附睾功能基因的研究方法及进展

精子的成熟不是靠自身来完成，而是通过与附睾管腔中的微环境相互作用而取得。搞清精子成熟的机制和调控，将为新的男性避孕药、诊断和治疗男性不育症、性传播疾病的防治等方面提供一系列新的靶位点。本文分别从基因、蛋白、基因组与蛋白质组三个方面综述了附睾功能基因的研究方法及进展。     

不同浓度的瘦素在胚胎着床中对细胞间粘附分子-1和金属蛋白酶9的影响

目的建立体外子宫内膜培养模型,观察不同浓度瘦素（即leptin）对与着床密切相关的细胞间粘附分子-1（Intercellular Adhesion Molecule-1,即ICAM-1）、金属蛋白酶9（Matrix Metalloproteinase9,即MMP9）的影响,进而探讨leptin对胚胎早期着床的的调节作用。方法采用免疫细胞化学方法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达;采用ELISA方法分别检测经leptin干预培养模型后培养液中ICAM-1和MMP9的表达。结果免疫细胞化学方法：ICAM-1主要在腺体细胞中有表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达;ELISA结果显示：与对照组相比,ICAM-1经100ng/ml的leptin干预后表达上调（P〈0.05）,而经1ng/ml、10ng/ml的leptin干预后表达无显著性差异（P〉0.05）;MMP9分别经1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的leptin干预后表达上调（P〈0.05）。结论一定量的leptin可以增加体外培养模型中ICAM-1和MMP9表达。     

白介素-1β对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及细胞黏附分子-1的影响

目的 研究白介素-1β（IL-1β）对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌金属蛋白酶-9（MMP-9）及细胞黏附分子-1（ICAM-1）的影响.方法 离体培养着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞,用IL-1β作为处理因素,通过免疫组织化学SP法对子宫内膜上皮细胞MMP-9、ICAM-1蛋白的表达进行检测.结果 随着IL-1β浓度的增加,原代培养的子宫内膜上皮细胞分泌MMP-9及ICAM-1表达量均呈浓度依赖性升高（P〈0.05）.结论 一定水平的IL-1β可以促进子宫内膜上皮细胞MMP-9及ICAM-1的分泌,有利于胚胎着床.     

人附睾ESC42基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 构建人附睾ESCA2(hESCA2)的真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达.方法 从人附睾cDNA文库中PCR扩增hESCA2片段,通过DNA重组构建真核表达载体pEGFP-N1-hESC42,瞬时转染COS-7细胞,应用RT-PCR、激光扫描共聚焦技术和Western blot检测融合蛋白的表达.结果 成功地构建了真核表达载体pEGFP-N1-hESC42;以重组载体转染COS-7细胞后,RT-PCR结果 显示hESC42与EGFP在mRNA水平正确拼接;共聚焦证实有hESCA2融合蛋白的表达;转染细胞的培养上清浓缩后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,可检出hESC42融合蛋白的表达.结论 成功地构建了hESC42基因,并可在COS-7细胞中分泌表达,为其功能研究提供线索.     

白细胞介素-1β对人子宫内膜细胞间粘附分子-1和金属蛋白酶9的影响

目的 探讨白介素-1β(IL-1β)对分泌中期体外培养的子宫内膜细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和金属蛋白酶9(MMP9)的影响.方法 建立子宫内膜体外培养模型,采用酶联免疫吸附检测(ELISA)方法分别检测经不同浓度IL-1β处理共培养模型后培养液中ICAM-1、MMP9的表达水平;采用免疫细胞化学方法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达.结果 与对照组相比,经10.0μg/L IL-1β干预后培养液中ICAM-1表达水平增加,经0.1、1.0μg/L IL-1β干预后培养液中ICAM-1表达,差异无统计学意义;经1.0、10.0μg/L的IL-1β干预后培养液中MMP9表达水平增加.经免疫细胞化学证实,ICAM-1主要在腺体细胞中表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达.结论 在体外一定量的IL-1β可以诱导子宫内膜细胞ICAM-1和MMP9表达增加.     

对体外授精8h后未受精卵母细胞行挽救性卵细胞质内单精子注射并妊娠1例

患者女性，37岁，未孕10年，于2007年8月在本中心要求行体外授精-胚胎移植（IVF—ET）治疗。病史采集：外院输卵管造影提示为慢性输卵管炎，曾行常规IVF—ET 1个周期（具体方案不详），获卵约10枚，自述有授精，但数目不详，因胚胎质量差放弃移植。常规检查示：基础促卵泡生成激素（FSH）为9．41mIU／mL，     

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 探讨IL—2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法 应用基因重组技术，构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体，将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB／c小鼠和HBV转基因小鼠，通过ELISA方法检测BALB／c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平；荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数，并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度，同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后，100％小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体，持续时间长达10周。②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式，且所需质粒量(10μg／只)仅为后者(100μg／只)的1／10。③在第4周高峰期检测IgG亚类，是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒(1μg／只)免疫转基因小鼠后，80％的小鼠产生了抗体，HBV DNA量下降，其中20％的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示：肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫，可部分打破小鼠机体的免疫耐受，为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。     

基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究

目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果;应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用.结果 应用不同的蛋白浓度作用细菌,随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加.对兔红细胞没有毒性作用.结论 rhESC42蛋白对细菌有一定的抑制作用,对真核细胞无害.     

附睾功能基因的研究方法及进展

精子的成熟不是靠自身来完成,而是通过与附睾管腔中的微环境相互作用而取得。搞清精子成熟的机制和调控,将为新的男性避孕药、诊断和治疗男性不育症、性传播疾病的防治等方面提供一系列新的靶位点。本文分别从基因、蛋白、基因组与蛋白质组三个方面综述了附睾功能基因的研究方法及进展。     

透明带形态异常卵母细胞在IVF完全受精失败后行补救ICSI的临床结局

目的:研究透明带形态异常卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法:以在IVF完全受精失败(TFF)周期中透明带形态异常的15名患者为研究组(A组),非透明带形态异常的完全受精失败周期的63例患者为对照组(B组),回顾性分析比较患者的一般临床情况、IVF结局及行补救ICSI(R-ICSI)的临床结局。结果:除受精率组间有显著性差异(65.52%vs 78.86%,P<0.01)外,其余各指标(年龄、不孕年限、不孕类型、不孕原因、基础内分泌水平、基础卵泡数、降调节天数、Gn使用天数、Gn使用总量、hCG注射日直径≥16 mm卵泡数、hCG注射日E2、P和LH水平、获卵数、MII卵数、行R-ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率)组间均无统计学差异。结论:IVF完全受精失败周期透明带形态异常卵母细胞行R-ICSI虽受精率较低,但及早发现受精失败并行R-ICSI,可使65.52%的卵子受精,从而改善临床结局。