基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2凋亡的机制研究

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,可通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。仙鹤草可能通过该通路实现抗肿瘤作用。     

小组合作教学模式在医学微生物学课程教学中的应用探究

目的：探讨小组合作教学模式在医学微生物学教学中的应用效果。方法：以医学本科生为研究对象,随机分为实验组和对照组,分别采用小组合作和传统教学模式授课。以测试成绩、交流能力评价量表和问卷调查对教学效果进行评价。结果：小组合作教学模式可显著提高学生自学能力、分析问题能力和交流能力,并有利于培养合作精神。     

急性肝衰竭猪动物模型微环境对脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

目的：探究急性肝衰竭猪脂肪来源的间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells from acute liver failure porcine, ALF-ADMSCs)的生物学活性,为肝衰竭患者的脂肪间充质干细胞（adipose derived mesenchymal stem cells,ADMSCs）是否具有潜在的自体移植潜能的提供实验依据。方法：分别获取急性肝衰竭猪来源的ADMSCs和正常猪来源的ADMSCs（adipose derived mesenchymal stem cells from normal porcine, Nor-ADMSCs）,进行原代分离和培养。观察第1代与第5代ALF-ADMSCs的细胞形态,CCK8法检测ALF-ADMSCs增殖能力,检测和分析其诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞、成肝细胞的能力,以及分析ALF-ADMSCs和Nor-ADMSCs中肝脏特异性基因的表达。结果：成功分离培养ALF-ADMSCs和Nor-ADMSCs,第1代与第5代ALF-ADMSCs细胞形态均与Nor-ADMSCs相似。ALF-ADMSCs和Nor-ADMSCs均高表达间充质干细胞表面标记CD105和CD90,不表达或低表达造血干细胞表面标记CD14。ALF-ADMSCs与Nor-ADMSCs增殖能力无差异。与Nor-ADMSCs相比较,ALF-ADMSCs诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肝样细胞的能力相当。肝细胞生长因子（HGF）在ALF-ADMSCs中的表达量比Nor-ADMSCs高12.48±0.59倍。结论：ALF-ADMSCs具有正常的干细胞的特征与生物学特性,没有因ALF微环境而改变,且其高表达肝细胞生长因子,可作为干细胞移植治疗终末期肝病的理想细胞源。     

附苓方通过DRP1调控糖代谢重编程抑制卵巢癌细胞转移的机制研究

[目的] 研究附苓方(Compound Fuling Granule，CFG)对卵巢癌细胞糖代谢及转移的影响，并探讨其作用机制。[方法] 体外培养人卵巢癌HEY-T30细胞，采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8，CCK-8)检测不同浓度的CFG(0.25、0.5、1、1.5、2 mg·mL-1)干预24 h后各组细胞活力；以Transwell实验检测CFG对HEY-T30细胞迁移的影响；采用乳酸测定试剂盒及葡萄糖检测试剂盒检测CFG对HEY-T30细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量的影响；采用免疫印迹法检测动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1，DRP1)、糖酵解及转移相关蛋白的表达；以Mito-Tracker Red标记线粒体，观察线粒体形态。采用慢病毒转染技术，构建DRP1稳定敲低的人卵巢癌HEY-T30细胞，以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR)检测DRP1的mRNA表达，以乳酸测定试剂盒及葡萄糖检测试剂盒检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量的影响，Transwell实验检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞迁移的影响，免疫印迹检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞转移及糖代谢相关蛋白表达的影响。[结果] 与对照组比较，CFG浓度在0.5、1、1.5、2 mg·mL-1时细胞存活率明显下降(P<0.01)；0.5、1 mg·mL-1浓度组细胞线粒体平均长度明显增大(P<0.01)，DRP1蛋白表达量明显下降(P<0.05，P<0.01)，细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量明显下降(P<0.01)；0.25、0.5、1 mg·mL-1浓度组细胞迁移数量明显减少(P<0.05，P<0.01)。敲低DRP1后，卵巢癌细胞的糖酵解水平及迁移能力减弱(P<0.05，P<0.01)，糖酵解及转移相关蛋白表达有不同程度的下降(P<0.05，P<0.01)，CFG对卵巢癌细胞糖酵解及转移的抑制作用也被减弱。[结论] CFG可能通过DRP1调控糖代谢重编程，从而抑制卵巢癌细胞转移。