PCR-SBT与IMS-ELISA法在强直性脊柱炎患者HLA-B27检测中的比较

目的 比较聚合酶链反应-直接测序法(polymerase chainreaction sequence-based typing,PCR-SBT)和磁珠酶联免疫法(immunomagnetic separation and enzyme-linked immunosorbent assay,IMS-ELISA)检测人类白细胞抗原B27(human leukocyte antigen B27,HLA-B27)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中的价值。方法 应用PCR-SBT法和IMS-ELISA法对120例疑似AS患者外周血进行HLA-B27检测。以SPSS17.0软件的配对χ²检验和受试者工作特征曲线下面积对两种方法检测HLA-B27在AS诊断中的价值进行评价。结果 120例疑似AS患者中,PCR-SBT和IMS-ELISA法HLA-B27检测阳性率分别为45.83%(55/120)和37.50%(45/120)。两种方法检测HLA-B27差异有统计学意义(χ²=59.455,P=0.000)。PCR-SBT法敏感度和特异度分别为96.36%和96.92%; IMS-ELISA法的敏感度和特异度分别为69.09%和89.23%。两者的AUC分别为0.966和0.792。结论与IMS-ELISA法相比,在AS的临床诊断中PCR-SBT法检测HLA-B27的敏感度和特异度更高,方法更优。     

HLA-B27表达量在评估强直性脊柱炎患者疾病状况中的作用

目的通过检测人类白细胞抗原B27(HLA-B27)蛋白表达量,结合强直性脊柱炎(AS)的疾病活动指数(BASDAI)评分,探讨HLA-B27表达量可能在AS疾病诊疗中的意义。方法收集120例临床疑似AS病例和50例健康体检者的一般临床资料,包括性别、年龄、家族史等,对所收集病例的全血采用磁珠酶联免疫法检测HLA-B27蛋白表达量。采用SPSS17.0数据分析软件进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果120例疑似AS患者中,临床最终确诊为AS患者55例,其中人类HLA-B27检测阳性者53例(96.36%);50例健康对照组中筛查HLA-B27检测阳性2例(4%)。53例HLA-B27阳性AS患者HLA-B27表达量与BASDAI进行相关性分析显示:BASDAI评分与HLA-B27蛋白质表达量(吸光度A值)呈正相关性(r=0.562,P=0.000)。结论在AS患者中HLA-B27表达量与AS疾病活动指数之间存在相关性,可以为疾病的状态评估提供参考。     

HLA-B27基因表达量及亚型分析在AS疾病评估中的意义

目的 探讨人类白细胞抗原(human leukocyto antigens,HLA)B27(HLA-B27)基因表达量及其亚型在强直性脊柱炎疾病诊疗中的意义。方法收集120例疑似强直性脊柱炎患者和50例健康体检者的临床资料,对所收集患者的全血采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HLA-B27基因相对表达量,在此基础上通过基因测序确认HLA-B27基因亚型。采用SPSS17.0软件对数据进行分析,P<0.05被认为差异有统计学意义。结果 120例疑似强直性脊柱炎患者中,确诊55例,其中HLA-B27阳性53例(96.36%),BASDAI评分与HLA-B27基因表达量具有相关性(r=0.845,P=0.000)。基因亚型分别为HLA-B27:04型29例(54.72%),HLA-B27:05型20例(37.74%),HLA-B27:02型2例(3.77%),HLA-B27:03型1例(1.89%),HLA-B27:07型1例(1.89%)。50例健康对照组中筛查HLA-B27阳性2例(4%),均为B27:04亚型。对HLA-B27:04和HLA-B27:05两种亚型患者年龄(t=0.711,P=0.480)、性别(χ²=0.880,P=0.348)、家族史(χ²=0.011,P=0.916)和治疗史(χ²=0.113,P=0.736)比较差异无统计学意义。结论 HLA-B27阳性AS患者以HLA-B27:04和HLA-B27:05为主。HLA-B27基因表达量与其疾病活动指数相关。     

