偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上TRPV1的表达变化

目的:观察TRPV1在偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上的表达变化。方法:取健康成年雄性SD大鼠60只,按随机数字法分为对照组(control组)、实验复方致炎剂(inflammation soup,IS)1 d组(IS 1 d组)、实验IS 3 d组(IS 3 d组)和实验IS 6 d组(IS 6 d组)。在雄性SD大鼠硬脑膜上埋置PE-10管,实验组分别给予1 d、3 d、6 d IS 20μl/d及对照组给予6天等量生理盐水。采用WesternBlot、免疫荧光法和Real-Time PCR法检测TRPV1在硬脑膜及三叉神经节上的表达情况。结果:对照组和实验组大鼠硬脑膜及三叉神经节上均可见TRPV1表达;与对照组相比,实验组硬脑膜、三叉神经节上TRPV1蛋白表达量、阳性细胞数及mRNA明显升高,以实验IS 6 d组最高(P<0.05)。结论:TRPV1在偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上的表达增加。TRPV1表达上调可能是偏头痛外周敏化的重要机制之一。     

氧化应激相关细胞衰老指标与骨关节炎的相关性探讨

目的 通过检测软骨细胞衰老相关指标,探讨软骨细胞衰老与骨关节炎(OA)发病的相关性。方法 选取2018年1月—2020年12月南京鼓楼医院骨科需手术住院的OA患者及非OA患者各6例,分离培养膝关节软骨细胞,分为正常软骨细胞组(对照组)、OA软骨细胞组(OA组),选P2代细胞分别进行β-半乳糖苷酶染色检测,收集细胞行流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位,定量PCR(qPCR)检测细胞P21、P53基因mRNA表达,采用Western blotting检测软骨细胞中P21、P53蛋白水平。结果 OA组软骨细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高,OA组ROS水平[(24.72±2.40)%]较对照组[(4.96±0.14)%]明显升高(P<0.01),OA组JC-1染色绿色荧光强度[(21.87±3.03)%]即细胞线粒体膜电位下降明显高于对照组[(3.13±0.25)%,P<0.01];OA组P21、P53基因mRNA表达量(2.72±0.21、2.90±0.23),较对照组表达量(1.00±0.03、1.00±0.06)显著增加(均P<0.05)。OA组周...     

教育与载脂蛋白E基因交互作用调节轻度认知障碍患者的认知功能和脑网络活性

目的：受教育水平和载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因均可影响认知障碍的发生,但两者的交互作用尚不明确。本研究旨在探讨受教育水平和ApoE基因对轻度认知障碍（mild cognitive impairment,MCI）患者的认知功能和默认网络（default mode network,DMN）的交互作用。方法：本研究数据来源于阿尔茨海默病神经影像学计划数据集。根据受教育水平和ApoE ε4等位基因（ApoE ε4,ApoE4）状态将MCI受试者分为4组,运用协方差法分析两者对认知功能和DMN的作用。结果：教育和ApoE基因型对MCI患者整体认知功能存在显著交互作用（P<0.05）：在低教育受试者中,非ApoE4携带者的整体认知功能优于携带者[23.00(22.50,25.50) vs. 22.00(21.00,24.00)],而在高教育受试者中则相反[23.00(22.00,26.00) vs. 25(22.75,26.25)]。另一方面,受教育水平与ApoE基因型对DMN的左侧颞中回的功能连接值（functional connectivity,FC）存在...     

电刺激硬脑膜对三叉神经节连接蛋白40表达和痛阈的影响

目的:探讨三叉神经节中连接蛋白40在偏头痛发作中的临床意义.方法:将健康成年SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验Oh组、实验12h组、实验24h组、实验48h组,采用电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜模型.应用免疫荧光和Western blot技术观察各组三叉神经节连接蛋白40表达,应用von frey纤维丝测定大鼠眼周皮肤的痛觉阈值.结果:免疫荧光显示实验Oh组、实验12h组、实验24h组连接蛋白40的表达均高于假手术组、对照组和实验48h组,于12h达表达高峰(P＜0.05).各组左右侧无统计学差异(P＞0.05).Western blot显示实验Oh组、实验12h组、实验24h组连接蛋白40的表达均高于假手术组、对照组及实验48h组(P＜0.05).各组左右侧无统计学差异(P＞0.05),于12h达表达高峰.Von Frey纤维丝测定显示实验组大鼠实验前1h、实验刺激后2h、12h、24h、48h左、右眼周皮肤的痛觉阈值呈先下降后上升的趋势,于12h达低点,48h基本恢复正常.结论:电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜可上调三叉神经节连接蛋白40的表达,降低大鼠面部的痛觉阈值,增强面部的痛觉敏化,表明连接蛋白40在偏头痛的发生及发展中可能起到一定作用.     

硬脑膜传入神经末梢敏化对初级感觉神经元电压门控型钙电流的影响

目的 探讨化学刺激硬脑膜传入神经末梢对大鼠三叉神经节神经元的高电压激活钙电流(HVA-ICa)的调控效应. 方法 雄性SD大鼠16只按随机数字表法分为生理盐水(NS)组和致炎剂(IS)+释放降钙素基因相关肽(CGRP)组(n=8),大鼠上矢状窦处脑膜给药造模1h后急性分离大鼠三叉神经节中小神经元,采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钙离子通道(VGCC)电流. 结果 与NS组钙电流峰电流[(-49.5±5.18)pA/pF]比较,IS+CGRP组[(-80.48±4.43) pA/pF]增高,差异有统计学意义(P＜0.05);IS+CGRP组神经元钙电流激活曲线的半数激活电压Val/2为(-20.9±0.4)mV,较NS组[(-16.2±0.5)mV]向超级化方向移动了4.7 mV,差异有统计学意义(P＜0.05); IS+CGRP组神经元钙电流的半数失活电压V1/2为(-12.4±0.2) mV,较NS组[(-22.5±0.3)mY]向去极化方向移动了10.1 mV,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 激活硬脑膜传入神经末梢诱导初级感觉神经元的外周敏化过程,突出表现为钙电流的增高.     

