氨磷汀对氢醌诱导骨髓细胞凋亡的影响

苯的代谢产物氢醌是苯的骨髓毒性作用的主要物质,其作用与细胞凋亡有关[1 ] 。而氨磷汀作为广谱细胞保护剂选择性地保护正常细胞免受放化疗的毒害作用已广泛应用于临床[2 ] 。我们在体外观察了氨磷汀对氢醌诱导的骨髓单个核细胞凋亡的影响,以探讨氨磷汀对苯骨髓毒性的保护作用。材料和方法1　药物及主要试剂　1 ,4 氢醌购自上海凌峰化学试剂有限公司,灭菌双蒸水配制成原溶液。阿米福汀(注射用氨磷汀)购自湖南银河生化工程有限公司,生理盐水配制成原溶液。按不同倍数稀释成所需浓度。膜联蛋白(Annexin)Ⅴ FITC试剂盒购自CaltagLabratoies…     

氢醌诱导造血细胞凋亡的体外研究

目的:研究体外培养条件下氢醌对骨髓和脐血单个核细胞凋亡的影响,探讨苯对造血细胞毒性作用的机制。方法:分离单个核细胞。加入不同浓度氢醌,采用流式细胞术AnnexinV-FITC加碘化丙啶(PI)双染定量检测不同时间细胞凋亡率和坏死率的变化。结果:氢醌能诱导骨髓单个核细胞凋亡,并存在量效和时效关系,氢醌诱导细胞凋亡的最佳浓度为50μmol/L,细胞凋亡的高峰时间为10h。氢醌能诱导脐血单个核细胞凋亡,与药物浓度和和作用时间有关,以75μmol/L作用8h较为显著。结论:苯代谢产物诱导的造血细胞凋亡和坏死可能是苯中毒导致的造血功能障碍的主要机制之一。     

氢醌对人骨髓单个核细胞拓扑异构酶Ⅱα表达的影响

目的 研究苯代谢物氢醌(hydroquinone,HQ)对人骨髓单个核细胞中拓扑异构酶(TOPO)Ⅱα表达的影响,探讨TOPOⅡα在HQ所致造血毒性中的作用及调控机制.方法 50μmol/LHQ处理的正常人骨髓单个核细胞为实验组,设立对照组(等体积灭菌蒸馏水培养),应用TOPOⅡ检测试剂盒检测TOPOⅡ的活力,免疫印迹法(Western blotting)检测TOPOⅡα含量的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TOPOⅡα mRNA表达水平的改变,染色质免疫沉淀分析法(ChIp)检测TOPOⅡα含量的变化.结果 (1)正常人骨髓单个核细胞50 μmol/LHQ处理10 h后,TOPOⅡ的活力下降,TOPOⅡα含量以及TOPOⅡαmRNA水平分别为0.017±0.029、0.610±0.128,较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);(2)TOPOⅡα含量降低伴随着TOPOⅡα启动子组蛋白H4乙酰化水平的明显降低(分别为1.198±0.056、0.324±0.229),差异有统计学意义(P<0.01),不伴有组蛋白H3乙酰化水平的改变,分别为1.253±0.045、1.177±0.025;(3)HQ接触不同时间TOPOⅡαmRNA水平呈动态变化,且TOPOⅡα启动子水平的变化早于mRNA水平的变化.结论 HQ可抑制造血细胞TOPOⅡα的表达.组蛋白化学修饰水平的改变在苯代谢物所致的造血毒性中发挥一定的作用.     

雷利度胺单用或联合用药治疗多发性骨髓瘤

目的为了观察雷利度胺在我国多发性骨髓瘤患者中的疗效和不良反应。方法对10例多发性骨髓瘤患者采用单用雷利度胺或联合用药治疗。结果nCR1例,PR1例,MR1例,NC3例,PD4例,总有效率70.0(包括4例PD,曾经有效后进展)。中位治疗反应时间为5.1(1～16)周。不良反应:粒细胞减少3例,血小板减少1例,轻微乏力,头晕2例,过敏性皮疹1例,低钾血症1例,合并肺部感染2例,短暂性脑缺血发作1例。结论雷利度胺单用或联合用药疗效较佳,其不良反应较少,患者耐受良好,并且可以在门诊应用。     

流式免疫磁珠法检测BCR-ABL融合蛋白在白血病中的意义

目的：探讨流式免疫磁珠（CBA）法检测白血病患者BCR-ABL融合蛋白的方法学评价及其意义。方法：采用CBA法检测64例白血病患者和10例正常人外周血白细胞中BCR-ABL融合蛋白表达,同时与实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）和荧光原位杂交（FISH）法比较。结果：正常人外周血白细胞BCR-ABL融合蛋白平均荧光强度（MFI）是10.58±3.88,64例白血病患者中BCR-ABL阳性25例,仅1例B-ALL患者检测结果与RQ-PCR结果不一致,与FISH检测结果完全一致。结论：CBA法检测BCR-ABL融合蛋白方法可靠,重复性好,简单,快速,具有良好的临床应用前景。     

