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目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。 相似文献
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目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠海马区结缔组织生长因子(CTGF)与炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响及其可能的机制。方法 50只Wistar大鼠随机分为5组(每组10只),各组用微量注射泵海马内注射法制造动物损伤模型。3周后:通过免疫组织化学检测各组大鼠海马转化生长因子β1(TGF-β1)、CTGF表达;通过Westernblot检测大鼠海马TGF-β1、CTGF以及炎症因子IL-1β和TNF-α表达并进行蛋白半定量分析。结果在AGE-BSA组大鼠的大脑海马区神经元内TGF-β1、CTGF着色呈棕黄色,颜色灰度明显高于正常对照组;AGE-BSA组TGF-β1、CTGF、IL-1β和TNF-α蛋白表达明显高于正常对照组(P〈0.01);与AGE-BSA组比较,RAGE中和抗体组TGF-β1、CTGF、IL-1β和TNF-α蛋白表达明显减少(P〈0.05)。结论糖基化终末产物通过与其受体(RAGE)结合促进TGF-β1的表达上调,进而导致海马区神经元内CTGF的高表达,而且可以造成炎症因子IL-1β和TNF-α表达增多。 相似文献
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目的研究糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激的影响,探讨AGEs在AD发病中的可能机制。方法以糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)分别处理SH-SY5Y细胞0、12、24、48 h,蛋白质免疫印迹法检测内质网应激(ERS)相关蛋白GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的表达水平。再将细胞随机分为正常对照组(NC组)、牛血清白蛋白对照组(BSA组)、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组(RAGE-Ab组)、AGE-BSA+α-硫辛酸组(ALA组)、AGE-BSA+NADPH氧化酶抑制剂DPI组(DPI组)。蛋白免疫印迹法半定量检测各组细胞ERS相关蛋白表达水平变化,同样处理后用免疫荧光染色观察GRP78、p-eIF2α表达水平,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测各组细胞活性氧(ROS)水平。结果 AGE-BSA处理细胞24 h后免疫蛋白印迹可见GRP78、p-eIF2α出现表达高峰,同时荧光染色可见两者高水平表达,48 h后Caspase-12表达水平显著升高,且ROS水平达到NC组的6.95倍。与AGE-BSA组相比,RAGE-Ab组、ALA组、DPI组的ROS水平都有不同程度的降低(P<0.01),同时GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的表达水平均有明显下调(P<0.01或P<0.05)。结论 AGEs可诱导SH-SY5Y细胞ROS产生,并通过启动氧化应激及内质网应激对细胞造成损伤。 相似文献
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目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响,探讨AGEs与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法分别以不同浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理SH-SY5Y细胞48 h,选取AGE-BSA敏感浓度(200μg/mL)处理细胞不同时间,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,确定AGE-BSA诱导SH-SY5Y凋亡最佳浓度及时间。将细胞随机分为对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组、AGE-BSA+α-硫辛酸组、AGE-BSA+DPI(NADPH氧化酶抑制剂)组。FCM检测细胞凋亡率变化,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,Western blot测定Caspase-12的表达。结果细胞凋亡率随AGE-BSA浓度增加及作用时间延长而升高,200μg/mL AGE-BSA作用48 h细胞凋亡率从对照组的(2.23±0.08)%增加到(16.8±1.27)%(P<0.05),同时,Hoechst染核后可见典型凋亡形态改变,细胞内ROS水平显著增高,Caspase-12蛋白表达明显上调,与对照组相比差异显著(P<0.05),而分别用抗RAGE中和抗体、α-硫辛酸、DPI预处理后再加入AGE-BSA,各组与AGE-BSA组比较,凋亡率明显下降,ROS水平、Caspase-12蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论糖基化终末产物可刺激SH-SY5Y细胞产生大量ROS及活化Caspase-12介导细胞凋亡,通过阻断其与特异性受体RAGE结合或减少细胞内ROS可减轻细胞凋亡的发生。 相似文献
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