抗ProGRP(31-98) scFv的131I标记及生物分布研究

目的 研究抗胃泌素释放前体（ProGRP（31-98）单链抗体（scFv）的131I标记方法,并对其标记后的稳定性、免疫活性及生物分布进行分析.方法 采用氯胺T法碘化标记制备131I-anti-ProGRP（31-98）scFv,凝胶柱层析法分离纯化标记产物,利用纸层析法测定标记物的标记率、放化纯度和稳定性,采用细胞结合分析法比较131I-anti-ProGRP（31-98）scFv对小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株A549的免疫结合率.将131I-ProGRP（31-98）scFv注射入动物体内,研究其在实验动物体内的分布情况.结果 131I-anti-ProGRP（31-98）标记率为（93.35±0.67）％,标记产物纯化后即刻放化纯度为（98.49±1.21）％.131I-anti-ProGRP（31-98）scFv对人小细胞肺癌NCI-H446和肺腺癌A549细胞株的免疫结合率分别为（85.36±1.45）％和（21.02±2.16）％,且差异有统计学意义（P＜0.05）.131I-anti-ProGRP（31-98）scFv在实验动物体内主要通过肾脏和肝脏代谢,血液清除快.结论 131I-anti-ProGRP（31-98） scFv的标记率高,且有良好的稳定性和免疫活性,在实验动物体内主要通过肝脏和肾脏代谢,血液清除快.     

SPECT/CT直接测量肾脏深度在肾小球滤过率测定中的应用

目的 探讨在以SPECT/CT测定GFR时用CT直接测量肾脏深度代替传统的Tonnesen公式法的必要性和可行性.方法 49例患者在接受肾动态显像的同时进行腹部CT平扫,测量两侧肾的深度.将所测值与传统的Tonnesen公式值和SPECT侧位平面图像测量值进行比较,然后将CT和SPECT测得的肾脏深度数据代入到Gates法GFR测量软件中,观察肾脏深度改变对GFR测定值的影响.采用配对t检验对Tonnesen公式法和SPECT测量法测得的肾脏深度值及各自深度值对应的GFR与CT法测得的相关数据间差异进行比较,对Tonnesen公式误差、SPECT测量误差与肾脏深度的关系采用直线相关分析.结果 CT测得的肾脏深度分别为右肾(7.04±1.15) cm,左肾(7.18±1.15) cm.与CT测量值相比,Tonnesen公式法低估了肾脏深度[右肾:(5.77±0.90) cm,t=- 11.50,P＜0.01;左肾:(5.74±0.88) cm,t=12.20,P＜0.01],而SPECT测量值则高估了肾脏深度[右肾:(7.40±1.15) cm,t=5.19,P＜0.01;左肾:(7.49±1.19) cm,=5.14,P＜0.01].Tonnesen公式法误差与肾脏深度呈正相关(右肾:r =0.62,P＜0.01;左肾:r=0.73,P＜0.01),而SPECT测量误差与肾脏深度不相关(右肾r =0.26,P＞0.05;左肾r=0.38,P＜0.01).Tonnesen公式法得到的两侧肾脏深度差为0.03 ～0.05 cm,而SPECT和CT得到两侧肾脏深度差分别为0.54±0.33(0.01～1.28) cm和0.62±0.45(0.01～1.60) cm.Gates法采用Tonnesen公式肾脏深度低估了GFR,与CT所测肾脏深度对应的GFR相比,误差百分比分别为右肾(-20.92±11.28)％(t=-6.99,P＜0.01),左肾(-23.71±7.71)％(t=-8.73,P＜0.01);采用SPECT测量则高估了GFR,对应误差百分比为右肾(5.23±9.64)％(t=2.72,P＜0.01),左肾(8.93±9.29)％(=5.21,P＜0.01).结论 采用SPECT/CT的CT功能精确测量两侧肾脏深度,有助于提高Gates法GFR测定的准确性.     

基于谱效关系的醋延胡索炮制前后特征成分研究

目的探讨醋延胡索炮制前后HPLC指纹图谱与镇痛药效的相关性,筛选炮制特征成分。方法建立生延胡索与醋延胡索HPLC指纹图谱,对两者化学成分进行差异性分析,以大鼠扭体反应为模型建立评价指标,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛、孕酮、雌二醇、前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)、前列腺素F_(2a)(prostaglandin F_(2a),PGF_(2a))等指标评价镇痛药效,结合灰色关联度分析法与熵权法研究醋延胡索的谱-效关系,指认醋延胡索炮制特征成分。结果建立了不同批次生延胡索饮片、醋延胡索饮片的HPLC指纹图谱,确定了31个共有峰。生延胡索饮片与醋延胡索饮片均有止痛效果,以醋延胡索止痛效果最为显著。镇痛谱效关联度分析得到峰9、18～21、25、26醋炙后关联度得分有了显著的提升,与醋炙后镇痛疗效呈显著正相关。结论通过谱-效关系明确了醋延胡索炮制特征成分为原阿片碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素,为醋延胡索炮制质量控制提供一定依据。     

