木犀草素通过TLR/MyD88/NF-κB 通路参与急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用

目的：探讨木犀草素通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)/髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路减轻急性痛风性关节大鼠炎症的作用及其机制。方法： 将60 只雄性Wistar 大鼠随机分为5 组：正常对照组、尿酸钠(monosodium urate,MSU)组、秋水仙碱组、木犀草素低剂量 组(50 mg/kg)、木犀草素高剂量组(150 mg/kg)。于大鼠踝关节局部注射尿酸钠晶体混悬液制备急性痛风性关节炎模 型,观察各组大鼠不同时间点的关节肿胀指数,并测定各组大鼠血清及滑膜中白细胞介素1β (interleukin-1β,IL-1β)、 白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用实时PCR检测滑膜 组织中TLR2,TLR4,MyD88 mRNA 水平,蛋白质印迹测定滑膜组织中TLR2,TLR4,MyD88,磷酸化核因子 κBp65(phosphorylated-nuclear factor κB,p-NF-κB p65)蛋白表达,HE染色观察踝关节及其周围软组织炎症细胞情况, 免疫组织化学法测定NF-κB表达。结果： 与MSU组相比,木犀草素高、低剂量组及秋水仙碱组的关节肿胀指数均明 显降低(P<0.05),IL-1β,IL-6,TNF-α 的水平也显著降低(P<0.01),TLR2,TLR4,MyD88 mRNA和蛋白水平及NF- κB的蛋白水平均显著降低(P<0.01)。免疫组织化学结果显示：与正常对照组比较,木犀草素和秋水仙碱组大鼠踝关 节的炎症细胞明显减少,滑膜增生减少,软骨表面光滑,无明显软骨和骨侵蚀。结论： 木犀草素可通过下调TLR/ MyD88/NF-κB通路减轻急性痛风性关节炎的炎症反应,有望成为治疗急性痛风性关节炎的有效药物。     

超声下附着点炎评分在外周型脊柱关节炎诊断中的价值

目的 探讨超声下附着点炎评分在外周型脊柱关节炎诊断中的应用价值。方法 选取2021年1月至2023年2月海南医学院第一附属医院风湿免疫科门诊及病房收治的外周型脊柱关节炎(peripheral spondyloarthritis,p Sp A)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者,本院健康工作人员为对照组。采用多普勒超声检查7对肌腱附着点,比较三组人群超声下附着点炎评分。采用受试者工作特征曲线分析超声下附着点炎评分在诊断p Sp A中的价值。结果 共纳入p Sp A组49例、RA组41例和对照组30例。超声下附着点炎的阳性率在p Sp A组及RA组中差异无统计学意义(P<0.05)。p Sp A组及RA组超声下附着点炎的阳性率均显著高于对照组(P<0.05)。超声下附着点炎评分在p Sp A组显著高于RA组及对照组(P<0.05)。超声下附着点炎评分(≥6.5分)在诊断p Sp A中的敏感性和特异性分别为80.6%和60.7%;当与RA相鉴别时,超声下附着点炎评分(≥6.5分)在诊断p Sp A中的敏感性和特异性分别为70.6%、62.5...     

MEKK3稳定表达细胞株的建立及其对A549细胞增殖的影响

目的 构建人MEKK3基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/hygro(+)质粒中,构建成MEKK3基因的真核表达载体,然后转染入人肺腺癌A549细胞...     

METTL3通过mRNA m6A甲基化促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移及分泌炎症因子

目的 探讨甲基转移酶样3(METTL3)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移及分泌炎症因子的作用及机制。方法 本研究纳入类风湿关节炎及骨关节炎患者各25例,留取滑膜组织,分别用RT-qPCR及免疫组化法检测METTL3表达水平,ELISA检测RNA m6A浓度;分离培养RA滑膜成纤维细胞,分为NC组、hi-METTL3(过表达METTL3)组、si-METTL3(敲低METTL3)组、STM2457(METTL3抑制剂)干预组,用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡、ELISA检测细胞培养上清液白介素-6(IL-6)、白介素-17A(IL-17A)、肿瘤坏死因子-κB活化受体配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的浓度。结果 与骨关节炎滑膜组织相比,RA滑膜组织RNA m6A表达显著增高(P<0.05),METTL3的表达显著增高(P<0.05)。过表达METTL3后,滑膜成纤维细胞m6A表达增加,细胞增殖、迁移能力显著提高,凋亡无明显变化,分泌细胞因子IL-6、RANKL显著增加,OPG显著减少(P<0.05)。干扰METTL3表达后,滑膜成纤...     

