α-突触核蛋白对内质网应激及细胞凋亡影响

目的:构建α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA)和SNCA突变基因(SNCAmu)过表达转染293T细胞,观察内质网应激及细胞凋亡.方法:应用PCR技术扩增目的基因并插入慢病毒载体质粒,重组质粒的构建及包装293T细胞,转染24 h后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescent prot...     

人α-突触核蛋白基因慢病毒稳定转染PC12细胞系的建立及其凋亡检测

目的 构建及鉴定人野生型和突变型α-突触核蛋白(SNCA和SNCAmu)基因慢病毒表达载体,并观察在体外大鼠嗜铬细胞瘤细胞中的表达。方法 在引物合成后采用PCR技术扩增目的基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒[pGC-FU,含绿色荧光蛋白(GFP)基因]中,构建SNCA基因慢病毒载体表达质粒(pGC-FU-SNCA-GFP)和SNCAmu基因慢病毒载体表达质粒(pGC-FU-SNCAmu-GFP),通过酶切、测序验证后,将pGC-FU-SNCA-GFP、pGC-FU-SNCAmu-GFP质粒和包装质粒pHelperi.0、pHelper2.0共同转染大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞),获得稳定转染。结果 通过检测标签蛋白GFP和目的蛋白,进一步验证pGC-FU-SNCA-GFP和pGC-FU-SNCAmu-GFP在靶细胞中的表达。通过噻唑蓝比色法检测稳定转染后细胞凋亡水平,稳定表达SNCA组(OE组)、SNCAmu组(OEm组)、不加慢病毒质粒的空白对照组(CON组)和加pGC-FU-GFP空载体对照组(NC组)共4组细胞,病毒转染后不同时间(1、2、3、4、5d)细胞增殖变缓(F =4.534、196.285、411.829、1282.049、3135.559,均P＜0.05)。碘化丙锭单染法检测细胞周期,CON组、NC组、OE组和OEm组G1期、G2期和M期细胞百分比差异有统计学意义(F= 885.79、45.03、207.11,均P＜0.05),其中G1期细胞百分比(％)较高(CON组：59.10±0.35、NC组：68.24±0.60、OE组：71.73 ±0.11、OEm组：74.66±0.35)。结论 人SNCA和SNCAmu基因转染到PC12细胞中,成功建立稳定表达的细胞系,并且对细胞凋亡水平和细胞周期有一定程度的改变。     

α-突触核蛋白的表达与氧化应激水平的相互影响

目的 探讨氧化应激与在稳定转染α-突触核蛋白(α-synuelein)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)中α-突触核蛋白表达的相互影响.方法 测定末转染、转染空质粒、已稳定转染野生型(WT)及突变型(A53T)α-突触核蛋白的PC12细胞的活性氧(ROS)水平,并以实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot...     

亨廷顿病发病机制的研究进展

亨廷顿病是由于IT15基因突变而产生,其导致huntingtin蛋白(Htt)的N端大量多聚谷氨酰胺重复扩张。重复扩张的多聚谷氨酰胺持续改变着正常Htt功能。并且这种变异的蛋白(Htt)本身是有毒性的。本文从Htt在神经元中不能够被泛素蛋白酶体系统所溶解的异常聚集、神经元基因转录水平失调导致显性改变、神经元线粒体和新陈代谢的异常导致能量代谢水平下调、轴突传输改变和突触失衡等角度阐述了其发病机制的研究进展。     

SNCA基因过表达慢病毒质粒构建及稳定转染293T细胞系

目的构建SNCA基因过表达慢病毒质粒,转染293T细胞,建立稳定转染细胞系。方法应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,并对阳性克隆进行基因测序鉴定。pGC-FU-SNCA-GFP重组质粒包装293T细胞,转染24小时后,用荧光显微镜观察标签GFP绿色荧光蛋白的表达,并用West blotting法测定目的蛋白的表达。结果成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP慢病毒过表达质粒,获得了稳定转染的293T细胞株。结论人SNCA基因过表达慢病毒载体成功,构建和稳定转染293T细胞系的建立,为进一步体外研究α-突触核蛋白的功能奠定了基础。     

眼肌无力的诊断及依据

重症肌无力是乙酰胆碱受体抗体介导的,细胞免疫依赖及补体参与的神经-肌肉接头处（NMJ）传递障碍的自身免疫性疾病。眼肌症状是最为多见的首发症状,表现为上眼睑下垂、复视、斜视等,尤以眼睑下垂最多。通过典型的临床表现及临床实验即可诊断、腾喜龙试验、血清抗体检测、电子诊断可以进一步确诊。     

难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层GRP78、caspase4的表达

目的观察难治性颞叶癫痫患者脑组织内质网应激相关分子GRP78、caspase4的表达,探讨内质网应激在难治性颞叶癫痫脑损伤中的作用。方法应用免疫组化、Western blot方法检测32例难治性颞叶癫痫患者手术切除的颞叶皮层脑组织GRP78、caspase4的表达,并与性别、年龄相匹配的对照组进行比较。结果与对照组相比,GRP78、caspase4在癫痫组表达明显上调(P0.05)。结论癫痫诱发了内质网应激,caspase4可能参与了癫痫后脑损伤,很可能为癫痫脑损伤的治疗提供新的靶点。     

督脉灸对胃癌患者N糖及细胞免疫调节作用的临床观察

目的：观察督脉灸对胃癌患者N糖及细胞免疫功能的调节作用。方法：将63例胃癌患者随机分为治疗组32例和对照组31例。两组都给予中药口服,治疗组加用督脉灸,2周为1个疗程,连续治疗6个疗程。观察两组患者治疗前后外周血中N糖的变化及CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺的变化。结果：与治疗前相比,对照组Peak1、Peak9均有降低,但差异无统计学意义(P>0.05),治疗组Peak1、Peak9明显降低(P<0.05);两组患者的Peak2均无显著性改变(P>0.05);治疗组Peak6显著性升高(P<0.05),对照组无明显变化(P>0.05)。与治疗前对比,对照组与治疗组的CD3⁺、CD8⁺无显著性变化(P>0.05);治疗组CD4⁺有显著性升高(P<0.05),且与对照组治疗后相比,差异有统计学意义(P<0.05);两组CD4⁺/C...     

中药外敷联合脐疗治疗癌性腹水36例的临床观察

目的：观察中药外敷配合脐疗对癌性腹水的临床疗效。方法：将74例癌性腹水患者随机分为治疗组36例和对照组38例，两组均予西医常规治疗，治疗组予以脐疗配合中药外敷。7 d为1疗程，连续治疗2个疗程。观察患者治疗后KPS评分、腹围及临床症状改变。结果：治疗后两组患者KPS评分均显著改善(P<0.05);治疗组腹围有显著改善(P<0.05);两组腹胀均有显著改善，治疗组优于对照组(P<0.05),治疗组呼吸困难有显著改善，优于对照组(P<0.05);治疗组有2例(5.56%)患者出现轻度不良反应。结论：脐疗配合中药外敷可显著改善癌性腹水患者的临床症状，提高患者生活质量。     

帕金森病运动症状及其发生机制研究进展

<正>帕金森病(Parkinson's disease,PD),又称震颤麻痹(paralysis agitans),是由英国医生James Parkinson(1817年)首先描述,是一种中老年人常见的运动障碍疾病,以黑质多巴胺能神经元变性缺失和路易小体(Lewy body)形成为病理特征,临床表现为静止性震颤、动作徐缓、肌强直和姿势步态异常等。