放射耐受性肝癌细胞亚株的筛选与建立

目的 诱导并筛选具有放射耐受性的单克隆肝癌细胞亚株,为进一步研究细胞抗放射生物学变化构建实验模型。方法 采用人肝癌HepG2细胞进行放射诱导,分次照射,累积吸收剂量为60 Gy。经细胞克隆筛选、建株。进行形态学和细胞超微结构观察,同时测定细胞生长特性以及放射敏感性变化与亲本HepG2细胞进行比较,并观察2 Gy照射后细胞内放射相关抗拒基因mRNA表达水平的变化,对该细胞亚株进行鉴定,定名为HepG2/R60细胞亚株。结果 通过2 Gy×30次分割照射诱导,成功建立HepG2/R60细胞亚株。细胞鉴定结果显示,与亲本HepG2细胞比较,细胞形态不规则,伪足伸展,折光度清晰,细胞间连接较为松散。透射电镜观察HepG2/R60细胞表面微绒毛明显增多,线粒体丰富,高尔基体发达。细胞生长延缓,倍增时间明显延迟为34.9 h,与HepG2细胞比较,放射敏感性显著降低,放射相关抗拒基因表达明显升高。结论 成功建立具有放射耐受性的人肝癌细胞亚株:HepG2/R60。经鉴定与其亲本的HepG2细胞比较,其放射敏感性显著降低。     

猪血浆α_2巨球蛋白的提取

<正> α_2巨球蛋白(α_2M)天然存在于人和动物血浆中,是多种蛋白酶抑制剂,Berenblun等用以治疗动物辐射损伤,认为可以促进造血组织恢复,减少动物死亡。国内翁志根等用人α_2M制剂治疗辐射烧伤病人,促进了经久不愈创伤面的愈合,为探讨其作用机理,     

60Coγ照射对大鼠血浆和颌下腺组织中α-巨球蛋白和总蛋白酶活力变化

大鼠血浆和组织中有几种具有相同抑制机理的蛋白酶抑制剂,称它为α-巨球蛋白(简称αM),它以捕捉蛋白酶达到抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用。     

转染结构性雄烷受体对丝裂霉素C和5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮的细胞毒性的影响

研究丝裂霉素C(MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮［5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione，629］的细胞毒性，以及结构性雄烷受体(constitutive androstane receptor，CAR)转染对其生物学效应的影响。将质粒mCAR/pCR3转染HepG2细胞，经G418耐药性筛选获得转染CAR的g2car细胞，以转染空载体pCR3(HepG2/pCR3)作为对照。用RT-PCR检测质粒和CYP2B6 mRNA的表达，用MTT法评价MMC和629对g2car细胞和HepG2细胞在有氧和乏氧条件下的细胞毒性。RT-PCR检测到CAR和CYP2B6 mRNA在g2car细胞中有表达，在HepG2细胞中无表达；此外，在乏氧情况下，MMC和629的细胞毒性比在有氧情况下均有所增加(p<0.05)，并且转染CAR以后，两者的细胞毒性均增加，但对MMC的影响较明显(p<0.05),对629的影响不明显(p>0.05)。提示CAR可在转录水平调节药物的代谢，提高药物的毒性；CYP2B6可以主要代谢MMC，但不主要代谢629。转染CAR基因可以增加细胞CYP2B6 mRNA的表达，并可引起MMC和629毒性的改变。     

大鼠肝微粒体CYP2B1的活性和P450含量的变化

目的研究3种诱导[地塞米松（Dexamethasone，DEX）、苯巴比妥钠（Phenobarbital sodium，PB）、β-奈黄酮（β-naphthoflavone，β-NF）]和丝裂霉素C（Mitomycin，MMC）对雄性SD大鼠细胞色素P450含量、CYP281活性的影响，以及普罗地芬（Proadifen，SKF525A）对不同活性CYP281的抑制作用。方法连续3d给大鼠腹腔注射各种诱导剂和MMC，另设空白对照和溶剂对照，处理结束后制备肝微粒体，测P450含量和CYP281活性；取各诱导组微粒体，用1．25mmol／L SKF525A处理，测CYP281活性。结果PB作用后使P450含量上升（P〈0．05），CYP281活性明显增大（P〈0．01）；DEX、β-NF、MMC作用后，P450含量、CYP281活性变化无统计意义（P〉0．05），但与空白对照组相比，β-NF组的CYP281活性增加显著（P〈0．05）；用SKF525A处理不同组别的微粒体后，CYP281活性均下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论在体内一定条件下，PB能够诱导P450含量、CYP281活性，而DEX、β-NF、MMC对它们的作用不显著；1．25mmol／L的SKF525A在体外能够抑制不同水平的CYP281活性。     

γ射线照射后乏氧诱导因子1α对肝癌细胞存活的影响

目的 研究辐射对肝癌细胞内乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用以及HIF-1α的变化对肝癌细胞存活的影响。方法 采用CoCl₂化学模拟乏氧预处理人肝癌HepG2细胞,经不同剂量的γ射线照射后,通过细胞集落形成实验,比较有氧及化学模拟乏氧条件下细胞存活水平的差异。同时采用RT-PCR和Western blot方法检测照射后细胞内HIF-1α在转录和翻译水平上的变化。结果 在化学模拟乏氧条件下,细胞存活分数(SF)显著增加,与有氧对照组比较差异有统计学意义,且两种不同作用条件下的SF比值(SF_CO/SF_O2)随照射剂量逐渐增加,同时,经照射后细胞内的HIF-1α表达升高,并呈剂量依赖模式,HIF-1α的表达与照射后的细胞存活水平具有较强的关联性。结论 辐射可诱导肝癌细胞内HIF-1α的表达升高,HIF-1α的表达变化可能影响细胞的存活水平。     

增敏化合物丁胱亚磺酰亚胺对离体细胞的毒性作用

本文报道国内首次合成的新增敏化合物——丁胱亚磺酰亚胺(buthioine sulfoxi-mine,简称BSO)对离体中国仓鼠V79-379A细胞在各种不同条件下的细胞毒性作用。实验结果表明:BSO在离体实验条件下对细胞的毒性作用较小;当它与双功能性的辐射增敏剂RSU-1069合用时,可明显地增加RSU-1069的细胞毒性作用,这在肿瘤放射治疗与化学药物治疗中有重要的意义。