创伤性颅脑损伤患者IL-1β、IL-6、IL-10水平变化及临床意义

目的 探讨创伤性颅脑损伤后不同时期脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10的水平变化及临床意义.方法 选择79例创伤性颅脑损伤患者,其中轻型12例、 中型25、 重型42例.分别留取伤后1、2、3、7 d的脑脊液和血液标本,采用ELISA法检测伤后各时间点脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10浓度.另取查体健康者12例为对照组.结果 与对照组相比,创伤性颅脑损伤患者脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平均显著增高(P<0.01).重型颅脑损伤患者脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平显著高于轻中型组(P<0.01);且脑脊液中炎性因子和抗炎因子的浓度显著高于血清中的浓度.结论 创伤性颅脑损伤后促炎因子和抗炎因子水平对TBI病情评估、 临床治疗及预后评估具有一定的临床意义.     

MyD88基因真核表达载体的构建及表达

目的：构建人髓样分化因子88（MyD88）基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达．方法：从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT—PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3．1／myc—His（-）A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo—fectamine2000将其转染人人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达．结果：重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达．结论：成功构建了pcDNA3．1／myc—His（-）A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础．     

siRNA表达载体稳定沉默肺癌A549细胞MEKK3基因的细胞株建立

目的 构建人MEKK3基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株.方法 设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以BamH Ⅰ及Hind Ⅲ酶切位点分别克隆入pSilencer 4.1-CMV hygro载体,测序鉴定后以脂质体分别转染人A549细胞,Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制,并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞,潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株,荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制.结果 测序鉴定表明4个MEKK3 siRNA表达载体正确无误;Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用,其中pSilencer4.1-MEKK3 siRNA2的抑制率达84%;荧光实时定量PCR结果表明,pSilencer4.1-MEKK3 siRNA2可稳定沉默MEKK3 mRNA的表达,有效率达83%.结论 成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体,并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株.     

巴瑞替尼联合柳氮磺吡啶治疗类风湿性关节炎的临床研究

目的 探讨巴瑞替尼联合柳氮磺吡啶治疗类风湿性关节炎的临床疗效。方法 选取2021年5月-2022年12月海南医学院第一附属医院收治的82例类风湿性关节炎患者，随机法分为对照组（41例）和治疗组（41例）。对照组口服柳氮磺吡啶肠溶片，3粒/次，3次/d。在对照组的基础上，治疗组口服巴瑞替尼片，2 mg/次，1次/d。两组用药90 d。观察两组患者临床疗效，比较治疗前后两组患者症状好转情况，类风湿因子（RF）、红细胞沉降率（ESR）和生活质量评分量表（SF-36）评分，及血清细胞因子高迁移率族蛋白1（HMGB1）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 治疗后，治疗组患者总有效率（97.56%）明显高于对照组（82.93%，P<0.05）。治疗后，治疗组临床症状好转情况均显著好于对照组（P<0.05）。治疗后，两组患者RF、ESR指标明显低于治疗前，而SF-36评分指标显著高于治疗前（P<0.05），且治疗组RF、ESR和SF-36评分指标明显好于对照组（P<0.05）。治疗后，两组患者血清细胞因子HMGB1、IL-17、IL-1β、TNF-α水平明显低于治疗前（P<0.05），且治疗组均显著低于对照组（P<0.05）。结论 巴瑞替尼联合柳氮磺吡啶治疗类风湿性关节炎效果确切，能有效降低ESR、RF和炎症因子水平，改善患者生活质量。