吲哚-3-原醇对乙醛所致精密肝切片中星状细胞活化的影响

目的利用精密肝切片(PCLS)技术,研究吲哚-3-原醇(I3C)对乙醛活化肝星状细胞(HSCs)的作用及其机制。方法将200～800μmol.L-1的I3C及700μmol.L-1乙醛与PCLS共同孵育6h,免疫组化法分析肝切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,并检测培养液中谷胱甘肽S-转移酶(GST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达量及组织丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(Hyp)含量。结果200～800μmol.L-1I3C可不同程度的减少乙醛激活的HSCs,并可明显降低乙醛升高的培养液中GST、LDH活性和肝组织中MDA和Hyp含量(P<0.05或P<0.01),呈良好的浓度依赖性。I3C给药组与乙醛对照组比较,培养液中TGF-β1含量降低(P<0.01),MMP-1/TIMP-1蛋白表达比值升高(P<0.01)。结论I3C能有效拮抗乙醛所致的HSCs活化,其机制与降低细胞氧化应激和促进基质胶原降解有关。     

人β-防御素-3与人表皮生长因子融合蛋白的克隆及原核表达

目的:克隆融合蛋白d-EGF成熟链基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)表达体系中进行有效表达、分离纯化并鉴定其特异性。方法:以蛋白基因序列为基础,RT-PCR扩增人防御素-β和表皮生长因子基因,分别构建β-防御素-3(β-defensin-3)、EGF重组质粒,应用重组PCR方法,将EGF的DNA序列拼接到β-defensin-3 DNA序列的3'端,将基因克隆入原核表达载体pET-SUMO,构建重组质粒pET-SUMO-d-EGF。采用PCR、测序等方法鉴定后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni-trap柱纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果,最后以Western blot对其进行特异性鉴定。结果:成功构建β-defensin-3、EGF重组质粒,经重组PCR成功扩增出294 bp的目的片段,重组体PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导经SDS-PAGE分析得到28 kDa左右的目的蛋白条带。Western blot鉴定出融合蛋白含有抗EGF、β-防御素-3两种抗原特异性的蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET-SUMO-d-EGF,并获得纯化的融合蛋白,为进一步的活性分析奠定了实验基础。     

慢性乙肝患者血清趋化因子MCP-1浓度与病毒载量关系的研究

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达水平与HBV DNA载量之间的相关性.方法 用ELISA检测CHB患者和健康对照者血清中的MCP-1 蛋白浓度,以实时荧光定量PCR检测CHB患者血清中HBV DNA拷贝数.结果 CHB组血清中MCP-1浓度是157±80 ng/L,健康对照组MCP-1浓度是265±44 ng/L,CHB组血清中MCP-1浓度显著低于健康对照组,t=5.355,P＜0.001,差异有统计学显著性意义;CHB患者血清中MCP-1浓度与血清中HBV DNA拷贝数呈负相关(r=-0.602,P＜0.001).CHB患者血清中MCP-1的浓度是降低的,MCP-1浓度与血清中HBV DNA 载量之间呈负相关(r=-0.602,P＜0.001).结论 乙肝病毒与宿主细胞相互作用下调机体MCP-1表达,可能对HBV致病机理的研究提供一个新的视点.     

精密肝切片中乙醛活化肝星状细胞模型的建立

目的:在精密肝切片中利用乙醛激活肝星状细胞,建立一种星状细胞激活的体外模型,为研究和筛选阻抑肝纤维化发生的药物奠定基础。方法:利用振荡切片机制备精密肝切片,建立培养系统。以700μmol·L-1乙醛孵育切片,培养0、2、4、6h,测定培养基和组织匀浆中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)和羟脯氨酸(Hyp)含量,观察病理切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:与0h相比,乙醛培养2、4、6h培养基的GST、LDH漏出量均显著升高(P<0.05)。切片组织Hyp含量6h较0h相比明显升高(P<0.05)。免疫组化片镜下可见4、6h有α-SMA阳性细胞表达,图像分析显示面积和阳性率较0h明显增加(P<0.05)。结论:精密肝切片与终浓度为700μmol·L-1乙醛共孵育6h可活化切片中星状细胞,该技术可作为良好的体外肝星状细胞激活模型。α-SMA免疫组化是一鉴定体外星状细胞激活的可靠指标。