氟桂利嗪对原代培养大鼠皮质神经元钠离子通道电流的影响

目的探讨氟桂利嗪对大鼠皮质神经元电压门控钠离子通道电流的影响及机制。方法选择孕17¹8d SD胎鼠培养皮质神经元,应用全细胞记录式膜片钳技术记录神经元钠离子通道电流,先加入0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪刺激,后续实验使用1μmol/L氟桂利嗪刺激,比较加药前后钠电流相关曲线的变化。结果 0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪对峰值电流抑制率分别为(14.70±4.39)%,(43.48±3.21)%,(61.91±7.41)%和(77.01±5.80)%,差异有统计学意义(P<0.05),氟桂利嗪达到半数最大抑制率时的药物浓度为0.94μmol/L。与加药前比较,加药后钠电流失活曲线向超极化方向移动了17.03mV;钠通道复活时间常数由(7.51±0.05)ms增至(19.46±0.03)ms,差异有统计学意义(P<0.05);10Hz、50Hz脉冲频率下,加药后钠电流较加药前减少幅度分别为[(21.63±7.36)%至(9.44±5.13)%]和[(45.83±10.04)%至(12.56±6.72)%,P<0.05]。结论氟桂利嗪对皮质神经元钠电流的抑制效应,或能解释其预防偏头痛发作的另一可能机制。     

氟桂利嗪通过阻断三叉神经节神经元电压门控钠电流和钙电流抑制感觉神经元兴奋性

背景：氟桂利嗪已经被广泛应用于偏头痛的预防性治疗并取得巨大成功,但其作用机理不清。在偏头痛发作过程中,疼痛起源于三叉神经血管系统的激活。河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)钠通道和高电压激活型（high-voltage activated,HVA)钙通道在三叉神经血管系统激活和伤害信息的传递过程中发挥重要作用。本实验的研究目的是,通过观察氟桂利嗪对急性分离的小鼠三叉神经节神经元TTX-R型钠通道和HVA型钙通道的影响,探讨其预防性治疗偏头痛的可能机理。方法：我们应用全细胞记录式膜片钳技术检测电压门控钠电流和钙电流。应用配对t检验判断组间差异。结果：氟桂利嗪能够呈浓度依赖性地减小TTX-R型钠电流和HVA型钙电流的幅度,其半数最大抑制浓度分别为2.89和2.73μM,氟桂利嗪促使TTX-R型钠电流和HVA型钙电流的稳态失活曲线向超极化方向移动,此外,随着刺激频率的增加,氟桂利嗪对TTX-R型钠电流和HVA型钙电流的抑制率增大。结论：氟桂利嗪对这两种电流的影响能够解释其预防治疗偏头痛的外周机制。     

致炎剂诱发清醒大鼠反复发作头痛及对PAG区c-Fos表达的影响

目的:采用复方致炎剂(IS)定期刺激大鼠硬脑膜,建立一种清醒状态下大鼠反复发作性头痛模型.方法:在雄性SD大鼠硬脑膜上埋置PE-10管,连续6天给予IS或等量生理盐水.采用VonFrey毛测试大鼠眶周的压力疼痛阈值,将左侧硬脑膜行甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒比率,通过免疫组化染色技术对六次NS及IS和一次IS给药组大鼠的中脑导水管灰质(PAG)区域c-Fos阳性细胞进行计数观察.结果:随着IS刺激次数的增多大鼠的眶周压力疼痛阈值下降;肥大细胞脱颗粒比率较NS组明显增加(P<0.01); c-Fos阳性细胞数IS两组较NS组有显著差异(P<0.01),IS两组之间无差异(P>0.05).结论:反复给予复方致炎剂可以成功诱导大鼠反复发作性头痛,为慢性头痛转变机制研究提供了一种较好的实验模型.     

滑膜组织在脐带间充质干细胞治疗骨关节炎中的作用及机制

目的 探讨骨关节炎(OA)兔滑膜的改变及脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对OA的治疗作用及相关机制。方法 选取健康成年新西兰大白兔15只,分为对照组、OA模型组、UC-MSCs干预组3组,每组各5只。OA造模成功后给予干预组关节腔内注射UC-MSCs,干预4周后观察关节影像学改变及病理学改变;取各组滑膜组织通过免疫组化方法检测滑膜组织IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)等炎症因子的水平及细胞外信号调节激酶(ERK)等表达水平,并采用Western blot方法检测滑膜组织IL-6、MMP-13、ERK、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白等表达水平。结果 磁共振检查显示,与对照组相比,OA模型组兔膝关节滑膜明显增厚,关节腔积液明显增多;UC-MSCs干预组关节滑膜增厚、关节腔积液均较OA模型组明显改善。病理学观察显示,OA模型组关节滑膜炎性细胞较对照组明显增多,滑膜增生、水肿明显,UC-MSCs干预组较OA模型组滑膜炎性细胞浸润减轻,滑膜增生、水肿明显减轻。免疫组化结果显示,OA模型组兔滑膜IL-6、MMP-13、ERK水平较对照组明显升高(P<0.05)。UC-MSC...