超高压脱细胞方法制备组织工程血管支架

背景:构建组织工程血管支架的研究多集中于生物可降解支架和脱细胞同种或异种血管支架方面,但存在急需解决的若干问题:如生物可降解支架生物降解速度的控制以及植入脱细胞天然血管支架可能带来供体来源病毒细菌感染受体问题等.目的:采用超高压结合核酸酶洗涤方法(超高压脱细胞技术)处理同种异体血管,观察该方法的脱细胞效果以及猪内源性反转录病毒的去除情况.设计:对比观察实验.单位:日本国立心血管病中心研究所.材料:实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成.选用健康雄性迷你猪幼猪,由日本九州鹿儿岛Japan Farm食用猪养殖场提供,体质量3～5 kg,猪龄1～3个月.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.实验涉及的主要试剂和仪器:Hoechst 33258为日本同仁化学研究所产品;超高压设备KOBELCO为神户制钢所产品:PCR为GENEAMP PCR SYSTEM 9700产品.方法:实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成.无菌条件下取出猪降主动脉血管,用超高压设备以981 Mpa超高静水压(4 ℃)将供体来源细胞压碎,结合核酸酶的消化作用,PBS的搅拌洗涤,脱去细胞残片形成血管生物支架.主要观察指标: ①利用Hcechst 33258荧光探针,定量检测超高压脱细胞血管中DNA含量;用JEM100cx型透射电镜观察血管组织细胞成分去除和支架纤维保留情况;用JBM5200型扫描电镜观察支架的超微结构;100倍光镜下观察血管壁形态结构.即从组织学、分子生物学、免疫组组织化学水平评估超高压脱细胞方法的抗原去除效果. ②用PCR方法检测幼猪脱细胞血管中的猪内源性反转录病毒(PERV)前病毒DNA,评估超高压脱细胞方法对以猪内源性反转录病毒为代表的病原微生物的杀灭效果.结果: ①血管壁形态结构:血管壁纤维波浪状结构保存完好,组织? 内的细胞均被除去. ②细胞去除效果:透射电镜见细胞成分均已消失.但保留有胶原纤维和弹性纤维.扫描电镜可见细胞已被完全脱去,只剩脱细胞支架. ③病原微生物的杀灭效果:经过超高压处理,猪内源性反转录病毒被成功灭活,无法测出.而采用表面活性剂脱细胞组无法将猪内源性反转录病毒灭活. ④DNA含量:超高压脱细胞处理前,血管中DNA含量为(31.7±3.5) mg/L;超高压脱细胞处理后,DNA含量为(1.16±0.23)mg/L,DNA含量显著降低(P＜0.01).提示超高压脱细胞方法已将细胞核及内容物大部分除去.结论:实验证明采用超高压脱细胞方法可基本除去支架内细胞成分,可以将病源微生物杀灭(将猪内源性反转录病毒成功灭活).     

Fontan手术的微创化发展及研究进展

Fontan手术是目前功能性单心室患者的首选治疗方法,但传统手术多次开胸带来的众多并发症仍难以避免。随着介入技术的飞速发展,外科手术和介入手段混合使用的Hybrid Fontan手术开始被尝试用于替代分期外科手术以建立Fontan循环,为Fontan手术的微创化提供了新的可能。该文介绍Fontan手术微创化的发展过程、常见Hybrid Fontan手术方法及相关研究进展。     

浅析医疗纠纷的根源及对策

当前我国医患关系紧张,医患矛盾激化,医患纠纷日益蔓延。医患关系是医生和患者的最密切关系,也是社会关系的主要组成部分,医患的不和谐,医疗纠纷的产生对医疗事业、人民健康、国家社会发展都造成了不利影响。而造成医疗纠纷的根源却是多种多样,通过对医患关系的全方位分析,找出医疗纠纷的根源,减少我国医疗纠纷的发生,从而构建和谐的医患关系。     

Ross手术治疗儿童主动脉瓣病变的早期疗效再认识

目的:回顾性分析Ross手术治疗儿童主动脉瓣病变的早期效果及经验总结。方法:共16例患儿于2018年5月到2019年12月在我院行Ross手术,年龄(6.6±3.4)岁(1.8~12.2岁),主动脉瓣狭窄3例,主动脉瓣狭窄伴反流8例,主动脉瓣反流5例,其中2例合并心内膜炎。9例患儿有手术史：球囊扩张术7例,主动脉瓣交界...     

