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背景与目的:耐药性是导致肺癌患者化疗失败的主要原因。探讨YAP对人肺癌PC9细胞多柔比星耐药的逆转作用及其机制。方法:利用体外筛选方法从多柔比星敏感性肺癌细胞系PC9获得耐药细胞克隆,并检测YAP的表达水平;利用shRNA沉默细胞中YAP的表达,应用MTS法检测肿瘤细胞药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期、凋亡及对Rh-123的吸收能力,蛋白[质]印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)技术检测ABCB1、ABCC1、p53、Runx2、ITGB2和ErbB4的表达水平及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,AKT)的磷酸化水平变化。结果:经体外诱导获得多柔比星耐药细胞克隆PC9/Adr,且YAP蛋白在其中高表达,利用shRNA得到不同YAP沉默程度的PC9/Adr。YAP沉默后,细胞生长速度降低,细胞对多柔比星的敏感性显著增加,细胞周期被阻滞在G0/G1期,多柔比星诱导的细胞凋亡增多,细胞吸收Rh-123也增多,并与YAP的沉默程度呈正相关。Western blot和QRT-PCR结果显示,YAP沉默后,ABCB1、ABCC1、Runx2、ITGB2和ErbB4蛋白表达下调,而p53的表达上调,AKT的磷酸化水平则下降。结论:YAP过表达与PC9/Adr的耐药性相关,沉默YAP可恢复PC9/Adr对多柔比星的敏感性。这一作用与调节耐药相关基因的表达、促进细胞凋亡有关。 相似文献
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目的:探讨上皮间质转化(EMT)在非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭转移中的作用,为NSCLC的治疗和预后预测提供新的实验依据。方法:利用免疫组化检测97例EMT相关标志物上皮性钙粘蛋白(E-cad)、β-连环素(β-cat)和神经性钙粘蛋白(N-cad)、纤连蛋白(Fibronectin FN)、波形蛋白(Vimentin)在NSCLC中的表达情况。分析以上表达情况与肺癌临床病理特征的关系及其相关性。结果:(1)在97例NSCLC中,E-cad、β-cat、N-cad、FN、Vimentin阳性表达率分别是50.5%(49/97)、28.9%(28/97)、8.2%(8/97)、67.0%(65/97)、34.0%(33/97)。(2)E-cad在不同组织学分级及淋巴结有无转移分组中其表达有显著差异(P<0.05),β-cat在不同组织分级阳性表达有显著差异(P<0.05)。Vimentin在淋巴结有无转移分组中表达有显著差异(P<0.05),FN在在不同肿瘤大小、组织学分级及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0.05)。(3)NSCLC中,E-cad与β-cat表达存在正相关(P<0.05)。(4)VIM在NSCLC中与E-cad及β-cat表达呈明显负相关(P<0.05),FN表达与E-cad呈负相关(P<0.05),而与β-cat表达无差异(P>0.05)。(5)N-cad在NSCLC中阳性表达率为8.2%(8/97),在组织学类型及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0.05)。结论:E-cad、β-cat在NSCLC中表达发生了下调,而N-cad、FN、VIM表达升高,说明NSCLC中存在EMT现象。且与肿瘤侵袭转移相关,均可以作为NSCLC恶性程度、转移复发、预后的判断指标。 相似文献
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目的:研究TSPAN8基因对A549肺癌细胞增殖的促进作用及其机制。方法:选取A549为研究对象,MTT法检测转染TSPAN8质粒对细胞增殖的作用;采用流式细胞仪技术检测转染TSPAN8质粒对细胞周期的影响;Real-time PCR和免疫印迹法检测TSPAN8基因对Rb1、E2F1、C-myc、CDK4、Cyclin D1以及ERK信号分子蛋白活性的影响。结果:TSPAN8基因能明显促进A549肺癌细胞的体外增殖能力;Real-time PCR和Western blot显示,转染TSPAN8基因后,E2F1、C-myc、CDK4、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达上调,而Rb1的表达明显下调,而且p-ERK磷酸化水平亦明显上升。结论:TSPAN8基因能促进A549肺癌细胞的增殖,其作用可能与调控E2F1、C-myc、CDK4、Cyclin D1基因的表达,以及活化ERK相关信号通路相关。 相似文献
