检验,与狨猴和猕猴测定值比对。方法保持动物清醒状态,后肢静脉采血,应用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定血液学及血清生化指标,测定结果与狨猴和猕猴相关数据进行比较。结果血液学指标中,雌雄组间各指标差异无显著性。血清生化检测中雌猴组与雄猴组差异有显著性的指标有高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P0.05),其他指标差异无显著性,对比国外狨猴群体,本单位饲养的狨猴群体的血红蛋白(HGB)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、中性粒细胞(NEUT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、球蛋白(GLOB)指标数据明显升高,但与猕猴数据测定值范围相符。结论对本单位饲养的普通绵耳狨猴的血液学和血清生化指标进行测定,并与狨猴和猕猴相关数据进行比较,为药理、毒理研究以及狨猴疾病诊疗提供基础数据。     

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。     

狨猴人工辅助生殖技术及基因修饰模型研究进展

普通绵耳狨猴是体型较小的非人灵长类实验动物,具有饲养成本低,繁殖效率高,性成熟时间短等优势,非常适合开展辅助生殖技术及基因修饰模型研究。狨猴的人工辅助生殖技术(assisted reproduction technology,ART)主要包括:精液采集、超数排卵、卵母细胞采集、体外成熟、体外授精、胚胎培养和移植等。目前各项技术的研究较全面,但仍有细节亟需完善。随着基因编辑技术的兴起,基于人工辅助生殖技术的狨猴基因修饰研究逐渐成为热点。2009年日本首次成功开展转基因狨猴研究,截至目前,中国尚无基因修饰狨猴相关报道。本文就近年来狨猴人工辅助生殖技术,以及狨猴基因修饰研究进展进行综述。     

雪貂微卫星DNA遗传多样性分析

目的筛选、优化雪貂微卫星DNA引物,评估、分析雪貂种群的遗传多样性。方法采用21个雪貂微卫星位点,对随机抽取的30只雪貂血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,PCR产物经2%Agrose电泳和6%PAGE电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析。结果 21个微卫星标记均呈现出遗传多样性,共检测到49个等位基因,观测等位基因数1~4个,平均2.3个;有效等位基因数1.000~3.750个,平均1.6685个;观察杂合度0~0.7333,平均0.3216;期望杂合度0~0.6424,平均0.3394;香隆指数0~1.1773,平均1.0768;多态信息含量0~0.6100,平均0.5485。结论本文筛选的21对雪貂微卫星引物,通过微卫星扫描分析验证,具有稳定的PCR扩增,微卫星标记均表现为多态性,并处于期望数值范围,没有显著地偏离Hardy-Weinberg平衡期望值。     

实验用狨猴微卫星引物筛选及遗传多样性分析

目的筛选、优化狨猴微卫星DNA引物,用以对中国医学科学院医学实验动物研究所引进的实验用狨猴种群进行遗传学分析及评估。方法用筛选的20对狨猴微卫星引物,对随机抽取的30只狨猴血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,扩增产物经电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析。结果 20对微卫星引物均呈现出遗传多样性,共检测147个等位基因,观察等位基因数5~10个,平均7.35个;有效等位基因数2.2500~6.3830个,平均4.0402个;观察杂合度0.000~0.4667,平均0.1533;期望杂合度0.1424~0.4350,平均0.2506;香隆指数1.2242~2.0324,平均1.5949;多态信息含量0.5366~0.8254,平均0.7053。结论本文筛选的20对狨猴微卫星引物具有高度遗传多样性,均处于Hardy-Weinberg平衡状态。