真空冷冻干燥过程中猪主动脉血管的力学性能

摘要 背景：以往的冷冻干燥研究着重探讨冷冻保护剂、降温速率、保存温度等因素，目前尚缺乏冷冻干燥工艺对冻干后血管力学性能的研究。 目的：使用质构仪对冻干后复水的猪主动脉与新鲜猪主动脉进行力学性能对比分析，揭示冷冻干燥过程对猪动脉血管力学性能的影响，从而选择一个适合血管冷冻干燥过程的控制参数。 方法：采用真空冷冻干燥技术，对新鲜的猪主动脉血管进行冻干处理，猪主动脉经过微机控制程序降温仪进行预冻处理，然后由真空冷冻干燥机完成一次和二次干燥过程。冷冻干燥结束后，将冻干血管进行复水，然后使用质构仪对其穿刺应力、轴向拉伸应力和周向拉伸应力进行测量。 结果与结论：血管冷冻干燥合适的预冻速率为1 K/min，一次干燥温度为-20 ℃，二次干燥温度为10 ℃。血管冻干后复水，其力学性能同新鲜血管相比，穿刺和周向拉伸应力分别增大20%和30%左右，轴向拉伸应力减小约20%。结果表明冻干复水后的血管基本保持了新鲜血管的弹性，耐压性和顺应性，可望成为一种有效的血管保存手段。     

血管冻干工艺过程中升华界面移动特性的微CT实验

背景：前期实验发现冻干过程中物料内部的孔隙分部、空隙连通度等对内部传热传质影响较大，但对于干燥过程热质迁移的机制未阐明。 目的：在前期实验基础上，以微CT为分析工具，尝试对冷冻干燥过程中升华界面移动特性进行实验观察分析，希望对血管冻干工艺提供参考。 方法：以新鲜猪主动脉为材料使用微CT扫描仪的扫描成像、图像重构及灰度值分析技术对血管在冻干时升华过程进行观察分析。 结果与结论：冻干温度曲线斜率初期较大，升华速率较快，由血管的二维横截面重构图像中可以看出冻干区与冰晶区的灰度值差别较大，升华界面明显，升华是在物料的外表面和内表面同时进行，界面移动明显。随着时间推移，温度曲线斜率变小，升华速率也随之变慢，界面移动逐渐不明显。对于竖直放置的血管在底部进行加热的干燥过程，升华是在外表面和内表面同时进行的。升华界面逐渐向血管壁面中心移动。冻干过程随时间推移热质传递阻力增大，升华速率减慢。     

用牛颈静脉制备抗栓 抗钙化性右心流出道修复材料的实验研究

目的论证用牛颈静脉制备抗栓、抗钙化右心流出道修复材料的可行性。方法用EX-313交联牛颈静脉带瓣胶原管道并用肝素处理其内壁,裁成带单瓣的补片,用其扩大7条犬的肺动脉,同时建立用戊二醛制成的补片扩大肺动脉对照模型。在6个月内观察补片的抗栓、抗钙化、内皮化及组织重构的情况。结果在抗栓、抗钙化、内皮化及组织重构方面EX-313及肝素处理的牛颈静脉明显优于戊二醛处理者。结论经亲水性交联剂EX-313及肝素处理内壁的牛颈静脉有可能成为制作重建右心流出道的基本材料,在进一步研究的基础上它也可能成为组织工程带瓣管道的支架材料。     

