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目的·利用负染电镜技术分析人源核小体重塑及组蛋白去乙酰化酶复合物（nucleosome remodeling and deacetylase complex,NuRD复合物）结构,获得人源NuRD复合物的轮廓信息。方法·将C端带有3×Flag标签的MBD3 (methyl-CpG binding domain protein 3)和N端带有10×His标签的GATAD2A (GATA zinc finger domain containing 2A)克隆至pMLink表达载体中,采用聚乙烯亚胺瞬时转染过表达的方式在人源Expi293F悬浮细胞里表达NuRD复合物中的蛋白质组分;依次通过Ni-NTA亲和层析、Flag (DYKDDDDK)标签亲和层析和Superose 6 Increase 5/150凝胶过滤层析分离纯化NuRD复合物;利用蛋白质印迹法（Western blotting）和液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）对复合物进行组分鉴定;利用负染电镜技术结合单颗粒重构技术研究NuRD... 相似文献
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