美国FDA HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引主要推荐及其启示

正病毒核酸检测(nucleic acid test,NAT)技术应用在血液筛查中是输血安全技术的巨大进步。为了规范血液病毒NAT操作、血液和献血者管理,美国FDA于2010年5月发布了《HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引》(简称2010年版指引)[1],其时正恰逢我国着手开展血液病毒NAT的试点工作,我们认识到该文对我国血液病毒NAT技术规范化操作和管理具有重要的参考借鉴价     

脐血单核细胞体外高效扩增NK细胞方法的研究

目的建立1种使用脐血单核细胞(UCBMC)制备较高纯度自然杀伤(NK)细胞的体外高效扩增方法,并初步鉴定扩增后的NK细胞杀伤肿瘤细胞(K562)的能力。方法 6人份脐血标本来自北京妇产医院,取20 mL/份、采用密度梯度离心法分离脐血中的UCBMC,提取后的UCBMC以1×10~6个/mL细胞在4 mL含有白细胞介素(IL)-2、IL-12、IL-15和IL-21的X-VIVO15中培养5 d,期间于d2和d3添加等体积含上述细胞因子的新鲜培养基; 800 g离心将细胞后转入含1 000 IU/ml IL-2和50 ug/mL L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的X-VIVO15培养基中继续培养至14 d,800 g离心收获细胞。无血清RPMI1640重悬后通过台盼蓝染色法做细胞计数测定细胞的扩增倍数;流式细胞仪检测NK细胞重要表面标志物(CD56和CD16等)及与杀伤功能相关的重要分子[CD158a、CD158b、CD158e/k、CD69、CD314(NKG2D)、CD94、CD335(NKp46)、CD337(NKp30)、CD62L、CD226(DNAM-1)、CD57和CD336(NKp44)]的表达情况;胞内染色结合流式细胞仪测定细胞杀伤重要效应分子Perforin和Granzyme B的表达情况,并以乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测扩增后的细胞对K562细胞的杀伤能力。结果 6份UCBMC培养14 d:活细胞总数从培养前的4×106个扩增至(3. 6—5. 5)×10~8个,扩增倍数91—137(116±13. 1); CD3-CD56+细胞(NK细胞)占比85. 6%—95. 5%(90. 2±3. 4)%;培养得到的NK细胞表面除表达CD56分子外,还表达CD16(91. 2±2. 6)%、CD158a(71. 4±4)%、CD158b(52. 1±2. 2)%、CD158e/k(50. 3±6. 9)%、CD69(95. 6±2. 8)%、CD314(NKG2D)(94. 2±1. 7)%、CD94(94. 1±2. 1)%、CD335(NKp46)(26. 6±4. 1)%、CD337(NKp30)(94. 6±1. 5)%、CD62L(12. 8±3. 4)%、和CD226(DNAM-1)(97. 6±1. 3)%,以及CD57(4. 2±0. 9)%和CD336(NKp44)(7. 1±1)%。胞内染色结果显示:90%扩增产物(细胞)内表达与NK细胞杀伤功能相关的Perforin(86. 9±2. 7)%和Granzyme B(94. 1±2. 9)%;体外细胞杀伤试验:扩增的细胞对K562在效靶比为5∶1和10∶1时对靶细胞(K562)具有明显的杀伤作用。结论成功建立了1种从UCBMC不经纯化直接制备高纯度NK细胞的方法——其培养的细胞中表达了NK细胞重要的功能性分子,对K562细胞具有杀伤能力。     

