miR-145antagomir转染的脂肪间充质干细胞对野百合碱诱导的肺动脉高压的作用

目的：研究miR-145 antagomir转染脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cell,ASC）在野百合碱（monocrotaline,MCT）诱导的大鼠肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）中的作用。方法：建立大鼠PAH模型,随机分为空白对照组（对照组）、MCT造模组（MCT组）、正常ASC注射组（ASC组）、antagomir转染组（antagomir组）和antagomir空载体转染组（antagomirNC组）,分别进行不同处理的ASC移植。2周后测量大鼠右心室压力（right ventricular systolic pressure,RVSP）,取心脏组织和左肺上叶组织进行作病理检查,测量右心室肥厚指数（right ventricle-to-left ventricle+septum,RV/LV+S）、心肌细胞相对横截面积（cross-sectional area,CSA）和肺小动脉内膜+中膜厚度（medial wall thickness+intimal thickness,MT+IT）。结果：病理检查显示antagomir组肺小动脉内膜较MCT组明显变薄。RVSP：ASC组RVSP为22.48±2.67 mmHg,antagomir组为18.77±2.14 mmHg,antagomir NC组为21.92±2.77 mmHg,均低于MCT组的26.85±3.03 mmHg,差异均有统计学意义（P<0.05）,其中antagomir组RVSP降低最明显。RV/LV+S和CSA：ASC组分别为0.33±0.04和349.83±14.21 μm2,antagomir组分别为0.26±0.03和320.67±18.23 μm2（P<0.001）,antagomir-NC组分别为0.3±0.03和356.83±15.36 μm2,均低于NCT组的0.4±0.026和396.33±21.25 μm2,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：miR-145 antagomir转染的ASC可以延缓PAH的进展,为PAH提供了一个潜在的治疗方向。     

血小板衍生生长因子BB在川崎病血小板增多中的作用及机制研究

目的通过体内外实验探究血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对川崎病(Kawasaki disease,KD)小鼠和人巨核细胞株Dami细胞生成血小板的作用及机制。方法ELISA检测KD及健康儿童各40例血清PDGF表达水平。C57BL/6小鼠构建KD模型,随机分为正常组、KD组、伊马替尼组,每组30只。检测各组血常规及PDGF-BB、巨核细胞集落形成单位(megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK)、巨核细胞标记物CD41表达。采用CCK-8、流式细胞术、实时定量PCR、Western blot检测PDGF-BB对Dami细胞生成血小板的作用和机制。结果PDGF-BB在KD患儿血清中高表达(P<0.001)。KD组小鼠血清PDGF-BB高表达(P<0.05)、CFU-MK及巨核细胞标记物CD41表达增加(P<0.001);伊马替尼组CFU-MK及CD41表达减少(P<0.001)。体外实验结果显示,PDGF-BB促进Dami细胞增殖、血小板生成、PDGFR-βmRNA及p-Akt蛋白表达(P<0.05);联合组(PDGF-BB 25 ng/mL+伊马替尼20μmol/L)血小板生成、PDGFR-βmRNA和p-Akt蛋白表达少于PDGF-BB组(P<0.05)。结论PDGF-BB可能通过与PDGFR-β结合,激活PI3K/Akt通路,促进巨核细胞增殖、分化及血小板生成;PDGFR-β抑制剂伊马替尼可减少血小板生成,为KD血小板增多的诊疗提供了新的策略。     

铁皮石斛多糖降血糖作用研究

目的 研究铁皮石斛中多糖种类及其降血糖功能。方法 采用DEAE-纤维素阴离子交换色谱分离铁皮石斛粗多糖,三甲基硅醚衍生化法测定分离多糖的单糖组成,红外光谱表征分离多糖的结构。采用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型研究分离多糖对模型小鼠空腹血糖值、血清胰岛素水平及糖化血清蛋白含量的影响。结果 铁皮石斛中分离得到4种分离多糖,含量最高分离多糖DOP1的单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖及甘露糖（摩尔比为3.5∶1.2∶1.5∶1.0）。红外光谱分析结果与单糖组成研究相符,同时显示4种分离多糖均为硫酸多糖。4种分离多糖在给药21d后能够显著降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖值（P<0.01）、提高血清胰岛素水平（P<0.05~0.01）以及降低糖化血清蛋白含量（P<0.01）,其中以DOP1作用最强。结论 铁皮石斛分离多糖具有显著的降血糖作用。      

