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目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α(HNF4α)和绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α,体外感染人肝肿瘤细胞株,观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录(RT)-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段,利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α;将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B,通过RT—PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达;同时观察外源导人HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α;经293细胞包装,4d后观察到GFP明显表达,反复扩增最终获得约1×10^10efu/ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α;AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后,有约90%以上的细胞表达GFP,HNF4αmRNA表达明显上调,蛋白表达分别增加3.4倍(HepG2)和5.2倍(Hep3B);同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调,且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达,同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强,肿瘤细胞生物学特性明显改善,这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。 相似文献
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血清甘胆酸测定对慢性肝病的诊断价值 总被引:3,自引:0,他引:3
血清甘胆酸是胆固醇在肝细胞内经一系列氧化、还原、脱羧等步骤合成胆汁酸后,再与甘氨酸结合而成,经胆管排泌至胆囊,进餐时随同胆汁排入小肠,对脂肪的消化吸收起重要作用。当肝脏功能受损时, 相似文献
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定量RT-PCR法检测脯氨酰4-羟化酶mRNA的表达 总被引:1,自引:2,他引:1
脯氨酰4-羟化酶(P4H)是胶原合成过程中的关键酶,在肝纤维化时肝组织中P4H的表达明显升高,抑制P4H活性对于纤维化病变具有很大的治疗价值[1,2]。若通过抑制P4H基因的表达来达到抑制P4H活性、减少胶原合成,有可能成为抗纤维化治疗的一种有效途径。为了检测靶细胞或靶组织中P4H的两种亚基的基因表达水平及观察某些药物对其表达的影响,我们建立了检测P4HmRNA的定量RT-PCR方法。1 材料和方法1.1 材料 AMV逆转录酶(AMV-RT)为Promega产品;Taq酶、dNTP,OligdT… 相似文献
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目的 观察不同浓度As2O3对结肠癌Lovo、LS-174T细胞株生长的影响。方法 0.125~2μ mo1/L的As2O3与结肠癌细胞株Lovo、LS-174T共同孵育,观察不同浓度As2O3作用不同时间对结肠癌细胞的生长抑制作用、细胞形态学改变、DNA的变化。结果 1~2μ mol/L As2O3作用的结肠癌细胞呈凋亡特征性改变:细胞膜不发生破裂,细胞核出现核浓缩、核碎裂和凋亡小体形成;流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性条带。结论 1~2μ mol/L As2O3可诱导结肠癌细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡与Fas、Fas-L表达有关。 相似文献
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目的评价多功能腹膜检查针在结核性腹膜炎诊断中的应用价值。方法2001年1月至2005年9月对第二军医大学附属上海长征医院消化内科收治的27例结核性腹膜炎住院患者中19例用自制多功能腹膜检查针行腹膜活检,并与患者的临床表现、辅助检查、腹腔镜等检查结果进行比较。结果27例患者中,5例根据症状、体征、血沉、血清和腹水癌抗原(CA125)以及腺苷脱氨酶(ADA)、抗结核抗体、腹水抗酸染色、PPD试验高度考虑结核性腹膜炎,余22例临床诊断依据不足的患者中,19例行腹膜检查针活检,其中14例病理报告提示腹膜结核病,确诊率73.68%,5例病理报告提示纤维组织增生、慢性炎性细胞浸润,不排除腹膜结核病,疑诊率26.32%;另外3例行腹腔镜检查确诊。结论自制多功能腹膜检查针行腹膜活检,操作简单,创伤性小,病理确诊率高,在无腹腔镜的单位或无条件进行腹腔镜检查的疑似结核性腹膜炎患者中,进行该项检查更具实用价值。 相似文献
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目的探讨人血清表皮生长因子(hEGF)水平与胃癌的关系.方法胃癌患者33例,男30例,女3例,年龄35岁~81岁,平均649岁;慢性胃炎患者38例,男25例,女13例,年龄18岁~75岁,平均432岁;正常人20例,男10例,女10例.应用RIA法检测血清中的hEGF.结果胃癌组血清hEGF(μg/L)为135±067,正常对照组为090±033,统计学差异非常显著(t=2825,P<001),慢性胃炎组血清hEGF为086±033,与正常对照组比较差异无显著性(t=041,P>005).结论胃癌患者血清hEGF水平升高可能与胃癌发生密切相关. 相似文献
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作者等应用抗HCV酶联免疫分析(EIA)试验药盒对93例消化系统恶性肿瘤疾病患者作血清抗HCV测定.血清抗HCV流行率在41例健康献血员为4.87%;在6例食管癌、15例进展期胃癌、13例结直肠癌、54例原发性肝癌及其它恶性肿瘤5例的检出率分别为0%、13.3%7.69%、9.25%和0%.除HCC组外,各组患者的抗HCV流行率和HB_sAg阳性与否无关.因此,对健康献血员及各种疾病患者在作肝功能及HBV系列测定同时应作抗HCV测定,对血清抗HCV阳性者应进行积极的治疗. 相似文献
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亚临床肝性脑病患者脑脊液一氧化氮含量检测及其意义 总被引:3,自引:0,他引:3
目前已知一氧化氮(NO)是重要的生物信使分子和效应分子,在体内广泛参与多种生理、病理过程,如调节血管张力,参与神经传递、介导炎症和免疫反应等。亚临床型肝性脑病(SHE)作为肝硬化的一种并发症,不仅出现心理-智力和脑诱发电位的异常,并有脑水肿等不同程度的脑损害,而且往往在脑脊液中有所反映。作者检测了SHE患者脑脊液中的NO含量,旨在探讨NO与肝性脑病病理生理机制的关系。1 材料与方法11 检测对象SHE组:12例。男10例,女2例,年龄35-57岁。为我院消化科1998年5月至1998年12月住院病人,均有肝硬化等慢性肝病基础,但无临床… 相似文献
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目的 研究As2 O3对裸鼠胃癌腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制。方法 10 0只BALB/C nu/nu裸鼠腹腔内接种胃癌MKN 4 5细胞株后 ,随机分为 5组 ,然后分别腹腔内注射生理盐水、表阿霉素及不同剂量的As2 O3,观察癌细胞株对各组裸鼠的致瘤率、腹水生成量及生存时间的影响 ;透射电镜观察As2O3作用后腹腔内肿瘤细胞的形态学变化。结果 表阿霉素、低剂量As2 O3与生理盐水对照组相比可显著抑制裸鼠腹水的生成 ,延长生存期 (P <0 .0 1) ;中高剂量As2 O3还可通过诱导肿瘤细胞凋亡消除腹腔内肿瘤细胞、抑制腹水产生、而使裸鼠寿命明显延长。结论 As2 O3可通过诱导胃癌细胞凋亡而抑制或消除裸鼠胃癌腹腔种植及腹水的生成 ,不同程度地延长生存期。 相似文献