人血浆对红细胞保存的影响

为了研究人血浆对保存的红细胞结构和功能的影响，对悬浮红细胞、洗涤红细胞以及添加不同量血浆的红细胞成分血在不同保存时间内的红细胞的功能指标，包括pH值、K^＋浓度、Na^＋浓度、渗透脆性、血浆游离血红蛋白、乙酰胆碱酯酶活性、ATP含量、2．3-DPG、P50含量进行了比较。结果证明，血浆有利于保存血液维持其高pH值、低K^＋浓度和高Na^＋浓度，有利于保存红细胞维持其ATP含量、携氧能力和红细胞变形性，但对保存血液维持低渗透脆性，对保存血液的血浆游离血红蛋白、乙酰胆碱酯酶活性、ATP含量和2．3-DPG含量无影响。结论：在红细胞成分血中加入一定量的血浆可能有利于红细胞的长期保存。     

标本保存温度、时间和不同采血管对核酸检测结果的影响

目的验证不同真空采血管、保存温度、时间等对核酸检测(NAT)结果的影响,为NAT检测的采血管选取、过程控制、检测策略等提供数据支持。方法进行3个试验:1)标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响:将含HIV-1(150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存温度分为30℃组、4℃组,之后依据标本离心前的保存时间不同分为4 h,6 h,8 h,10 h,12 h,24 h组,再依据采血管生产厂家不同分为A、B、C组,对所有标本进行NAT联检试验,利用卡方统计分析各因素对NAT联检试验结果的影响;2)标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响:将含HIV-1(150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存时间不同分为0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d组,再依据采血管不同分为采血管A、B、C组,对所有标本进行NAT鉴别试验,利用卡方统计分析标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响;3)保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响:选取9份浓度范围在1.04×102IU/ml～4.86×103IU/ml之间的弱阳性标本,依据标本在4℃保存时间的长短不同,分为0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d组,进行定量HCVRNA检测,分析4℃保存条件下保存时间对血浆中HCV RNA浓度的影响。结果试验1:对于全血标本,4℃或30℃的保存温度,4～24 h的离心前保存时间以及采用不同的采血管对弱阳性标本NAT检出率的影响差异均无统计学意义(P>0.05)。试验2:在4℃保存条件下,采用A采血管保存含HIV-1(150 IU/ml)的弱阳性标本0～7 d,保存后d 3,d 4、d 5、d 6、d 7弱阳性标本的NAT检出率与0 d相比,差异具有统计学意义(P<0.01);采用B采血管保存含HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本0～7 d,保存后d 3和d 7此标本的NAT检出率与保存前相比差异有统计学意义(P<0.01);其余各组标本的NAT检出率与保存前相比差异没有统计学意义;试验3:9份HCV弱阳性标本的浓度7 d内没有出现明显变化。变化范围均在0.56log之内,且有相同的变化趋势,即在4℃保存2 d后,其浓度开始下降。结论采用Procleix Ultrio Assay和Procleix Ultrio Discriminatory Assay分析系统,在不超过30℃的采血环境中,NAT标本采集后可以在24 h内离心处理;为提高鉴别阳性率,建议4℃保存的献血者标本在NAT联检阳性后2d内完成NAT鉴别检测。     

穿透性角膜移植术后散光分析及控制

目的 通过穿透性角膜移植术后散光分析，探讨控制角膜散光的方法。方法 12例12眼穿透性角膜移植手术，间断缝合4眼，10—0单根尼龙线连续缝合8眼。术后扩瞳检影及角膜曲率仪检测，观察屈光状态。对有较大度数散光的，选择性拆除间断缝线2眼、显微镜下调整连续缝线3眼。结果 不同的缝合方法都会有一定程度的散光，选择性拆除间断缝线及调整连续缝线，散光度下降0．75—3．25D，平均2．45D。结论 熟练的缝合技术对减少术后散光较为重要，术后选择性拆除间断缝线及显微镜下调整连续缝线，可有效降低角膜散光。     

白内障超声乳化术后切口漏及切口裂开处理

目的 探讨白内障超声乳化术后切口漏及切口裂开的原因、治疗措施及预防方法。方法 对13例(13只眼)巩膜遂道切口行白内障超声乳化术后切口漏及裂开患者进行观察,分析其原因,提出处理及防护措施。结果 13患者中,4只眼仅为切口漏水,经按摩切口,散瞳及加压包扎,视力恢复术后最好视力;9只眼切口裂开,虹膜脱出,人工晶状体移位,经对症处理,2只眼恢复术后最好视力,7只眼低于术后最好视力。结论 及时及正确处理可减轻切口漏及裂开对眼的损害,但宜强调预防发生。     

