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目的 研究自组装核酸纳米材料携带的mTOR小干扰RNA (self-assembled nucleic acid nanoparticles loaded mTOR small interfering RNA,siRNA-NPs)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)自噬和增殖的影响.方法 设计并合成DNA序列mT-2A、mT-1 A3以及5'端标记Cy3的mTOR siRNA,共设计mTOR siRNA序列3条,选其中最佳序列,将上述核酸材料按照操作步骤自组装合成三角板型的核酸纳米材料.实验分4组:核酸纳米材料携带的mTOR siRNA组(siRNA-NPs组)、单纯纳米材料组(NPs组)、单独的siRNA组和空白对照组.各组材料分别转染RPASMCs 24 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对核酸纳米材料携带的mTOR siRNA的摄取情况;应用RT-PCR检测各组细胞中mTOR mRNA的表达水平,应用Western blot检测p-mTOR、LC3B蛋白的表达水平;激光共聚焦、透射电镜检测细胞自噬水平;MTT及3 H-TdR检测各种材料处理后对细胞的生长的影响.结果 激光共聚焦显微镜下可见siRNA-NPs组细胞质内均匀分布大量呈颗粒状的红色荧光物质,其荧光强度均显著高于单独的siRNA组(P＜0.05);而且siRNA-NPs组处理的mTOR mRNA和p-mTOR蛋白表达显著低于单独的siRNA组、NPs组及空白对照组(P＜0.05);而LC3B蛋白表达显著高于其他各组(P＜0.05),激光共聚焦检测显示siRNA-NPs组标记自噬小体的绿色荧光明显强于单独的siRNA组、NPs组及空白对照组(P＜0.05),电镜结果显示siRNA-NPs能明显诱导细胞自噬小体形成;MTT及3H-TdR检测siRNA-NPs和单独siRNA处理RPASMCs后明显抑制其生长,且siRNA-NPs组细胞生长抑制率又显著高于单独的siRNA组(P＜0.01).结论 siRNA-NPs能被RPASMCs有效摄取并明显抑制靶基因的表达,进而诱导细胞自噬并且抑制其细胞增殖. 相似文献
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