超高压脱细胞技术制备组织工程带瓣血管支架

背景:研究表明同种瓣膜移植术后发生的退行性变性与其留存的细胞成分激发宿主免疫反应有显著的相关性.目的:采用超高压结合核酸酶洗涤方法处理猪带瓣膜血管,观察瓣膜脱细胞的效果及猪内源性反转录病毒的去除情况.设计,时间及地点:对比观察实验,于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成.材料:实验选用月龄1～3个月的健康雄性迷你猪幼猪,体质量3～5kg.方法:无菌条件下取出猪带瓣肺动脉血管,分为3组:对照组:无任何处理.表面活性剂组:将带瓣管道用Triton X-100溶液浸渍、搅拌24h后洗净.超高压处理组:用超高压设备以981MPa超高静水压(4℃)将供体来源细胞压碎,结合核酸酶的消化作用,磷酸盐缓冲液的搅拌洗涤,脱去细胞残片形成带瓣膜血管支架.主要观察指标:光镜下观察支架形态结构,透射电镜下观察支架细胞成分去除和支架纤维保留情况,扫描电镜观察支架表面的超微结构.观察两种方法处理瓣膜的弹性率差异.检测猪内源性反转录病毒前病毒DNA.定量检测超高压脱细胞前后带瓣管道中DNA含量的变化.结果:①超高压处理组瓣叶及瓣根组织表面及内部细胞完全消失,保留了细胞外基质,DNA含量显著降低.表面活性剂组瓣根组织深部的细胞无法渗透、除去.②超高压处理组瓣膜弹性率几乎不变,瓣膜功能保持较好.表面活性剂组瓣膜弹性率增加.③超高压处理组猪内源性反转录病毒被成功灭活,无法测出.表面活性热组无法将猪内源性反转录病毒灭活.结论:采用超高压脱细胞方法可基本除去支架内细胞成分,可将P,1源性反转录病毒成功灭活,保持了细胞外基质结构和功能的完整性,脱细胞效果优于表面活性剂方法.     

冷冻干燥过程中猪主动脉血管形态的变化

背景:冷冻干燥血管是进行血管移植的良好材料,但目前对冷冻干燥工艺的研究不多,同时缺乏对冻干后血管物理学性能变化的分析报道.目的:利用冷冻干燥的方法对血管的保存作了初步尝试,使用微型CT对冻干过程进行跟踪,以揭示冻干过程中血管形态发生的变化.设计及地点:单一样本观察,实验在上海理工大学制冷及低温研究所完成.材料:上海屠宰场生猪新鲜主动脉.冷冻干燥机为美国SP Industries公司生产;TRAPEZIUM LITE质构仪由岛津(香港)有限公司生产.方法:使用质构仪对冻干后复水的猪主动脉与新鲜猪主动脉进行力学性能对比分析.主要观察指标:①冷冻干燥过程温度曲线.②微CT断层扫描猪主动脉冻干过程.③猪主动脉冻干前后拉伸力学性能及穿刺力学性能比较.结果:试验结果发现猪主动脉血管在冻干过程中会发生分层现象,血管冻干后复水,其力学性能同新鲜血管比最大轴向拉伸应力减少约40%.,周向最大拉伸应力增大约45%,最大穿刺应力约是新鲜血管的75%.结论:冻干复水后的血管基本保持了新鲜血管的力学性能,可望成为一种有效的血管保存手段.     

超高压脱细胞组织工程血管支架的实验研究

目的 采用新的更安全的抗原去除技术-超高压脱细胞方法处理同种异体血管,观察该方法的脱细胞效果以及猪内源性逆转录病毒(PERV)的去除情况.方法 无菌条件下取出猪降主动脉血管,用10 000 atm超高静水压(4 ℃冷方压)将供体来源细胞压碎,结合酶的消化作用,PBS的搅拌洗涤,脱去细胞残片形成血管生物支架.对该支架脱细胞效果进行组织学评估、超微结构观察、检测DNA含量同时检测PERV.结果 组织学显示超高压脱细胞方法可完全除去血管支架内的供体细胞成分,经超高压脱细胞处理后DNA含量显著降低(p＜0.0001)、PERV被成功灭活.结论 超高压脱细胞方法可为我们提供更安全可靠的组织工程血管支架.