Q开关Nd:YAG激光治疗颧部褐青色痣161例

颧颞部褐青色痣(nevus fuscoceruleus zygomaticus NFZ)亦称Hori痣、获得性双侧太田痣样斑(acquired bilateral nevusof Ota-Likemacules),是一种波及到真皮的色素增生性疾病,好发于中青年女性[1],影响面部美观。2003年5月～2006年5月,我们采用Q开关Nd:YAG激光倍频532nm治疗颧部褐青色痣患者161例,取得了较好疗效,现报道如下。     

角质形成细胞的培养及其表皮生长因子受体表达

目的:在成功分离人皮肤角质形成细胞的基础上,观察表皮生长因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达情况。方法:实验于2006-3/10在北京大学深圳医院中心实验室进行。采用dispase Ⅱ-trypsin两步消化法获取表皮基底层细胞,用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液进行培养。小鼠皮肤成纤维母细胞的预处理:向对数生长期的小鼠皮肤成纤维母细胞培养液中加入丝裂霉素C至终浓度为4mg/L,37℃下培养4h,弃去培养液,用D-Hank’s液洗3次,加入浓度为0.25g/L的胰蛋白酶消化,分离出细胞,离心(200g,5min),用黄素腺嘌呤二核苷酸培养液悬浮细胞,计数,以5.0×104/cm2的密度种于培养皿内,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。角质形成细胞的培养:将分离的角质形成细胞悬浮在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中,以2.0×104/cm2的密度接种在前1天经丝裂霉素C处理的小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层上,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。24h换液,以后每3d换1次液。采用免疫细胞化学的方法检测表皮生长因子受体的表达,采用复合逆转录聚合酶链反应检测角质形成细胞中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果:采用dispaseⅡ消化法分离了真皮和表皮,获得较多的角质形成细胞,可以避免真皮成纤维细胞的污染。人皮肤角质形成细胞在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中培养5d可见明显的集落,约10d可长满单层。免疫细胞化学显示表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,复合逆转录聚合酶链反应显示表皮生长因子受体mRNA有明显的表达。结论:用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液可以较好地培养原代人皮肤角质形成细胞,表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,这些结果为与表皮生长因子受体相关的皮肤病(如银屑病)的研究奠定了基础。     

兔骨髓基质细胞的体外分离培养及诱导成骨的实验研究

目的 探讨兔骨髓基质细胞（BMSCs）的体外分离培养及定向诱导成骨的方法。方法 选择10周龄新西兰兔，抽取其股骨大转子部骨髓，体外分离纯化得到BMSCs，再利用条件培养液将其向成骨方向定向诱导培养。采用碱性磷酸酶（ALP）和冯库萨（Von Kossa）染色方法，鉴定其成骨性能。结果 BMSCs在培养皿中贴壁生长、增殖，经ALP和Yon Kossa染色证实其有成骨潜能。结论 兔BMSCs的体外培养增殖能力强，能诱导分化为成骨细胞，可以作为骨组织工程的种子细胞。     

睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达

目的 构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP,检测其在Hela细胞中的表达情况.方法 采用RT-PCR的方法从成年Balb/c小鼠睾丸组织中扩增T490基冈,将该基凶连接克降到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,再将T490和EGFP融合基因酶切下来,克隆到pcDNA3.1(-)真核超表达载体上,以构建重组质粒pDT490EGFP.将该重组质粒通过阳性脂质体Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中,在荧光显微镜F观察转染24h后融合基因的超表达情况,并用RT-PCR的方法进一步证实目的 基因mRNA的表达水平.结果 RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA,大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体L;在荧光显微镜下,转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光;RT.PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显.结论 重组质粒pDT490-EGFP构建成功,并在细胞内明显表达,此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能,为T490的生物学研究奠定基础.     

RNAi抑制皮肤鳞癌A431细胞EGFR表达的实验研究

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对皮肤鳞癌A431细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因表达的抑制作用及其对A431细胞增殖、凋亡的影响.方法:设计制备两对针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染A431人皮肤鳞癌细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达;Western Blot测定EGFR蛋白的表达;MTT法检测细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:siRNA2干扰后EGFR mRNA与蛋白的表达强度分别为(16.5±1.6)%和(11.1±1.6)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);在EGFR表达受到抑制的同时,转染后的A431胞生长速度明显变慢;A431细胞的凋亡率为(12.6±1.4)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论:siRNA2能有效抑制皮肤鳞癌细胞EGFR基因的表达,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡.     

