恩格列净通过雷帕霉素靶点蛋白抑制胃癌的分子机制初探

目的 恩格列净(empagliflozin, EMPA)是钠-葡萄糖转运蛋白2(sodium-glucose cotransporter 2, SGLT2)特异性抑制剂。通过综合网络药理学预测EMPA对胃腺癌的干预靶点,并利用细胞生物学和分子生物学实验对其作用及分子机制进行验证。方法 使用生物信息学分析胃腺癌预后与SGLT2表达情况的相关性,网络药理学分析EMPA和胃腺癌的共同靶点。用不同浓度的EMPA孵育人胃腺癌细胞AGS 24 h后,CCK8法检测细胞增殖率;选择0、3、6 mmol/L EMPA孵育AGS细胞,实时细胞分析(real-time cell analysis, RTCA)和EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)检测EMPA对胃腺癌细胞增殖的抑制能力,伤口愈合实验和Transwell实验检测EMPA对胃腺癌细胞迁移和侵袭的抑制能力,Western blot检测雷帕霉素(mammalian target of rapamycin, mTOR)和磷酸化mTOR(phosphorylated mTOR, p-mTOR)表达。BALB/c(nu/nu)裸鼠均...     

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。     

正北芪中一种免疫活性蛋白质提取工艺的优选

目的:优选正北芪中一种免疫活性蛋白Am PR10-16(16.0 k Da)的提取工艺。方法:以正北芪中Am PR10-16的可溶性蛋白二级结构的圆二色性考察提取温度,在单因素试验基础上,以Am PR10-16在SDS-PAGE胶图中的蛋白条带吸光度(峰面积)为指标,采用L_9(3~4)正交试验考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂、粒度、提取次数对Am PR10-16提取工艺的影响,辅以BCA法测定可溶性蛋白含量作为佐证。结果:Am PR10-16最佳提取工艺为药材粉末过4号筛,加16倍量p H 8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)于40℃常压水浴提取60 min,每10 min搅拌1次。Am PR10-16提取率0.063 g·g~(-1)。结论:优化的提取工艺能正确反映Am PR10-16提取率的最高相对量,为Am PR10-16的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺。     

蒙古黄芪中2种具有免疫活性的可溶性粗蛋白提取工艺优选

目的优选蒙古黄芪Astragalus membranaceus mongholicus中2种免疫活性蛋白Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺。方法以蒙古黄芪中所含可溶性蛋白Am PR10-16k Da和HQGP-2二级结构的圆二色性对提取温度和提取溶剂种类进行考察;对该2种蛋白提取条件进行单因素考察,并采用L9(34)正交试验设计法,采用Image凝胶图形分析软件以Am PR10-16k Da和HQGP-2在SDS-PAGE凝胶图中的蛋白条带灰度值(峰面积)为指标,考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂(p H值)、药材粒度、提取次数对Am PR10-16k Da和HQGP-2蛋白条带灰度值的影响,从而确定Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺,辅以其免疫抑制率(CCK-8法)和可溶性蛋白定量测定(BCA法)作为佐证。结果建立了蒙古黄芪中Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺:向药材粉末(过4号筛)5.0 g中加入16倍量Tris-HCl,在温度40℃条件下恒温提取60 min,以100 r/min搅拌。蒙古黄芪蛋白质提取率为65 mg/g,且质量浓度为90μg/m L粗蛋白的免疫抑制率为90.90%。结论优化的提取工艺能正确反映Am PR10-16k Da和HQGP-2收率的最高相对量,为Am PR10-16k Da和HQGP-2的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺。     

核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。     

PDCD4表达下调通过pAKT/pGSK3β途径促进胃癌顺铂耐药的机制初探

摘要：目的 探讨程序性细胞凋亡因子4（PDCD4）表达下调在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制,为胃癌的 顺铂耐药提供新的分子靶点。方法 通过在人胃癌细胞系SGC7901中敲减表达PDCD4基因,顺铂诱导细胞凋亡,将 细胞分为shNC组、shPDCD4组、shNC加药组和shPDCD4加药组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测PDCD4 mRNA 表达水平;Caspase-3活性测定试剂盒、Hoechst染色结合细胞免疫荧光检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化蛋 白激酶B（pAKT）和磷酸化糖原合成酶激酶3β（pGSK3β）蛋白表达水平。在细胞中加入特异性Akt抑制剂,将细胞分 为 shNC 加药组、shPDCD4 加药组、LY294002 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 LY294002 再加入顺铂处理）和 Wortmannin 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 Wortmannin 再加入顺铂处理）,Western blot 检测聚 ADP-核糖聚合酶 （PARP）蛋白表达水平。结果 qRT-PCR 和Western blot 检测结果证实稳定转染ShPDCD4质粒的SGC7901细胞中 PDCD4的mRNA表达和蛋白表达均有显著下降,体外稳定转染ShPDCD4的SGC7901胃癌细胞株构建成功。相较于 shNC 加药组,shPDCD4 加药组 Caspase3 活性下降,细胞凋亡降低（P＜0.05）。PDCD4 表达下调将导致 pAKT 和 pGSK3β的表达水平提高（P＜0.05）,应用Akt抑制剂（LY294002、Wortmannin）阻断该信号通路后,PARP的相对表达 水平重新上调（P＜0.05）。结论 PDCD4表达下调能够通过pAKT/pGSK3β途径降低顺铂引起的胃癌细胞凋亡,进而 促进细胞顺铂耐药的形成。     

基于阻断蛋白质相互作用的抗肿瘤多肽研究进展

肿瘤的发病率在逐年增长,其中恶性肿瘤严重影响着人类的健康和生命。目前,临床上常规抗癌药物由于存在靶向性较低、毒副作用明显、容易产生耐药性等缺点,正在失去其一些治疗用途。而抗肿瘤多肽类药物拥有分子量小、靶向性强、特异性高、毒性弱、易于合成等特点,使其成为了治疗肿瘤的新方法。抗肿瘤多肽主要包括天然多肽、人工修饰多肽及人工合成多肽,其作用机制非常复杂,主要包括抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促肿瘤细胞凋亡,免疫调节等。该文从多肽通过阻断蛋白质相互作用发挥抗肿瘤作用这一机制进行概述。     

多药耐药基因MDR 1 和细胞自噬在 肿瘤多重耐药机制中的研究进展

肿瘤是威胁人类健康的恶性疾病。化疗是目前临床抗肿瘤最常用的治疗方法,化疗药物具有 较广的抗瘤谱。但肿瘤多重耐药的发生是导致化疗疗效不佳的主要原因。肿瘤多重耐药机制非常复杂,与 药物代谢、药物靶点改变、DNA 修复增强、细胞周期改变及肿瘤微环境等均有密切联系。其中多药耐药基 因MDR 1 表达的膜转运蛋白P- 糖蛋白参与的化疗药物逆向转用是多药耐药发生的重要机制之一,但是针 对MDR 1 的一些抑制剂并不能很好地解决肿瘤的耐药问题。近年来研究发现,细胞自噬直接参与肿瘤多药耐 药,联合调控MDR 1 的表达及肿瘤细胞自噬水平将可能改善肿瘤细胞的多重耐药。该文主要从多药耐药基因 MDR1 的表达调控及细胞自噬水平改变两方面综述肿瘤细胞多重耐药机制的研究进展。