青光眼术后白内障超声乳化术

目的探讨青光眼术后白内障超声乳化手术适应症、时机、手术方法和并发症。方法回顾性分析2002年1月至2004年2月青光眼术后白内障患者44例,其中预防性虹膜周边切除术8例,滤过性手术36例。对39例术前眼压控制在正常范围或仅局部药物能控制正常的病例做上方透明角膜内切口或颞侧角膜缘巩膜隧道切口,避开功能滤过区行白内障超声乳化术;对3例术前眼压须全身药物才能控制的病人,控制眼压后避开原手术区行白内障超声乳化联合小梁切除术。随访半年。结果视力均有不同程度提高结论,0.5以上33例,视觉电生理检查视功能损害与术前有明显差别,眼压均在正常范围。结论超声乳化手术是治疗青光眼术后白内障的有效方法。     

美国FDA HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引主要推荐及其启示(下)

正4献血者归队的推荐意见需要注意,献血者归队准许符合献血者健康检查要求的归队献血者以后继续献血,但不影响该献血者之前所献血液(包括需要启动事后调查程序的血液)的状态。4. 1因HIV-1/2检测有反应性而被屏蔽的献血者的归队4. 1. 1目前FDA尚未找到由于下述HIV-1检测结果被屏蔽献血者归队的适当程序1) HIV-1 NAT(如双病毒NAT有反应性后做鉴别NAT或HIV-1 RNA单病毒NAT)有反应性和     

单纯疱疹病毒性角膜炎药物联合治疗的临床观察

目的评价华蟾素联合阿糖胞苷注射液和无环鸟苷滴眼液治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的疗效。方法将186例(200只眼)单纯疱疹性病毒角膜炎患者随机分为治疗组106例和对照组94例,治疗组采用静脉滴注华蟾素、结膜下注射阿糖胞苷注射液和结膜囊滴用无环鸟苷滴眼液联合治疗。对照组采用上述三种治疗方法中的一种或两种。结果治疗组第一疗程治疗时间最长10天,最短3天,平均6天痊愈,治愈率为94.3％,而对照组治疗时间最长40天,最短7天,平均15．2天,治愈率为64．9％,两组相比差异有显著性(P<0．05)。结论本方法能明显缩短疗程,减少瘢痕形成,提高治愈率。     

小切口非超声乳化人工晶状体植入术治疗528例老年性白内障

目的研究小切口非超声乳化人工晶状体植入术治疗老年性白内障的临床疗效及安全性。方法回顾性分析淮北市人民医院眼科自2010年4月至2013年4月收治的528例620眼行小切口非超声乳化人工晶状体植入术治疗的老年性白内障患者的临床资料。观察手术并发症及术后视力恢复情况,同期入院行超声乳化白内障吸出术的200例240眼老年患者为对照组。结果术后第1天裸眼视力≥0．1者598眼,脱盲率为96．5％;≥0．3者568眼,脱残率为91．6％。术后1周随访,裸眼视力≥O．1者610眼,脱盲率为98．4％。〉／0．3者588眼,脱残率为94．8％;人工晶体植入615眼,置入率为99．2％。术中及术后少数老年患者出现不同程度的并发症,轻度虹膜炎症25眼（4．0％）,角膜内皮轻度水肿34眼（5．5％）,后囊破裂8眼（1．3％）,一过性高眼压6眼（1．0％）,透明皮质残留6眼（1．0％）,对症处理后很快得到治愈,无其他严重并发症。结论采用小切口非超声乳化术治疗白内障效果良好,安全性高,并发症少,手术效果满意,适合我国基层白内障复明工程。