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在枯草芽孢杆菌突变株D-756发酵生产D-核糖过程中,采用葡萄糖和葡萄糖酸钙混合发酵,葡萄糖酸作为pH调节剂,能促进菌体的生长,显著地提高D-核糖的产量。经酶活测定,发现流加葡萄糖酸能提高单位发酵液中葡萄糖酸激酶的酶活。在5L发酵罐中,利用葡萄糖酸维持发酵pH值在7.2,培养72h后产核糖76.8g/L。 相似文献
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目的 为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能,设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s,筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒.方法 根据已知的ssp411 mRNA序列,选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列,克隆到含有U6启动子的载体pRNAT-U6.1中并测序分析.用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞,24h后,荧光倒置显微镜观察转染效率,并收集细胞,通过实时定量PCR方法检测不同干扰质粒对ssp411 mRNA的干扰效果.结果 3个ssp411的siRNA片断被成功克隆到pRNAT-U6.1质粒载体中,插入片段测序结果与设计的序列完全一致.实时定量PCR结果表明,针对ssp411基因蛋白编码区3-22序列构建的干扰质粒效果最好,干扰效率可达71%.结论 成功构建了能表达ssp411 shRNA(small hairpin RNA)的重组质粒,同时通过共转染技术,筛选到一个干扰效果达70%以上的干扰片断,为建立转基因RNA干扰小鼠模型,在体内研究ssp411基因及蛋白的生殖生物学功能打好基础. 相似文献
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胞苷生产菌的选育及发酵 总被引:1,自引:0,他引:1
目的选育胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌,提高胞苷发酵单位,并对间歇补料分批发酵方式进行了初步研究。方法(1)以胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌CDS36为突发菌株,对其进行紫外诱变,经6-杂氮尿嘧啶(6AU)、5-氟胞苷(5FCR)等进行定向抗性筛选;(2)采用间歇补料分批发酵,葡萄糖初始浓度10.0%,48h后补加10.0%,72h补加5.0%的补料方式培养,并测定发酵单位。结果(1)通过紫外诱变和抗性筛选得到了6-杂氮尿嘧啶、5-氟胞苷抗性的突变株CDS36—800—17,抗6-杂氮尿嘧啶和5-氟胞苷的临界浓度分别为1000mg/L和800mg/L;(2)通过间歇补料分批发酵方式发现培养96h,胞苷发酵单位可达4.86g/L,培养120h可达5.58g/l,比未经补料分批发酵时提高了20.0%。结论(1)筛选获得胞苷发酵单位较高的突变株CDS36—800—17,并具有较好的遗传稳定性,可稳定发酵;(2)间歇补料分批发酵方式可提高胞苷产量。 相似文献
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目的用精子DNA完整性评价NaOH溶液对小鼠精子进行头尾分离的最优条件。方法取2~3月龄雄鼠附睾尾精子,稀释到合适浓度(5×10^6~10×10^6/ml),0~37℃下,加入不同浓度NaOH溶液孵育,显微镜下观察精子的头尾分离率,流式细胞仪检测精子的质膜完整性及DNA完整性。结果NaOH对精子头尾分离的效果,与碱浓度、作用时间和作用温度呈正相关,作用温度越高,时间越长,头尾分离效果越好,但同时对精子DNA的损伤程度也就越大。本研究证实精子在10mmol/LNaOH溶液,0℃下孵育2h,精子头尾分离的效率可达55%,而精子DNA损伤与空白对照相比,则无显著性差异。结论在本研究条件下低浓度NaOH处理小鼠精子,方法简单易行,可有效去除小鼠尾巴,而又不使其DNA受损。 相似文献
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用硫酸铵分级沉淀法从木瓜粉提取液中分离木瓜蛋白酶,将其偶联在对氨基苯磺酰乙其次 联琼脂上,制得固定化木瓜慢白酶。实验结果表明;木瓜蛋白酶与ABSE-交联琼脂的最佳结合量是每克干交联琼脂14.0μmol/s,固定化酶的最适反应pH为8.0,最适反应温度为75℃,Km为67.6mmol/L。 相似文献
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将瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)中的N-脱氧核糖转移酶II的基因(ntd)克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中,构建原核表达系统,成功地得到一株大量表达N-脱氧核糖转移酶II的菌株PND。以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,该重组菌可大量表达N-脱氧核糖转移酶II。在此酶作用下,以5-杂氮胞嘧啶和脱氧胸苷为底物,生成胸腺嘧啶和目标产物5-杂氮-2’-脱氧胞苷。最佳反应条件为:底物浓度均为2 mmol/L, 20 mmol/LTris-HCl缓冲液(pH为7.1), 相似文献