二十二碳六烯酸及其代谢产物对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用

目的研究二十二碳六烯酸（DHA）及其代谢产物16,17-环氧二十二碳五烯酸（16,17-EpDPE）对正常大鼠冠状动脉平渭肌细胞大电导钙激活钾通道（BK）单通道的激活作用,探讨DHA扩张冠状动脉、保护心血管的机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录0,0．01,0．1,0．3,1,3,5,7．5和10mmol／L浓度下DHA及其代谢产物16,17-EpDPE灌流后BK单通道开放概率。结果在电极外液钙离子浓度为1mmol／L和刺激电位60mV条件下,DHA浓度为0,0．01,0．1,0．3和1mmol／L时,BK通道开放概率分别为0．0914±0．0098,0．0907±0．0102,0．0945±0．0091,0．0986±0．0112和0．1104±0．0145（P〉0．05,n=5）;DHA浓度为3,5,7．5和10mmol／L时,BK单通道开放概率分别为0．6712±0．0456,0．7511±0．0798,0．8424±0．1373和0．8669±0．0967（P〈0．05,n=5）,呈浓度依赖性增高。16,17-EpDPE浓度为0,10,50和100nmol／L时,BK单通道开放概率分别为0．1025±0．0114,0．1006±0．0091,0．1128±0．0132和0．1081±0．0143（P〉0．05,n=5）。结论低浓度DHA不能激活BK单通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合并直接激活BK单通道,这可能是DHA扩张冠状动脉的机制之一。     

不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制

目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制?方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞?采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化?结果:0.01~1.00 μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24 ± 0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00 μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38 ± 0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化?在电极外液钙离子浓度为1 μmol/L和刺激电位60 mV条件下,DHA浓度为0?0.01?0.03?0.10?0.30?1.00 μmol/L时,BK通道开放概率分别为 (0.095 2 ± 0.009 5)?(0.093 9 ± 0.012 6)?(0.098 6 ± 0.016 9)?(0.099 5 ± 0.014 7)?(0.097 5 ± 0.010 4)和(0.102 3 ± 0.020 6)(P > 0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3?10 μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3 ± 0.013 2)和(0.892 7 ± 0.052 3)(P < 0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37 ± 0.10)μmol/L?结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活?     

代谢综合征对冠状动脉血管平滑肌细胞离子通道的影响

<正>常状况下冠状动脉平滑肌细胞上钾离子通道、钙离子通道、瞬时受体电位通道和氯离子通道对冠状动脉功能起重要调节作用。代谢综合征时冠状动脉平滑肌细胞上钾离子通道、钙离子通道、瞬时受体电位通道和氯通道的结构或功能发生改变,导致冠状动脉病变,心血管不良事件增加。     

不同浓度胎牛血清对原代心肌成纤维细胞增殖及分化的影响

目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。     

大电导钙离子激活钾通道在心血管疾病中的研究进展

冠状动脉平滑肌细胞膜上存在许多大电导钙离子激活钾（BKCa）通道,在维持细胞正常生理活动中起重要作用。研究发现当细胞膜去极化或/（和）细胞内钙离子增加时,BKCa通道激活,开放增加,钾离子外流,细胞膜超极化,血管舒张。而在高血压、糖尿病、缺氧、心力衰竭和老化等许多病理情况下,BKCa通道功能发生改变,从而影响对血管功能的调节。本文主要综述近年来BK通道在心血管疾病中的研究进展。