薏苡仁麸炒前后治疗脾虚水湿不化谱效关系研究

目的研究薏苡仁麸炒前后HPLC指纹图谱与治疗脾虚水湿不化药效之间的相关性,为明确薏苡仁麸炒前后药效物质基础提供实验依据。方法通过HPLC法建立麸炒前后薏苡仁指纹图谱;建立脾虚水湿不化大鼠模型,比较其麸炒前后的药效作用;同时采用灰色关联度法,对5批生品及其麸炒品进行谱效关系分析,分别找出关联度较大的化学成分,并比较麸炒前后谱-效关系差异。结果 HPLC指纹图谱中指认9个共有峰。与模型组比较,生品与麸炒品均有显著性差异;与生品组比较,麸炒薏苡仁各药效指标明显高于生品。麸炒品中9种共有成分与GAS、MTL、SS、体质量、胸腺指数以及脾指数的关联度明显高于生品;生品中9种共有成分与VIP的关联度明显高于麸炒品。结论薏苡仁治疗脾虚水湿不化的药效是多成分共同作用结果,麸炒后药效明显高于麸炒前。     

基于UPLC-Triple-TOF-MS液质联用技术分析薏苡仁中的脂肪酸及其酯类化学成分

目的通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF-MS)建立一种对薏苡仁中的脂肪酸及其酯类化学成分进行快速定性分析的方法。方法采用Agilent ZORBAX-SB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),流动相为乙腈-异丙醇(1∶1),等度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100～1 500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得的信息对薏苡仁中脂肪酸及其酯类化学成分进行快速的鉴定。结果检测出薏苡仁中29种脂肪酸及其酯类化学成分,并对化合物的裂解规律进行分析。通过分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy网络数据库以及文献得知,这些化合物在离子源的作用下通过失去油酸、亚油酸、棕榈酸、氧化油酸等结构,得到不同质荷比的碎片离子,从而推测出29种脂肪酸及其酯类化合物的名称及结构式。结论研究建立的薏苡仁脂肪酸及其酯类化学成分定性分析的方法准确、快速、灵敏,为提高薏苡仁的质量控制水平及后续阐明薏苡仁的药效物质基础提供了实验依据。     

^99Tc^m—MIBI双时相显像定位诊断继发性甲状旁腺功能亢进症的价值

目的探讨^99Tc^m-MIBI双时相显像在定位诊断继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）中的临床价值。方法回顾性分析2010年至2013年间20例（男8例,女12例,平均年龄49．6岁）行甲状旁腺切除术的肾性SHPT患者影像学资料,以术后病理结果为“金标准”,计算^99Tc^m-MIBI双时相SPECT／CT显像结果与彩色多普勒超声（CDUS）对SHPT的诊断效能,同时对延迟显像中甲状旁腺摄取的最高放射性比值（T／NT）与患者近期全段PTH（iPTH）水平及术中切除的相应甲状旁腺体积的关系作分析。采用x^2检验、Pearson相关或Spearson相关分析数据。结果^99Tc^m-MIBI双时相显像和CDUS诊断SHPT的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为66．67％（44／66）、100％（14／14）、100％（44／44）、38．89％（14／36）、72．50％（58／80）和78．19％（43／55）、52．38％（11／21）、81．13％（43／53）、47．83％（11／23）、71．05％（54／76）。二者诊断SHPT的特异性和阳性预测值差异有统计学意义（x^2=9．33和9．26,均P〈0．05）,其余3个指标差异均无统计学意义（x^2=1．97、0．04和0．46,均P〉0．05）。最高T／NT与患者iPTH水平及手术切除的相应甲状旁腺体积均呈正相关（r=0．638,rs=0．571,均P〈0．05）。结论^99Tc^m-MIBISPECT／CT显像诊断SHPT的特异性高于CDUS0^99Tc^m-MIBI双时相显像可准确定位功能亢进的甲状旁腺,为手术治疗提供依据。     

