GAB2蛋白促进SK-Mel28黑色素瘤细胞转移机制研究

目的 恶性黑色素瘤主要由皮肤黑色素细胞的恶性转化引起.Grb2协同结合蛋白2(Grb2-associated binding protein-2,GAB2)是一个脚手架蛋白,通过招募受体酪氨酸激酶等膜受体进行信号传递,已经证实GAB2蛋白与多种肿瘤的发生和转移有关,但GAB2蛋白抑制黑色素瘤的机制还不清楚.本研究通过沉默GAB2基因对SK-Mel28细胞转移能力的影响,探讨GAB2基因促进SK-Mel28黑色素瘤细胞转移的细胞信号转导通路变化.方法 采用RNA干扰技术沉默GAB2基因表达.采用Matrigel法检测SK-Mel28细胞在沉默GAB2基因表达后48 h对细胞转移能力的影响;采用细胞划痕实验检测SK-Mel28细胞在沉默GAB2基因表达后细胞迁移能力的改变;蛋白质印迹法检测PI3K和MAPK信号通路的关键蛋白、pAKT、pERK、pPDK1和 β-catenin的蛋白表达水平.结果 沉默GAB2基因可使SK-Mel28细胞的转移能力和迁移能力减弱,统计学分析显示,SK-Mel28细胞的转移能力降低了54.5%,与scramble RNA对照组比较差异有统计学意义,t=5.053,P<0.001;SK-Mel28细胞在转染GAB2 siRNA 18 h后细胞的迁移能力减弱,与scramble RNA对照组比较迁移距离减少了43.0%,差异有统计学意义,t=3.877,P=0.001.SK-Mel28黑色素瘤细胞的GAB2蛋白表达水平降低后,PI3K信号通路的关键分子pAKT和pPDK1表达下调,而T-AKT和T-PDK1无明显变化,细胞膜表面粘附因子β-catenin蛋白表达下降.结论 GAB2 蛋白的表达水平与 SK-Mel28 黑色素瘤的转移相关,其机制与 GAB2 蛋白调控下游的 PI3K 信号通路并抑制转移相关因子β-catenin 有关.     

BI2536对三阴性乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的研究Polo样激酶1(PLK1)抑制剂BI2536对雌激素受体阳性(estrogen receptor,ER)和三阴性乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测0~10 nmol·L~(-1)BI2536对HCC1806细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术分析BI2536对细胞周期进程的影响;采用Western Blotting技术检测BI2536对PI3K和MAPK信号传导通路的影响;软琼脂实验检测BI2536对细胞克隆形成能力的影响。结果 BI2536通过诱导HCC1806细胞发生G2-M期阻滞,同时抑制磷酸化AKT(p AKT)和磷酸化ERK(pERK)表达进而抑制细胞生长;BI2536可明显抑制HCC1806细胞的克隆形成能力,提示BI2536可抑制肿瘤的增殖和转移。结论 BI2536可以抑制三阴性乳腺癌细胞HCC1806的生长和转移,其机制与调控细胞周期阻滞、下调PI3K和MAPK信号通路有关,提示BI2536有望成为三阴性乳腺癌的靶向治疗药物。     

腰椎小关节三维角度与腰椎间盘突出症关系研究

目的：研究腰椎小关节横断面、矢状面及冠状面方向的空间变化在腰椎间盘突出症（lumbar disc hernia-tion,LDH）发生中的病因学意义。方法135例腰椎间盘突出症为突出组（LDH 组）,120例影像上无突出表现者为对照组。均采用 X 线及 CT 检查,在3个平面上测量2组 L3～S1小关节角度。结果在横断面上,LDH 组两侧小关节不对称比率明显大于对照组（P ＜0．05）,且小关节角更偏矢状位。在冠状位上,LDH 组两侧小关节不对称比率明显大于对照组（P ＜0．05）,且小关节角更偏竖直位。在矢状位上,LDH 组更偏水平位（P ＜0．05）。结论腰椎小关节形态与腰椎间盘突出症有一定的关系。     