CHNP和CHOP方案治疗非霍奇金淋巴瘤的临床疗效和安全性比较

目的 观察和比较含长春瑞滨(盖诺)的CHNP方案与含长春新碱的CHOP方案治疗非霍奇金淋巴瘤的疗效及安全性.方法 收集并统计23例以标准CHNP及21例CHOP方案治疗的病例.结果 CHNP组总有效率(CR+PR)为87.0%,CHOP组的总有效率(CR+PR)为61.9%,两者差异有显著性.两组毒副作用差异无显著性.结论 含长春瑞滨(盖诺)的CHNP方案治疗晚期非霍奇金淋巴瘤有较好的疗效,与CHOP方案相比毒副作用相仿,疗效更显著.     

体外培养下氢醌诱导骨髓单个核细胞凋亡的研究

目的　研究体外培养条件下氢醌对正常人骨髓单个核细胞凋亡的影响 ,以探讨苯对造血干细胞的毒性作用。方法　采用HT荧光染色观察形态学变化 ,DNA片段的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,流式细胞术ANNEXINV FITC加碘化丙啶 (PI)双染定量检测细胞凋亡率和坏死率的变化。结果　加入不同浓度氢醌培养 6h后出现细胞核荧光强度增强 ,核着色加深 ,核着色不均匀 ,染色质浓集 ,染色质沿核周分布现象。DNA电泳呈典型的“梯形”条带。流式细胞术检测结果发现 ,不同浓度氢醌作用后 ,细胞凋亡率明显高于空白对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。随着浓度的增加 ,凋亡率明显增加 ,氢醌诱导细胞凋亡的最佳浓度为 5 0 μmol L ,而当氢醌浓度为≥ 75 μmol L时 ,细胞坏死率明显增高。浓度为 5 0 μmol L氢醌诱导的细胞凋亡 ,随着作用时间的延长 ,凋亡率明显增高 ,作用 10h达高峰 ,而后细胞凋亡率下降 ,坏死率增加。结论　体外培养条件下氢醌能诱导骨髓单个核细胞凋亡 ,并存在量 -效与时 -效关系。     

CD28/CTLA-4:B7在特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血淋巴细胞CD28、CTLA-4(CD152)、B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的表达及意义。方法:采用免疫荧光标记和流式细胞术检测41例ITP患者和40例健康对照者外周血CD3+CD28+细胞、CD3+CD152+细胞、CD80+CD19+细胞和CD86+CD19+细胞分别占淋巴细胞的比例及血小板表面相关抗体水平,进行2组对比、分析。结果:与正常对照组相比,急性ITP患者外周血CD3+CD28+细胞和CD3+CD152+细胞差异无统计学意义(P0.05),CD80+CD19+细胞增多(P0.05),CD86+CD19+细胞显著增多(P0.01),慢性ITP患者CD86+CD19+细胞增多(P0.05);急性ITP患者外周血CD86+CD19+细胞较慢性ITP患者增多(P0.05);与正常对照组相比,急性ITP患者PAIg's、PAIgG和PAIgM水平显著增高,慢性ITP患者PAIgG水平增高;CD80、CD86表达与PAIgG水平之间存在显著的相关性(均P0.01)。结论:ITP患者外周血B淋巴细胞上CD86和CD80表达均异常,可能与其发病相关。     

氢醌对人骨髓单个核细胞TOPO Ⅱα表达的影响及其可能机制

目的：观察苯代谢物氢醌（hydroquinone,HQ）对人骨髓单个核细胞拓扑异构酶Ⅱα（TOPOⅡα）表达的影响,探讨TOPOⅡα在HQ所致造血毒性中的作用及其调控机制。方法：50μmol/L HQ培养10h的正常人骨髓单个核细胞设为实验组,等体积灭菌蒸馏水培养10h为对照组。Western blot测定TOPOⅡα含量的变化,RT-PCR测定TOPOⅡαmRNA表达水平的改变,ChIP技术观察HQ对骨髓单个核细胞TOPOⅡα启动子组蛋白乙酰化、甲基化水平的影响。结果：①与对照组相比,人骨髓单个核细胞50μmol/L HQ处理10h后,TOPOⅡα含量、TOPOⅡαmRNA水平明显下降,差异有显著性（P〈0.01）;②TOPOⅡα含量降低伴随着TOPOⅡα启动子组蛋白H4乙酰化、组蛋白H3K4甲基化水平的明显降低（P〈0.01）、组蛋白H3K9甲基化水平升高（P〈0.05）,不伴有组蛋白H3乙酰化水平的改变（P〉0.05）。结论：HQ能抑制造血细胞TOPOⅡα的表达;组蛋白化学修饰可能在苯代谢物所致的造血毒性中发挥一定的作用。