应用SYBR实时荧光定量Real-Time PCR法检测人宫颈癌MCPH1mRNA表达

目的 应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法 提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因(MCPH1)及管家基因(GAPDH)的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相对表达量.结果 在31...     

干扰Bmi-1表达对宫颈癌Hela细胞TGF-β/Smads通路基因表达的影响

[目的]干扰Bmi-1对siRNA转染宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达影响,为寻找宫颈癌中Bmi-1的靶基因奠定基础.[方法]将Bmi-1 siRNA转染Hela细胞,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后Hela细胞中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达变化,对有明显变化的基因用Western Blot在蛋白水平进一步验证.[结果] Hela细胞中Bmi-1基因RNA干扰后,TGF-β表达上调,Smad3、Casp3和Casp6基因表达下调.[结论]沉默Bmi-1的表达可使宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Smad3、Casp3和Casp6的表达量均有不同程度的改变,Bmi-1基因在宫颈癌发生发展中可能与TGF-β/Smads信号通路有关.     

泌尿生殖系统整合课程改革的实践及课程整合的思考

本研究主要从教学内容、教学方法和评价体系三方面介绍重庆医科大学开展的泌尿生殖系统整合课程改革。在教学内容上将基础学科和临床学科中涉及泌尿生殖系统的部分提取出来加以整合。在教学实施环节跨科室组建教学团队,实行多学科联组教学。为了调动学生的学习热情,启发和培养学生的科研思维而改进教学方法,如运用病例引入式教学法、问题讨论及...     

启发式教学法在医学生理学教学中的应用

启发式教学能加强学生素质培养,培养学生良好思维习惯,激发学生创造力,它在医学生理学教学中具有重要作用.在医学生理学教学中从问题设计、提问方式、启发式讲授等方面运用启发式教学可以取得很好的教学效果.     

逆转录病毒载体介导的RNAi抑制Bmi-1基因表达对MCF-7细胞的影响

目的:研究RNA干扰(RNAi)抑制Bmi-1基因表达后对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡和增殖的影响.方法:将表达Bmi-1短发夹RNA(shRNA)的重组逆转录病毒载体pSuper-retro/Bmi-1si瞬时转染MCF-7乳腺癌细胞株,携带针对绿色荧光蛋白干扰序列的载体pSuper-retro/GFPsi作为阴性对照.用RT-PCR和Western Blot分别从mRNA,蛋白水平检测Bmi-1的表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测MCF-7细胞周期和凋亡的变化.结果:pSuper-retro/Bmi-1si明显抑制MCF-7细胞Bmi-1 mRNA及蛋白表达.与空白对照组及阴性对照组相比较凋亡细胞数无明显增加;抑制Bmi-1基因表达使MCF-7细胞G1/S周期转换及细胞增殖速率受抑制.结论:表达shRNA的重组逆转录病毒载体pSuper-retro/Bmi-1si能显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7中Bmi-1基因表达,从而有效抑制MCF-7细胞增殖,为乳腺癌的基因治疗提供了实验依据.     

鸭MCHR2的基因克隆及蛋白表达鉴定

目的筛查能够稳定表达黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因的动物,为构建动物模型提供实验依据。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜的鸭、Wista鼠、SD鼠、C3H10鼠、C57鼠、狗、羊、猪等大脑组织中提取总RNA,以此扩增MCHR2基因的全长cDNA编码区序列;利用Western blot检测鸭、犬和猪的大脑海马区及皮质区MCHR2蛋白的表达情况。结果通过RT-PCR获得鸭、犬、猪脑组织中的目的片段;通过Western blot验证了MCHR2蛋白在鸭脑组织中具有高表达。结论将鸭作为构建动物模型的对象,用于MCHR2基因的相关功能研究具有可行性。     

黑色素浓集激素受体2基因siRNA重组腺病毒载体构建及鉴定

目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)siRNA重组腺病毒载体,并在稳定表达MCHR2的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MCHR2的siRNA干扰序列,用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上,得到pSES-HUS-MCHR2siRNA,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MCHR2siRNA,在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,感染稳定表达MCHR2的CHO细胞株,RT-PCR及Western Blot检测腺病毒对细胞MCHR2表达的影响.结果:成功构建McHR2siRNA重组腺病毒载体.MCHR2siRNA重组腺病毒显著抑制CHO细胞中MCHR2的表达.结论:构建的Adeasy-MCHR2 siRNA腺病毒能有效地抑制CHO细胞中MCHR2表达,为研究MCHR2的功能及其与肥胖的关系提供了有效的工具.