细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用

建立细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法,应用该定量方法测定放线菌素D作用下细胞中p53表达量的变化。采用免疫沉淀法提取细胞样品中的p53蛋白,对提取后的样品进行酶解,基于肽图分析选择特异性肽段VEYLDDR（m/z 455.2²⁺-681.21+）作为定量肽段,设计合成肽段VEYIEDR（m/z 462.1²⁺-695.2¹⁺）作为内标肽段,建立该肽段的LC-MS/MS定量方法,通过该肽段表征p53蛋白的量;应用该质谱定量方法对放线菌素D给药后的HCT116细胞中的p53蛋白的表达量进行测定。p53蛋白质谱定量方法学考证表明,方法的线性良好（R²=0.999 3）,范围2.2~112.3 pmol/mL;专属性好,基质中无干扰成分,批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求;放线菌素D给药后细胞中p53蛋白的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加。建立的细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法可以准确的测定细胞内的p53蛋白表达量。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用；LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响；RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响；流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达，显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效，其机制可能与减少细胞P-gp表达有关，减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排，增加胞内浓度，从而提高药效。     

miR-206对肺动脉内皮细胞增殖的影响及机制研究

目的 ：探讨microRNA-206(miR-206)对人肺动脉内皮细胞（human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs）增殖能力的影响及其作用机制。方法：体外培养HPAECs细胞株后,分别进行miR-206 agomir/antagomir转染,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证转染效果。对转染成功后的HPAECs采用CCK-8法、EdU法检测细胞活性和增殖能力,蛋白质印迹法（Western Blot）检测JAK2-STAT3信号通路蛋白质表达。以JAK2抑制剂AG490(100 nM)处理HPAECs,采用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测HPAECs中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达水平的变化。结果：miR-206 antagomir组HPAECs在转染48 h、72 h时细胞增殖能力高于Con组、agomir-NC组及antagomir-NC组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。HPAECs在miR-...     

血清同型半胱氨酸检测对急性肺栓塞预后的评估价值

目的 探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)检测评估急性肺栓塞(APE)预后的价值。方法 选择APE患者107例,根据简化肺栓塞严重指数评分分为高危、中危、低危三组。检测各组患者血清Hcy水平,比较不同血清Hcy水平患者的预后差异。结果 Hcy阳性与Hcy阴性患者中高危、中危、低危所占比例及复发率、病死率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。高危、中危、低危患者血清Hcy水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血清Hcy检测可预测APE患者预后。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用；LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响；RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响；流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达，显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效，其机制可能与减少细胞P-gp表达有关，减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排，增加胞内浓度，从而提高药效。     

静脉溶栓与导管介入溶栓治疗急性中危肺栓塞效果比较

目的：评价急性中危肺栓塞患者进行静脉溶栓和导管介入溶栓的疗效及经济学指标,为治疗方法的选择提供参考。方法：32例急性中危肺血栓栓塞患者,依据溶栓药物尿激酶给药途径的不同分为静脉溶栓组15例和导管介入溶栓组17例,比较两组疗效、凝血、预后及经济学指标。结果：PaO2和PaCO2静脉溶栓组由治疗前的71.59±10.83 mmHg,31.43±4.62 mmHg升高至87.80±4.31 mmHg和38.93±4.32 mmHg,导管介入溶栓组由治疗前的67.44±13.02 mmHg,31.52±5.80 mmHg升高至88.18±6.44 mmHg和38.82±3.66 mmHg,差异均有统计学意义（P<0.001）。肺动脉压静脉溶栓组治疗前49.80±12.18 mmHg,治疗后降至32.6±11.04 mmHg,差异有统计学意义（P<0.05）;导管介入溶栓组治疗前55.29±21.89 mmHg,治疗后降至37.18±15.07 mmHg,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者PT、APTT在治疗前后无明显变化,而D-二聚体静脉溶栓组在治疗24小时后开始显著下降,介入溶栓组在治疗3天后D-二聚体开始显著下降,与治疗前比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。静脉溶栓组出现病情加重1例（6.7%）,复发2例（13.3%）,导管介入溶栓组病情加重1例（5.9%）,复发2例（11.8%）,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。两组均无出血、死亡病例。住院时间静脉溶栓组为14.6±6.0天,导管介入组为15.3±6.1天,差异无统计学意义（P>0.05）,住院费用静脉溶栓组2.04±0.87万元,低于导管介入组的4.23±2.30万元,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：静脉溶栓或导管介入溶栓两种方法治疗急性中危肺栓塞患者在临床疗效、凝血指标、预后及安全性方面基本相似,静脉溶栓较导管介入溶栓更便于临床实施,也能减轻患者的经济负担。