软坚消瘿颗粒治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎实验研究思路与概况

目的:通过探究软坚消瘿颗粒制剂基础研究的过程与方法,总结研究过程中出现的问题及取得的成果。方法:回顾近十年张兰教授关于软坚消瘿颗粒制剂研发的进展,从软坚消瘿颗粒治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎的作用机制、中药制剂的药学、药效学研究、药物的急性毒性和长期毒性研究,总结研究思路与研究过程中出现的问题及成果。结果:1、软坚消瘿颗粒作用机制:通过降低TG-Ab、TPO-Ab水平,调节细胞因子Th1/Th2,减少甲状腺组织的损害2、药学药效学:观察大鼠的自身抗体、白介素-1、4、6及肿瘤坏死因子-A的影响,证实本药物具有降低自身抗体水平的作用3、急毒及长毒:观察大鼠半数致死量(LD50)、体重、脏器系数及织病理学的结果,证实该药物是否可以长期应用于临床结论:软坚消瘿颗粒制剂对慢性淋巴细胞性甲状腺炎具有一定的治疗作用,能够缓解或逆转疾病的发展,疾病是通过降低自身抗体水平来达到治疗效果,下一步课题组将针对病证结合慢性淋巴细胞性甲状腺炎进行进一步的研究。     

软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎模型大鼠Treg和 Th17细胞因子表达的影响

目的：观察软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎（HT）大鼠Treg和Th17特异性转录因子及细胞因子表达的影响,探讨软坚消瘿颗粒对HT的治疗作用及其免疫学作用机制。方法：采用随机数字法将48只SD大鼠分为正常组（12只）和造模组（36只）。采用高碘饮水联合甲状腺球蛋白皮下注射方法建立HT大鼠模型,再结合慢性束缚应激、过度疲劳、饮食失节等复合方法制备肝郁脾虚模型。造模后,造模组大鼠随机分为模型组、雷公藤组和软坚消瘿组,每组12只,连续给药8周。去除实验期间死亡大鼠和不合格标本,每组留取10只检测结果,观察各组大鼠一般情况;末次给药后采集大鼠腹主动脉血和甲状腺组织,采用ELISA法检测大鼠血清甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、甲状腺过氧化酶抗体（TPOAb）、血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素释放激素（TRH）和超敏促甲状腺激素（TSH）水平及血清白细胞介素10（IL-10）、IL-17和IL-23水平;HE染色法检测各组大鼠甲状腺组织病理形态表现;Western blotting法检测各组大鼠甲状腺组织中Foxp3和RORγt蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组、雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平升高（P<0.05）;血清FT3、FT4和TRH水平降低（P<0.05）,TSH水平升高（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平降低（P<0.05）,RORγt蛋白表达水平升高（P<0.05）;血清IL-10水平降低（P<0.05）,IL-17和IL-23水平升高（P<0.05）。与模型组比较,雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低（P<0.05）;大鼠血清FT3、FT4和TRH水平升高（P<0.05）,TSH水平降低（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高（P<0.05）,RORγt蛋白表达水平降低（P<0.05）;血清IL-10水平升高（P<0.05）,IL-17和IL-23水平降低（P<0.05）。与雷公藤组比较,软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低（P<0.05）;血清FT3、FT4和TRH水平升高（P<0.05）,TSH水平降低（P<0.05）;甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高,RORγt蛋白表达水平降低,但差异无统计学意义（P>0.05）;血清IL-10水平升高（P<0.05）,IL-17和IL-23水平降低（P<0.05）。正常组大鼠甲状腺滤泡形态规则,结构完整,无淋巴细胞浸润;模型组大鼠甲状腺滤泡腔扩大,滤泡结构大量破坏,滤泡腔内及周围可见大量淋巴细胞浸润;雷公藤组甲状腺滤泡腔扩大,部分滤泡结构破坏,滤泡腔内及周围有少量淋巴细胞浸润,浸润程度轻于模型组;软坚消瘿组甲状腺病理形态学改变与雷公藤组类似,滤泡腔内及周围亦有少量淋巴细胞浸润。结论：软坚消瘿颗粒可以通过调节Treg和Th17特异性转录因子Foxp3和RORγt蛋白及其相关细胞因子的表达,对肝郁脾虚型HT大鼠起治疗作用。