绿原酸抗人皮肤成纤维细胞衰老的研究

目的 探讨绿原酸在乙二醛诱导的人皮肤成纤维细胞衰老中的保护作用。 方法 使用1 mmol/L乙二醛处理体外培养的人皮肤成纤维细胞,构建细胞衰老模型。用5、10、20、40、80 μmol/L绿原酸和乙二醛共同处理人皮肤成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,筛选出绿原酸的有效浓度。1 mmol/L乙二醛分别与有效浓度的绿原酸（10、20、40 μmol/L）共同作用于成纤维细胞,细胞衰老β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法及实时荧光定量PCR法检测衰老细胞比例和衰老基因p16INK4a mRNA的表达情况。统计分析采用单因素方差分析和LSD法。 结果 与空白对照组人皮肤成纤维细胞增殖（100% ± 6.90%）相比,乙二醛可明显抑制细胞增殖（55.65% ± 2.00%）,两组差异有统计学意义（P < 0.01）。与乙二醛组细胞增殖相比,除乙二醛 + 5 μmol/L绿原酸组（55.36% ± 2.58%）外,乙二醛 + 10、20、40、80 μmol/L绿原酸组对细胞增殖均有不同程度地保护作用（细胞增殖率分别为60.75% ± 1.32%、67.65% ± 1.90%、75.71% ± 3.25%、75.69% ± 2.38%）,呈剂量依赖性,40 μmol/L绿原酸达高峰,80 μmol/L绿原酸与40 μmol/L组相比,细胞活力的差异无统计学意义（P > 0.05）,因此筛选出绿原酸的有效浓度为10 ~ 40 μmol/L。与空白对照组衰老细胞比例（13.00% ± 2.22%）比较,加入乙二醛后,衰老细胞明显增多（35.65% ± 2.24%）,差异有统计学意义（P < 0.01）。与乙二醛组细胞SA-β-gal染色阳性率相比,分别加入10、20、40 μmol/L绿原酸与乙二醛共培养后,细胞SA-β-gal染色阳性率呈剂量依赖性减少（31.50% ± 2.13%、22.31% ± 3.11%、19.32% ± 3.01%）,差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白对照组衰老基因p16INK4a mRNA的表达比较,乙二醛组明显增高（2-ΔΔCt：1.00 ± 0.06比0.26 ± 0.05,P < 0.01）,分别加入10、20、40 μmol/L绿原酸与乙二醛共培养后表达下降（0.88 ± 0.08、0.73 ± 0.06、0.68 ± 0.04,P < 0.05）。 结论 绿原酸在乙二醛致人皮肤成纤维细胞衰老中具有潜在的保护作用。     

SEPT11基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的初步探讨Septin11(SEPT11)基因在精子发生中的作用。方法通过实时定量PCR、蛋白免疫印迹及免疫荧光等方法检测SEPT11在不同周龄野生型小鼠以及成年睾丸支持细胞激素受体(Ar)特异性敲除小鼠(SCARKO)和Ar全敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果 SEPT11基因小鼠出生2周内高表达,随后表达水平降低,出生6周后出现并与未释放的成熟精子共定位且高表达。与野生型小鼠相比,SEPTIN11在SCARKO小鼠和ARKO小鼠睾丸中表达降低(P0.01),m RNA水平显著升高(P0.01);SEPTIN11在成熟精子中定位于尾部。结论 SEPT11基因在小鼠出生时表达最高;SEPTIN11在小鼠成熟精子中定位于尾部;Ar的敲减提高了SEPT11的表达。     

UTX在肾癌中的高表达及其临床意义

目的:检测UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法:收集临床诊断明确肾透明细胞癌患者组织标本45例,提取组织mRNA,制作组织切片,采用实时定量PCR和免疫组织化学分析UTX在肾癌组织和癌旁组织表达的差异,并分析其表达改变与临床病理参数之间关系.结果:实时定量PCR结果显示,UTX mRNA在肾癌组织中的表达明显高于癌旁组织[(0.883 2±0.703 8vs.0.199 7 ±0.140 0,P＜0.05],免疫组织化学结果同样表明肾癌组织UTX表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),UTX在肾癌组织中的蛋白评分高出癌旁组织4倍[12±4vs.3±3,P＜0.05].UTX在肾癌组织中的表达与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期无明显关系,但与病理分级关系密切(P=0.004).结论:UTX在肾透明细胞癌中表达增高,并且与肾癌分级相关.     

内皮素对黑素细胞的调控作用

内皮素系统包括内皮素及其受体。该系统能够单独或者协同α-黑素细胞刺激素、干细胞因子和编码性别相关转录因子等信号分子调节黑素细胞的发育、分化、增殖、黑素合成、黏附和移行，并在色素沉着过度、白癜风和黑素瘤等皮肤色素障碍性疾病的发病过程中起着重要的作用。因此，深入研究内皮素系统与色素障碍性疾病的关系，以及研发选择性作用于内皮素受体的新型药物将为某些色素障碍性皮肤病的治疗提供新的思路和方法。     

组织工程化人工皮肤的胶原蛋白代谢研究

目的检测组织工程化人工皮肤的细胞外基质成分——胶原蛋白的合成和含量的动态变化,为组织工程化人工皮肤的研究提供生物化学依据。方法利用壳多糖作为基质网架制备组织工程化人工皮肤,用3H-脯氨酸掺入法测定胶原蛋白合成,Woessner法测定胶原蛋白含量。结果随着培养时间的延长,组织工程化人工皮肤胶原蛋白含量和合成能力呈上升的趋势。结论利用壳多糖作为基质网架制备的组织工程化人工皮肤具有合成和分泌胶原蛋白的能力。