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目的:检测肺癌组织及癌旁正常组织中miR-34b和miR-155的表达水平及其与肺癌临床病理特征之间的关系。方法:收集50例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常肺组织标本,运用 Real-time PCR检测 miR-34b和miR-155在肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达情况,分析其表达与肺癌临床病理特征之间的关系。结果:Real-time PCR 检测显示在50例非小细胞肺癌组织中 miR-34b的表达显著低于癌旁正常肺组织(P=0.019),而miR-155的表达显著高于癌旁正常肺组织(P=0.000)。MiR-34b和miR-155的表达与淋巴结转移情况显著相关(P均<0.05,miR-34b呈负相关,miR-155呈正相关);与性别、年龄、病理类型及肿瘤分化程度无明显相关;miR-34b的表达与临床病理分期无显著相关,而miR-155表达与临床病理分期显著相关。结论:MiR-34b和miR-155的异常表达与非小细胞肺癌的发生发展相关,其可能成为肺癌的筛查、诊断及治疗的肿瘤标志物。 相似文献
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目的:探讨上皮间质转化(EMT)在非小细胞肺癌(NSCLC) 侵袭转移中的作用,为NSCLC 的治疗和
预后预测提供新的实验依据。方法:利用免疫组化检测97 例EMT 相关标志物上皮性钙粘蛋白(E-cad)、茁-连
环素(茁-cat)和神经性钙粘蛋白(N-cad)、纤连蛋白(Fibronectin FN)、波形蛋白(Vimentin)在NSCLC 中的表达情
况。分析以上表达情况与肺癌临床病理特征的关系及其相关性。结果:(1)在97 例NSCLC 中,E-cad 、茁-cat 、
N-cad、FN、Vimentin 阳性表达率分别是50. 5% (49/97)、28. 9% (28/97)、8. 2% (8/97)、67. 0% (65/97)、34. 0%
(33/97)。(2)E-cad 在不同组织学分级及淋巴结有无转移分组中其表达有显著差异(P<0. 05),茁-cat 在不同组
织分级阳性表达有显著差异(P<0. 05)。Vimentin 在淋巴结有无转移分组中表达有显著差异(P<0. 05),FN 在在
不同肿瘤大小、组织学分级及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0. 05)。(3) NSCLC 中,E-cad 与
茁-cat 表达存在正相关(P<0. 05)。(4)VIM 在NSCLC 中与E-cad 及茁-cat 表达呈明显负相关(P<0. 05),FN 表
达与E-cad 呈负相关( P<0. 05),而与茁-cat 表达无差异( P>0. 05)。(5) N-cad 在NSCLC 中阳性表达率为
8. 2%(8/97),在组织学类型及淋巴结有无转移分组中阳性表达有显著差异(P<0. 05)。结论:E-cad、茁-cat 在
NSCLC 中表达发生了下调,而N-cad、FN、VIM 表达升高,说明NSCLC 中存在EMT 现象。且与肿瘤侵袭转移相
关,均可以作为NSCLC 恶性程度、转移复发、预后的判断指标。 相似文献
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目的:探究受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3(RIPK3)介导的巨噬细胞M2型极化在结直肠癌肝转移(CRLM)中的作用及其相关机制。方法:收集CRLM患者结肠肿瘤及其癌旁组织,对肿瘤组织进行病理分析。通过RT-qPCR法检测RIPK3、CD68、精氨酸酶-1(Arg-1)表达量。采集CRLM患者和结肠癌患者外周血,通过流式细胞术检测巨噬细胞分型,利用ELISA检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-4、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10含量。使用慢病毒将PLKRIPK3和PLK-NC转染至THP-1细胞,采用PMA/IL4诱导为M2型巨噬细胞,通过RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞极化程度。将两组细胞分别与人结肠癌细胞系WiDr共孵育,检测WiDr细胞迁移、侵袭变化和结肠癌相关转移1(MACC1)、原癌基因MYC(c-MYC)表达情况。结果:CRLM患者结肠肿瘤病理结构符合肠腺癌肝转移。与癌旁组织相比,RIPK3在CRLM肿瘤组织表达降低,CD68、Arg-1表达增加。与结肠癌患者相比,CRLM患者外周血中富集更多的... 相似文献
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