2019年重庆市部分用人单位重点职业病危害因素检测结果分析

2019年对重庆市8个区县200家用人单位的重点职业病危害因素进行检测,共检测1 025个作业岗位,超标277个,超标率27.02％;超标的危害因素有矽尘、噪声、甲醛、锰及其化合物、苯,其中矽尘和噪声超标率较高,化学毒物超标率较低(P＜0.05);超标岗位多分布在小微型私营企业,集中于制造业.提示应加强矽尘、噪声等危害...     

DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中△40P53的作用

目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.     

α-突触核蛋白N 端结构域和电压依赖阴离子通道1 相互作用的分子机制

【立论依据】 帕金森病是主要发生在中老年人群的神经系统退行性变。目前认为与基因、环境和老化相关,三者主要作用于神经细胞线粒体导致其功能障碍。α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)是第一个发现的帕金森病致病基因编码的蛋白,是帕金森病病理标志路易体的主要成分。但到目前为止,α-Syn对细胞线粒体的致病机制尚不十分清楚。我们课题组前期工作首次发现,α-Syn可定位于线粒体内外膜,过表α-Syn可以引起线粒体膜电势下降及细胞色素C 释放到胞浆诱导凋亡;进一步发现线粒体膜渗透性转换孔(mPTP)开放,而α-Syn N端结构域(α-Syn/N)在这个过程中起重要作用。文献报道,α-Syn N端的62、63、65 位氨基酸可能是其定位于膜的关键位点。线粒体mPTP的外膜孔主要由电压依赖阴离子通道1(VDAC1)构成,我们预实验发现VDAC1和α-Syn存在相互作用。那么,α-Syn/N是否和VDAC1发生相互作用,导致mPTP开放而引起线粒体介导的凋亡呢?α-Syn/N的62、63、65 位氨基酸在这个过程中是否起重要作用呢? 【设计思路】 首先证明α-Syn/N和VDAC1之间存在相互作用,并过表达α-Syn/N,剪除α-Syn/N(α-Syn/delN),检测mPTP是否开放以及是否发生线粒体介导的凋亡。而后,构建α-Syn的62、63、65 位氨基酸突变体,检测过表达这些突变体对mPTP和线粒体介导的凋亡的影响,以及检测它们是否和VDAC1发生相互作用。 【实验内容】 (1)在HEK293T细胞中,过表达α-Syn、α-Syn/N、α-Syn/delN,用免疫共沉淀和免疫细胞化学的方法检测相互作用。(2)构建带VDAC1 基因的质粒,在HEK293T细胞中分别共表达α-Syn、α-Syn/N、α-Syn/delN 和VDAC1,用荧光共振能量转移(FRET)的方法检测是否存在直接相互作用,并再通过GST-pulldown方法验证。(3)在HEK293T细胞中,检测过表达α-Syn、α-Syn/N、α-Syn/delN对mPTP开放和线粒体介导的凋亡的影响。(4)构建α-Syn突变体(Q62A、V63A、N65A),检测过表达这些突变体对mPTP开放和线粒体介导的凋亡的影响。(5)检测这些突变体和VDAC1之间是否存在相互作用,方法同前。 【材料】 HEK293T 细胞,表达α-Syn,α-Syn/N,α-Syn/delN,Q62A,V63A,N65A 的质粒,线粒体提取试剂盒,JC-1 荧光探针(检测线粒体膜电势),mPTP 检测试剂盒。 【可行性】 我们的前期工作提示:α-Syn/N导致mPTP开放;α-Syn和mPTP外膜的孔的组成蛋白VDAC1之间存在相互作用;并且我们已经成功构建了过表达α-Syn、α-Syn/N、α-Syn/delN的细胞模型;以及α-Syn突变体(Q62A、V63A、N65A);并掌握了后续实验的全部方法。 【创新性】 目前关于α-Syn/N与mPTP 相关蛋白VDAC1的研究未见报道,本研究尝试揭示α-Syn与线粒体膜孔蛋白之间的确切关系,对进一步明确α-Syn引起线粒体介导凋亡的分子机制、明确帕金森病的致病机制具有重要意义,进而为帕金森病治疗的新靶点探讨提供线索。     

银法和铁钼法甲醛生产工艺外操岗位甲醛暴露职业健康风险比较

目的 了解甲醛生产普遍采用的两种工艺,即银催化氧化法(简称为"银法")和铁钼氧化物催化氧化法(简称为"铁钼法")生产工艺外操岗位甲醛暴露所致的职业健康风险.方法 选择银法和铁钼法两种甲醛生产装置为研究对象,分别开展职业卫生现场调查和甲醛浓度检测;应用美国环境保护署吸入风险评估模型和新加坡化学毒物职业暴露半定量风险评估模...