HFMC在体外对精子功能和结构的影响

体外实验发现:HFMC能够全面抑制人精子的运动能力、穿透牛宫颈粘液的能力和穿透去透明带金黄地鼠卵的能力,随HFMC剂量增加或HFMC与精子作用时间延长,抑制作用增强;HFMC主要损伤精子的膜性结构。推测HFMC的这些作用可能是它在体内抗生育的机理之一。采用改良Sander-Cramer方法测得HFMC的体外最低有效杀精子浓度为10～22毫克/毫升,但对不同动物或同一动物不同部位精子的最低有效杀精子浓度不同。提示在研究避孕药物对精子的作用时,最好选用人精液精子或生物学特性与其相似、且来源容易的其他动物的精子。     

透明带抗原在抗生育中的作用

大量实验和临床观察证实,免疫对机体的生殖功能有控制作用。这使人们想到利用免疫的方法来抗生育。目前对免疫避孕的研究主要集中在三个方面,即HCG免疫、精子免疫和透明带(Zonae-Pellucidae,ZP)免疫。本文就国内外对ZP抗原的研究近况作一综述。     

重组逆转录病毒双表达载体的构建及其对K562细胞增殖活性的影响

目的 构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响.方法 以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同时构建对照载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及测序鉴定各重组载体;以脂质体法转染各载体到PT67包装细胞后,G418筛选稳定的病毒产生细胞株,再以NIH3T3细胞测定病毒滴度并感染K562细胞,计数细胞数绘制细胞生长曲线,FCM检测细胞凋亡情况、并用Western blot检测PKR激活情况.结果 酶切及测序结果证实各重组载体构建完全正确;G418筛选到高滴度重组逆转录病毒生产细胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染组K562细胞生长受抑制,其24 h时早期细胞凋亡率为22.54±3.19%,与除PT67-80as组外的其余各组相比有显著差异(P＜0.05);PT67-40as和PT67-80as处理组细胞PKR磷酸化水平分别增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用.结论 成功构建重组逆转录病毒双表达载体,并发现其能抑制K562细胞生长并引起细胞凋亡,通过激活PKR抗肿瘤可望成为肿瘤新的靶向治疗策略.     

bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立

目的:构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(CML)样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法:bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampe细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线(900cGy)照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果:小鼠移植8～9 wk后,外周血白细胞达2×1010～3×1010/L(为对照鼠的5～8倍),外周血涂片幼稚细胞达到0.10～0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4～5wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8～9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3～5 Ino后相继死亡.结论:成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.     

宫内用小探头高频率超声技术

阴道超声波检查显示子宫影像比经腹超声更清楚。但对不育症者子宫内膜及子宫恶性肿瘤术前评估仍有困难。高频超声和宫内探头联合应用可更清晰地了解子宫内膜的病变。为探讨高频小探头超声波检查在妇科疾病诊断上的应用,东京医科大学对10例子宫正常(如卵巢囊肿)和9例子宫肌瘤病人行阴道及宫内超声波检查。东京大学医学院及Saitama     

水凝胶EFMC杀精子功能及杀精子功能的逆转

干扰输精管的功能达到男性避孕认为是最少引起全身反应的有效手段。现行主要方法为输精管结扎术,它是一种绝育方法。已有150年历史,至今仍被认为是一种比较安全有效的方法,世界各地均在广泛的应用。但仍存在方法需简化及难免的一些副作用(如输精管结扎对睾丸间质细胞的功能影响问题;垂体-性腺轴影响问题,以及发生免疫反应的问题)。因     

香烟烟雾含有抑制人类粒层细胞芳香化酶的成分

已发现吸烟妇女尿中内生性雌激素水平低于不吸烟者,但机理不清。为进一步了解香烟是否能直接影响卵巢雌激素的产生,作者研究了香烟烟雾的水溶性提取物对人类粒层细胞芳香化酶的影响。粒层细胞采自28位准备作体外授精而行诱发排卵的月经周期正常的妇女。用克罗米酚和HCG刺激卵巢滤泡发育。在给予HCG(10,000IU)34小时后,经腹腔镜吸取可达到的滤泡,用50%渗透梯度层析法使粒层细胞与红细胞分离。并将其加入塑料多孔培养扳的孔穴中,每孔细胞密度为30,000个,除特别指出外,本文各组培养基中均加入5%的小牛血清,于37℃含5%的CO_2卵箱中培养24小时,然后在实验组的培养基中加入香烟烟雾提取物再培养24小     

一种新型的杀精子剂——HFMC对精子的直接作用

甲基丙烯酸乙酯—甲基丙烯酸—甲基丙烯酸羟乙酯是一种具有一定亲水性和疏水性的三元共聚物(代号HFMC)。经大量动物(兔、犬)实验结果表明:HFMC被注射入输精管后,可起到非阻塞性的、可复性的避孕作用;将HFMC涂于阴道后壁及子宫颈口后,同样具有避孕效果。为了进一步探索HFMC的作用机理,本文初步研究了HFMC在体外对大鼠     

猪卵透明带单克隆抗体在体外与人、猪卵巢组织的反应

用ABC免疫组织化学染色法,观察猪卵透明带单克隆抗体(LPD8、LPC4),在体外与人、猪卵巢组织的反应。LPD8和LPC4使人、猪卵透明带及卵细胞质着色,但不使卵巢的其他结构,如颗粒细胞、卵泡膜细胞及结缔组织着色。这些结果提示:猪卵透明带单克隆抗体对卵巢内分泌功能可能无直接影响,但可过过与卵细胞质结合,抑制卵泡的发育,继而导致卵泡数目减少和内分泌功能降低。作者认为,用本实验提取的两株猪卵透明带单克隆抗体,进行免疫避孕研究前途不大。     

酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响

目的 建立人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562细胞在伊马替尼(Imatinib mesylate)处理前、后的DNA损伤模型,探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度;用免疫印迹法(Western blot)检测伊马替尼处理后K562细胞BCR/ABL的磷酸化状态,以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况;用彗星实验检测不同浓度过氧化氢(H2O2)诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型;用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测.结果 MTT实验结果显示,伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1 μmol/L,作用时间24 h;Western blot实验结果显示,该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR/ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化,密度比为0.100±0.018,与对照组(0.425±0.039)相比,降低了(77.11±5.59)%,差异有统计学意义(t=4.57,P＜0.05);彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件,采用10 μmol/L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间为4℃、10 min.修复结果显示,经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120 min,与未处理组修复时间60 min相比,前者DNA损伤修复时间明显延长(F=97.79,P＜0.05).结论 本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型,BCR/ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力.