组织工程技术系列专题（一）——组织工程技术的产业化现状

导言 组织缺损和器官衰竭是威胁人类健康的严重问题之一。针对较大创伤与病损组织器官的修复重建,现有的主要手段包括移植（自体移植、同种异体移植、异种移植）和人工替代物。这些途径虽然在一定程度上提高了患者的生存质量和健康水平,但是其中也存在一定问题和缺陷。因此,人们在尽可能完善现有疗法的同时,正积极探索从根本上实现组织器官的修复与重建的途径。     

组织工程技术系列专题（二）——种子细胞与组织工程的研究

组织工程研究成功与否主要取决于以下三个基本要素：种子细胞、支架材料以及有助于细胞生长、分化的外在环境。其中获得足够数量、不引起免疫排斥反应且具有再生活力的种子细胞是开展组织工程研究的前提和基础。组织工程研究需要的种子细胞有多种来源,如自体细胞、同种异体细胞、异种细胞以及自体或同种异体干细胞,每一种细胞来源都有其优缺点。近年来,干细胞的研究取得了显著性进展,展现出广阔的应用前景。     

Oct4对鼠-猪异种核移植胚胎早期发育的影响

目的进行脂质体长春新碱(Liposome Vincristine,L-VCR)的动物体内药代学研究、体内抗肿瘤药效学研究以及毒理学研究,探讨L-VCR的作用特点及其可能的作用机制。方法Wistar大鼠接种Walker256肿瘤,用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV),测定其体内以及肿瘤内的血药浓度,用药动学计算软件拟合处理得药动学参数;小鼠接种B16黑色素瘤,静脉给予L-VCR,计算其肿瘤抑制率以及去瘤体重;测定L-VCR小鼠的LD50。结果与游离长春新碱(Free Vincristine,F-VCR)相比,L-VCR血浆以及肿瘤内浓度增高,维持时间明显延长,AUC0-t增加约121倍;L-VCR能明显减轻小鼠B16黑色素瘤模型的瘤体重量,并呈现一定的量效关系;L-VCR小鼠的LD50明显高于游离药物。结论L-VCR可显著延长VCR半衰期,增大药时曲线下面积,药效明显高于F-VCR,且毒性明显降低。其作用可能是通过脂质体包裹,增加肿瘤中的药物量,延长VCR的作用时间,药物释放缓慢,从而减轻VCR的毒性而达到的。     

不同电融合和激活参数对猪体细胞核移植胚胎发育的影响

目的：摸索猪体细胞核移植最佳的融合和激活条件.方法：利用体外成熟的去核猪卵母细胞为受体,颗粒细胞为供核细胞,透明带间隙注射法构建重构胚,对电融合和激活的参数（电场强度、脉冲宽度、脉冲次数、融合液中Ca^2＋浓度、联合激活参数）进行摸索.结果：发现在电场强度1.5 kV/cm,脉冲宽度30 μs,2次脉冲（间隔3 s）,电融合液中0.1 mmol/L的Ca^2＋浓度下进行电激活,进而用（CB,7.5 μg/ml）＋（6-DMAP,2 mmol/L）激活3.5 h发育率最高,48 h卵裂率为72.5%,第6天桑葚胚率为35.1%;初次尝试了在胚胎培养前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇来增加渗透压以减少电激活后重构胚的碎片化程度,但发现卵裂率及桑葚胚发育率与对照组差异不显著.结论：初步得到了适宜的猪体细胞核移植的融合和激活条件,为随后克隆胚早期发育基因的研究打下了基础.     

组织工程技术的发展现状及趋势（三）——组织工程用生物材料的研究

1组织工程用生物材料的概述 生物材料又称生物医用材料,是指用于对生物体进行诊断、治疗和置换损伤组织、器官或增进其功能的材料。按发展阶段分为生物惰性材料、生物活性可降解材料以及细胞和基因活化的材料3大类。组织工程用生物材料通常为基于细胞和分子水平的第3类生物材料,旨在于最小的损伤前提下,为原位组织再生修复提供物质基础。     

组织工程技术的发展现状及趋势（四）——组织构建与支撑技术

1组织构建概述 在合适的种子细胞与生物支架材料的基础上,如何进一步进行各种组织的构建是实现组织工程技术在临床中大规模应用及产业化发展的关键。因此,组织构建是组织工程技术的核心。组织工程一般采用2种技术策略：第1种是将种子细胞（组织成体细胞或干细胞）种植于生物可降解三维多孔支架材料内,构筑细胞/支架复合物,经体外生物反应器培养后/或不经体外生物反应器培养植入患者体内,经生物过程在缺陷部位形成组织;第2种是将生物材料或生物材料与生长因子、基因复合物植入体内,经体内生物过程形成组织,此构建策略也被称为原位组织工程。     

TRIM基因家族一个新成员的克隆及功能研究

目的:克隆小鼠早期胚胎发育相关的新基因uTRIM,研究其胞内亚定位及功能.方法:通过数字差异显示搜索到可能和小鼠早期胚胎发育相关的新基因uTRIM,用RT-PCR方法从体外培养的小鼠囊胚中分离得到其全长cDNA;将其克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1中,在HEK 293细胞内表达后确定uTRIM分子的亚细胞定位.用RNAi对其在胚胎发育早期的功能进行初步的研究.结果与结论:uTRIM基因只在胚胎发育早期和成体睾丸组织中表达,亚细胞定位显示该蛋白位于细胞质中.RNAi结果显示抑制uTRIM表达使小鼠受精卵体外发育速度加快,提示uTRIM参与早期胚胎发育的负调控.