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目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Myo10蛋白敲除稳定细胞系,探讨Myo10对结肠癌细胞SW620形态、增殖和细胞周期的影响。方法:根据sgRNA设计网站选择并合成5对针对人Myo10基因的sgRNA序列,经退火形成双链后,用T4DNA连接酶将其与经BsmBⅠ线性化的Lenti-CRISPR v2慢病毒载体连接,包装成病毒感染SW620细胞。经嘌呤霉素筛选后用Western Blot检测Myo10的表达,选择敲除效率最高的sgRNA序列,进行单克隆细胞筛选,最后再用Western Blot验证Myo10是否敲除。用显微镜、Rhodanmine phalloidin细胞染色观察细胞形态;CCK-8实验及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期变化。结果:经测序鉴定成功构建了5对sgRNA-LentiCRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myo10完全敲除的SW620细胞系。敲除Myo10的SW620细胞形态变圆,其增殖能力明显减弱,细胞周期S期比例增加。结论:成功构建Myo10完全敲除的SW620稳定细胞系;Myo10可影响SW620细胞形态和增殖能力;该实验为后续深入探讨Myo10作为结直肠癌潜在靶向基因的机制研究奠定了基础。 相似文献
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目的：探讨全脑放疗（WBRT）、立体定向放射外科（SRS）在治疗非小细胞肺癌(NSCLC)局限性脑转移患者的临床疗效。方法：回顾性分析近4年来武汉大学中南医院肿瘤放化疗科91例NSCLC局限性脑转移患者的临床资料。依据不同放疗方式,将其分为WBRT+SRS、WBRT、SRS组。对3组患者治疗疗效进行比较,分析不同放疗方式对NSCLC局限性脑转移患者总体生存时间（OS）及颅内局控时间（IPFS）的影响。结果：共纳入患者91例,其中WBRT+SRS组10人,WBRT组55人,SRS组26人,中位随访时间13个月。各组中位OS依次为17.5、16.0、12.5个月,组间脑部放疗后OS无显著差异（P=0.492）;各组中位IPFS依次为11.5、7、6个月,WBRT+SRS组较WBRT、SRS组显著延长（P=0.034）。多因素分析显示,颅外病灶控制情况、全身治疗方式（靶向治疗、化学治疗）是影响OS的主要预后因素;放疗方式是影响IPFS的主要预后因素。结论：WBRT联合SRS对NSCLC局限性脑转移患者颅内病情的控制有较好的疗效,但WBRT+SRS、WBRT、SRS组间无显著生存差异。颅外病灶... 相似文献
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目的:探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。方法:蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组),并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型... 相似文献
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目的 ：探讨Neogenin在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及患者预后中的临床价值,及其参与NSCLC发生发展的机制。方法：利用癌症基因组图谱（TCGA）的测序数据评估NSCLC中Neogenin表达水平与癌旁正常组织是否有差异;KM-plotter数据库的资料预测Neogenin在NSCLC及其不同组织亚型中的预后作用;进一步利用真实世界NSCLC的临床病理资料验证Neogenin及其配体排斥导向分子C(RGMc)在癌组织中的表达水平及其与临床病理学特征的关系。使用Cox回归分析评估探讨Neogenin、RGMc在NSCLC患者预后中的临床价值。并采用质粒构建及体外转染模型,利用共聚焦显微镜技术初步研究Neogenin参与NSCLC形成的可能机制。结果：Neogenin在NSCLC组织中表达明显下调（P<0.05）。RGMc在正常组织与癌组织中的表达并无明显差异;Neogenin表达下调与病理组织学分级、临床分期及患者不良预后显著相关（P<0.05）。体外细胞转染模型显示Neogenin通过调控胞内RGMc的转运及分布参与了RGMc介导的相关信号通路。结论：Neo... 相似文献
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目的:探讨钙黏蛋白S100A10对人乳腺癌SK-BR-3、MCF-7细胞增殖能力的影响.方法:通过慢病毒感染构建稳定过表达S100A10的SK-BR-3、MCF-7细胞系,并用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(Western Blot)检测过表达效率;通过细胞增殖实验、平板克隆实验检测S100A10对细胞增殖... 相似文献
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