131I标记抗胃泌素释放前体单链抗体的制备及其稳定性和免疫活性研究

目的 研究抗胃泌素释放前体(ProGRP(31-98))单链抗体(scFv)的131I标记方法,并对其标记后的稳定性和免疫活性进行分析.方法 采用氯胺-T法碘化标记制备131I-anti-ProGRP(31-98)scFv,凝胶柱层析法分离纯化标记产物,利用纸层析法测定标记物的标记率、放化纯和稳定性,通过细胞结合试验测定131I-anti-ProGRP(31-98)scFv的免疫活性.结果 131I-anti-ProGRP(31-98)标记率为93.35%.标记产物纯化后即刻放化纯为98.49%,在37℃水浴箱中放置24 h后放化纯为94.59%,48h后测定仍大于90%,与正常人血清充分混合24 h后放化纯为85.16%,48 h测定大于80%.131I-anti-ProGRP(31-98) scFv对人小细胞肺癌NCI-H446和肺腺癌A549细胞株的免疫结合率分别为85.36%和21.02%.结论 131I-anti-ProGRP(31-98)scFv的标记率高,且有良好的稳定性和免疫活性,有望成为高表达ProGRP的恶性肿瘤放射免疫显像及治疗药物,值得进一步深入研究.     

中药脏器毒性研究进展

随着中药的广泛应用与随之发生的脏器中毒事件,深入研究和整理中药的毒副作用以及脏器毒性机制,保障常用中药安全有效的临床环境已经迫在眉睫。笔者在查阅近年来常见中药脏器毒性相关文献的基础上,从中药所致心脏、肝脏毒性2个方向分析中药的毒性成分、毒性临床表现及产生机制,为中药临床合理使用提供有益参考。     

基于UPLC-Triple-TOF/MS分析续断“发汗”前后化学成分

目的通过超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF-MS)快速分析续断DipsaciRadix"发汗"前后的化学成分。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长215 nm,柱温为25℃;质谱采用UPLC-Triple-TOF 5600+飞行时间液质联用仪,负离子模式下扫描检测,扫描范围m/z 100～1 500。根据高分辨质谱结合二级质谱所得的信息对续断"发汗"前后化学成分进行快速的鉴定。结果根据化合物保留时间、质谱信息,推测了续断"发汗"前后52个共有化学成分,主要包括三萜皂苷类、环烯醚萜类、酚酸类等,同时分析了主要成分的裂解规律。并比较了续断"发汗"前后化学成分的差异,发现发汗后马钱苷酸、绿原酸、马钱苷、异绿原酸A、川续断皂苷VI等20种成分含量降低,咖啡酸、异绿原酸、异绿原酸C、大花双参苷A等成分含量在发汗后升高。结论研究发现续断"发汗"前后化学成分种类上无明显差异,而在成分含量上存在一定差异,未"发汗"续断化学成分含量普遍高于"发汗"续断。本实验采用UPLC-Triple-TOF-MS技术分析"发汗"对续断的化学成分的影响,为探究续断"发汗"前后化学成分物质基础和进一步为续断产地加工方式的研究提供理论依据。     

肾动态显像测定肾小球滤过率中两肾深度差对分肾功能的影响

目的利用CT直接测量肾脏深度评价Tonnesen公式法估算两肾深度差的准确性和深度差对Gates法计算分肾功能的影响。方法 43例患者利用单光子发射计算机断层/X线计算机层扫描（SPECT/CT）行腹部CT平扫,根据CT横断层图像测量两侧肾脏深度。CT平扫后行核素肾动态显像,Gates默认以Tonnesen公式法估算肾脏深度并得到肾小球滤过率（GFR）与分肾GFR。将CT所测肾脏深度值输入处理软件,获得不同肾脏深度测量值下的GFR和分肾GFR。采用配对t检验比较两种方法得到的肾脏深度及两肾深度差间的差异,对深度差和由此产生的分肾功能变化行Pearson相关性分析。将两肾深度差与患者年龄、体质量/身高、体质量指数（BMI）和体表面积行多元线性回归,分析可能影响深度差的因素。结果与CT测量法相比,Tonnesen公式法低估了两肾深度（右肾：t=-10.83,P〈0.01;左肾：t=11.56,P〈0.01）;Tonnesen公式法估算的深度差为（0.038±0.007）cm,CT测量法得到的深度差为（0.63±0.44）cm,Tonnesen公式法明显低估了两肾深度差（t=-8.81,P〈0.01）。有20%的患者两肾深度差大于1 cm,且深度差与由此产生的分肾功能变化（｜R（CT）-R（Tonn）｜）成正相关系（r=0.564,P〈0.01）。随着深度差的增加,Tonnesen公式法难以准确反映分肾功能的变化。深度差与患者年龄、体质量/身高、BMI、体表面积均不相关（复相关系数R=0.283,均P〉0.01）。结论 Tonnesen公式法不能准确计算肾脏深度差,从而难以获得可靠的分肾功能,未发现与深度差相关的因素。临床上应用SPECT/CT的CT功能直接测量肾脏深度代替Tonnesen公式,可以获得准确的两肾深度及深度差,从而提高Gates法测量分肾GFR的准确性。